李鹏程
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种改良大鼠骨髓间充质干细胞培养方法被引量：2
- 2017年
- 目的建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离、改良培养、纯化方法,并进行细胞形态学观察、表面标志物鉴定及多向分化能力检测。方法通过改良全骨髓贴壁法对4周龄SD雄性大鼠脱颈处死,无菌条件下分离出骨髓进行原代培养、消化传代培养及纯化。对BMSCs进行形态学观察,收获第四代BMSCs进行流式细胞仪检测其细胞表面标记物CD90、CD29、CD34、CD45的表达率及向成脂方向诱导分化。结果 BMSCs的原代培养形态学观察可见骨髓细胞接种于培养皿后,细胞呈圆型,大小不一,悬浮于培养液中。24 h后部分细胞开始贴壁,呈圆形、梭形或多角形。通过换液去除未贴壁的杂质细胞,可见短梭形、星形细胞分散贴壁生长,四五天可见放射状排列的细胞集落,伸出长短不一、粗细不均的突起,梭形细胞为主,胞浆丰富,胞核大、核仁清晰。7~8 d细胞呈集落生长,融合80%~90%,呈漩涡状,同向排列,9~10 d细胞排列紧密,逐渐融合成片。传代培养可见消化传代后,传代细胞24 h完全贴壁生长。细胞形态均一,呈梭形生长,细胞生长旺盛。四至五天可传代1次。可稳定连续传代7代以上,细胞形态及生长速度未见明显变化。BMSCs表面标记物的表达通过流式细胞仪检测结果显示,培养的第4代大鼠BMSCs均一表达CD90,CD29,阳性率分别为96.9%,96.6%;而CD34,CD45,呈阴性,阳性率分别为0.395%,7.56%。BMSCs加入成脂诱导剂后18 d,诱导而成的脂肪细胞累积脂质,脂滴变大,合并呈串珠状,经油红O染色呈鲜红色。结论与传统全骨髓贴壁法相比,改良后的全骨髓贴壁法操作步骤简单,降低离心对细胞的损害,减少了污染机会,节省经费,且分离的BMSCs细胞活性高,可大量分离、纯化、扩增,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。可为组织器官缺损性疾病、恶性肿瘤等的治疗和组织工程提供充足的种
- 王博荣鲁曦张敏龙李聪聪李鹏程王雅宁金发光
- 关键词：骨髓间充质干细胞原代培养形态学分化
- β-catenin过表达的间充质干细胞对改善海水吸入型肺损伤治疗效果的研究被引量：3
- 2018年
- 目的构建过表达β-catenin的慢病毒载体并建立大鼠MSCs稳转细胞株;研究过表达β-catenin的MSCs对损伤的肺泡上皮细胞的修复作用,以及对治疗海水吸入型肺损伤(seawater inhalation induced acute lung injury,SWI-ALI)大鼠模型的疗效。方法 MSCs转染:MSCs(2×105/孔)接种于六孔板过夜培养,慢病毒转染。转染慢病毒载体的MSCs表达稳定性和转染效率检测。雄性SD大鼠36只随机分为四组(每组9只),分别为空白对照组、SWI-ALI模型组、MSCs治疗组、MSCs-Ctnnb1治疗组。造模后4 h取各组肺组织标本进行苏木精-伊红染色(Hematoxylin and eosin staining,HE staining)行病理组织学检查评估肺损伤。NIR815染料标记对照组MSCs和过表达组MSCs-Ctnnb1干细胞,注入两组SWI-ALI大鼠模型气道,分别在干预后12、48 h行体外近红外光谱肺部成像对比干细胞定殖效果。最后进行数据统计分析。结果构建活化β-catenin的慢病毒稳转大鼠MSCs细胞株:培养至第10代,通过荧光显微镜观察检测转染有目的基因的MSCs表达感染效率仍大于90%。动物实验:病理损伤评估:海水吸入型肺损伤大鼠肺组织标本经苏木精-伊红染色镜下观察到肺泡壁增厚,肺泡间质炎性浸润,肺泡充血、水肿。这些组织病理学特征在MSCs治疗组和MSCs-Ctnnb1治疗组海水干预后4 h比SWI-ALI模型组明显缓解。MSCs-Ctnnb1治疗组比MSCs治疗组病理改善效果更好。MSCs在肺内定殖:MSCs治疗组和MSCs-Ctnnb1治疗组大鼠在海水干预后12 h和48 h肺组织进行体外近红外光谱成像追踪肺内MSCs,MSCs-Ctnnb1治疗组比MSCs治疗组海水干预后12 h和48 h荧光信号表达更强,定殖效果更好。结论通过β-catenin过表达激活经典Wnt/β-catenin通路提高间充质干细胞的增殖及向受损肺组织的迁移能力,增加MSCs在肺内的定殖、缓解病理损伤,并提高MSCs对SWI-ALI的治疗效果。
- 王博荣李鹏程刘菲金发光
- 关键词：海水淹溺间充质干细胞WNT/Β-CATENIN信号通路
- 植物乳杆菌促进黑腹果蝇生长发育被引量：9
- 2017年
