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肖敏
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1
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供职机构:
温州医学院
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发文基金:
浙江省自然科学基金
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
朱珊丽
温州医学院基础医学院分子病毒与...
张丽芳
温州医学院基础医学院分子病毒与...
陆丽君
温州医学院基础医学院分子病毒与...
孟锐锋
温州医学院基础医学院分子病毒与...
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朱珊丽
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肖敏
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1篇
2009
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密码子优化的HPV6b L1 DNA诱导BALB/c小鼠产生增强的免疫应答
2009年
目的探讨真核细胞偏好密码子优化对人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6b型L1 DNA诱导BALB/c小鼠特异性体液和细胞免疫应答的增强效应。方法利用PCR从尖锐湿疣组织中扩增HPV6b L1基因,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建野生型pcDNA3.1(+)/HPV6bLl(wt)并进行鉴定;同时,对HPV6b L1基因进行真核细胞偏好密码子优化,进一步通过重叠PCR的方法获得全长基因,构建密码子优化的重组质粒pcDNA3.1(+)/HPV6bLl(rood.)并进行鉴定。将6~8周龄雌性BALB/c小鼠分成4组,分别肌肉注射3次pcDNA3.1(+)/HPV6bLI(mod.)、pcDNA3.1(+)/HPV6bL1(wt)、pcDNA3.1(+)载体和PBS,间隔2周,每次剂量为150μg/鼠。分别于免疫前和免疫后每隔2周,收集血清,用间接ELISA检测血清IgG抗体;并于第8周取小鼠脾细胞,采用乳酸脱氢酶释放法,按效应细胞与靶细胞之比(E:T)为5:1、10:1、20:1进行免疫小鼠特异性CTL杀伤活性检测。结果成功构建了密码子优化的HPV6b L1重组质粒。小鼠免疫后血清特异性IgG抗体水平随着免疫时间和次数的增加而升高。pcDNA3.1(+)/HPV6bLl(mod.)组血清IgG抗体在第8周达到高峰,与pcDNA3.1(+)/HPV6bLl(wt)、载体和PBS对照组相比差异均有统计学意义(t=18.138、t=29.140、t=30.840,P值均〈0.01);而pcDNA3.1(+)/HPV6bLl(wt)组与载体和PBS组比较差异也有统计学意义(t=20.072、t=22,457,P值均〈0.01)。在特异性CTL杀伤实验中,当E:T分别为5:1、10:1、20:1时,pcDNA3.1(+)/HPV6bLI(mod.)组的脾细胞特异性CTL杀伤率明显高于pcDNA3.1(+)/HPV6bLl(wt)组(t=11.892、t=15.329、t=2.911,P值均〈0.05)、载体组(t=12.936、t=16.613、t=13.901,P值均〈0.01)和PBS对照组(t=14.768、t=18.935、t:10.925,P
陆丽君
石朝辉
孟锐锋
朱珊丽
肖敏
张丽芳
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密码子
抗体生成
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