周梦莹
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 供职机构：四川大学华西公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 响应曲面优化-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测粪便中诺如病毒被引量：3
- 2013年
- 建立了粪便中诺如病毒逆转录PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测方法。根据诺如病毒核酸保守序列选择引物，扩增出特异的PCR产物；采用响应曲面法进行毛细管电泳条件优化，以含有DNA荧光染料SYBRGold的0．5％甲基纤维素为筛分介质，通过激光诱导荧光法检测诺如病毒的PCR产物。在优化的毛细管电泳条件下，9min内可完成诺如病毒PCR产物的检测。扩增产物测序后，与基因库中诺如病毒的序列进行同源性比对，一致性达99％。迁移时间的日内和日间相对标准偏差分别为1．1％-1．3％和1．8％-2．6％，已用于粪便中诺如病毒的快速检测。
- 阮佳许欣孙成均刘亚攀周梦莹李永新
- 关键词：诺如病毒逆转录PCR毛细管电泳激光诱导荧光检测
- 三种李斯特菌菌体蛋白提取方法的比较被引量：9
- 2015年
- 通过对3种李斯特菌菌体蛋白提取方法主要是破壁方式的比较,找到一种可高效提取李斯特菌菌体蛋白的方法,为该菌的深入研究提供可靠技术。以绵羊李斯特菌新鲜液体培养物为材料,收集菌沉淀,分别选用3种破壁方式破除细胞壁,三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)-丙酮沉淀法沉淀破壁液中的菌体蛋白,采用聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western-blot分析所得菌体蛋白。溶菌酶-超声破壁-TCA-丙酮沉淀法提取得到的李斯特菌菌体蛋白SDS-PAGE条带清晰丰富,Western-blot条带特异。溶菌酶-超声破壁-TCA-丙酮沉淀法可有效提取李斯特菌菌体蛋白,满足常用蛋白分析技术的要求,是一种提取李斯特菌菌体蛋白的可靠方法。
- 徐宗凯林青青周梦莹刘思静黄耀李文熙李兴桥余倩汪川
- 关键词：李斯特菌蛋白质
- 李斯特菌载体结核疫苗候选株基因重组构建及蛋白表达验证被引量：2
- 2016年
- 目的基因重组构建以单增李斯特菌、绵羊李斯特菌为载体的新型结核疫苗候选株,并进行蛋白表达验证,为结核疫苗研究和结核防控提供新思路和新方法。方法以体外基因连接、质粒转化等技术,将本实验室已有的分别编码结核抗原Ag85C、ESAT-6蛋白的两种基因盒,插入携带单增李斯特菌、绵羊李斯特菌同源序列的打靶质粒中。将打靶质粒电转化单增李斯特菌、绵羊李斯特菌,在42℃和30℃连续传代,利用同源重组杂交原理和基因打靶技术,将打靶质粒携带的两种编码结核抗原的抗原基因盒,分别整合至致病基因(actA和plcB)被敲除的单增李斯特菌、绵羊李斯特菌减毒株及未经减毒的绵羊李斯特菌基因组中。重组菌经蓝白斑、抗生素抗性及PCR筛选,再经Western blot检测其菌体蛋白及分泌蛋白的表达情况。结果构建了携带抗原基因盒的重组菌株5株,其重组基因序列PCR验证结果均符合预期,且测序验证成功;重组菌不携带红霉素抗性基因,表型特征符合预期;其中,重组菌Li-Rv0129c、Li-ΔactAplcB-Rv0129c按预期表达了结核杆菌Ag85C抗原蛋白,Li-ΔactAplcBRv3875按预期表达了结核杆菌ESAT-6抗原蛋白,Lm重组菌未表达相应结核抗原蛋白。结论成功构建并筛选得到3株以绵羊李斯特菌为载体的、携带结核杆菌Rv0129c(编码Ag85C)抗原基因盒或Rv3875(编码ESAT-6)抗原基因盒,且表达相应抗原蛋白的新型结核疫苗候选株。
- 任晨艳刘思静蒲启康蒋明娟周梦莹汪川
- 关键词：李斯特菌结核疫苗