- 【目的】检测乳酸菌对果蝇发育历期的影响,进一步探讨其对果蝇促生长的分子机制。【方法】利用选择性培养基MRS从黑腹果蝇Drosophila melanogaster体内分离乳酸菌,利用革兰氏染色、生化方法及16S rRNA基因进行鉴定;通过体内定植和世代传递实验验证该菌是黑腹果蝇的共生菌;采用悉生模型检测乳酸菌对黑腹果蝇发育的促生长作用;利用实时定量PCR技术检测黑腹果蝇体内促前胸腺激素基因PTTH和胰岛素通路相关基因InR的表达水平;利用葡萄糖试剂盒检测血淋巴液葡萄糖浓度。【结果】从黑腹果蝇中分离到的菌株鉴定为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum FY1菌株(Gen Bank登录号:KY038178),可在黑腹果蝇肠道内定植,每个肠道定植量约为104CFU,并能在世代间稳定传递。FY1菌株体外发酵可降低p H值至5.2,可诱导无菌果蝇卵至蛹发育时间由20.0 d缩短至6.9 d,卵至成虫发育时间由30.0 d缩短至10.7 d,其生长速率是无菌果蝇的约2倍。实时定量PCR结果表明,FY1菌株显著地提前了PTTH表达高峰期,同时降低果蝇中InR表达水平,血淋巴液葡萄糖浓度从5.1 mg/mL降低至2.7 mg/mL。【结论】植物乳杆菌是黑腹果蝇的一种益生菌,推测能通过胰岛素信号通路促进宿主黑腹果蝇的生长和发育。
- 李玉娟苏琬真胡坤坤李鹏程刘威姚红
- 关键词：植物乳杆菌黑腹果蝇共生菌肠道
- TGF-β1和TNF-α协同刺激诱导人支气管上皮细胞优化上皮间质转化模型
- 2017年
- 目的探索转化细胞生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)协同刺激诱导人气管上皮细胞(human bronchial epithelial cell,HBE)细胞,优化上皮间质转化细胞模型的效果。方法采用空白对照、TGF-β1 10 ng/ml、TNF-α10 ng/ml、TGF-β1 10 ng/ml+TNF-α10 ng/ml刺激诱导HBE细胞24 h后,观察细胞的变化。采用CCK8、细胞迁徙、蛋白印迹实验来实现。结果 TGF-β1+TNF-α协同诱导下大多数细胞从鹅卵石样形态变化为梭形、边界消失、间隙明显增宽。空白对照组、TGF-β1 10 ng/ml组、TNF-α10 ng/ml组、TGF-β1 10 ng/ml+TNF-α10 ng/ml组的细胞迁移距离分别为(420.06±10.38)μm、(499.86±34.00)μm、(514.93±10.56)μm和(569.68±33.58)μm。TGF-β1+TNF-α组与对照组、TGF-β1、TNF-α的差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1+TNF-α协同诱导时,上皮标志物E-cadherin明显降低,间质标志物Vimentin明显升高。结论在HBE细胞中采用TGF-β1和TNF-α协同诱导可以优化细胞上皮间质转化模型。
- 何铭朱恺段洪涛李鹏程闫小龙张志培李小飞
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α上皮间质转化
- 海水干预下人肺泡上皮细胞活性氧及内质网应激水平的变化被引量：1
- 2016年
- 目的探讨海水对人肺泡上皮细胞中活性氧(ROS)和内质网应激(ER stress)水平的影响。方法以含不同浓度海水(20%、40%、60%、80%)的培养液刺激人肺泡上皮细胞系A549细胞1 h后更换培养液,3 h后CCK-8法检测海水对细胞的毒性;以25%浓度海水刺激A549细胞1 h后,不同时间点(2 h、4 h、6 h、8 h)应用CCK-8法检测海水对细胞的毒性,Western Blotting法检测内质网应激特异蛋白GRP78蛋白表达情况,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化情况。结果以不同浓度海水刺激A549细胞时,细胞活性受抑制程度呈明显的浓度依赖性,海水处理组与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞在受到短暂海水刺激后恢复时,细胞活性依然受到明显抑制,在4 h抑制最显著,之后逐渐恢复,2 h、8 h组与0 h组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);而4 h、6 h组与0 h组相比较,差异有统计学意义(P<0.05);同时细胞内活性氧类(ROS)含量增多,内质网应激相关蛋白GRP78表达量增加,且都在4 h达到峰值。结论海水干预可抑制人肺泡上皮细胞增殖活性,而内质网应激和活性氧类参与了海水引起的A549细胞损伤过程。
- 李鹏程李聪聪鲁曦王博荣李玉娟何铭金发光
- 关键词：急性肺损伤内质网应激
