- siRNA沉默结肠癌转移相关基因1表达对人类卵巢癌细胞株侵袭转移的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 检测结肠癌转移相关基因1（MACC1）在卵巢癌细胞株中的表达,并探讨用siRNA技术抑制其表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响.方法 应用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）及Western blot法检测OVCAR3、ES-2、SKOV3、HO-8910卵巢癌细胞株中MACC1的表达,合成MACC1特异性siRNA并转染OVCAR3细胞,利用RT-qPCR筛选并鉴定MACC 1基因有效沉默后,应用体外黏附实验、Transwell迁移及侵袭实验、体外血管拟态实验检测MACC1基因沉默后OVCAR3细胞的体外黏附、迁移、侵袭及血管生成能力的变化.结果 OVCAR3细胞较其他卵巢癌细胞株高表达MACC1.MACC1基因沉默后,OVCAR3细胞的体外黏附能力受到不同程度的抑制;Transwell迁移实验中,MACC1 siRNA干扰的OVCAR3细胞（干扰组）转入底层膜的细胞数为（245.5±12.8）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（500.3±16.5）、（496.3±13.1）个,均P＜0.05]; Transwell侵袭实验中,干扰组转入底层膜的细胞数为（185.3±14.1）个,低于阴性对照组和空白对照组[分别为（405.7±9.1）、（416.3±11.5）个,均P＜0.05];体外血管拟态显示干扰组细胞多呈散在分布,连接减少,形成的完整结构少.结论 利用siRNA技术抑制MACC1基因表达可有效抑制卵巢癌OVCAR3细胞的体外转移和侵袭能力,MACC1有望成为卵巢癌治疗的靶基因.
- 李祯生秀杰孙曼汪志辉刘启才
- 关键词：卵巢肿瘤肿瘤转移RNA干扰
- 人肝细胞生长因子受体启动子荧光素酶表达载体的构建及活性测定
- 2013年
- 目的构建含人肝细胞生长因子受体(C-MET)启动子-223^+60区域的荧光素酶报告基因质粒,并测定其在卵巢癌细胞株中的活性。方法应用PCR法扩增获得含有人C-MET基因启动子-223^+60区域的DNA片段,将其连接至荧光素酶质粒pGL3-Basic中,得到pGL3-C-MET-Promoter重组质粒;经限制性内切酶酶切及测序得以鉴定;将该质粒转染4株卵巢癌细胞,检测细胞中荧光素酶的活性。结果双酶切及测序结果证实pGL3-C-MET-Promoter重组质粒插入片段序列正确,克隆的C-MET基因片段具有启动子活性,在卵巢癌细胞株OVCAR3细胞中的活性最高。结论成功构建了pGL3-C-MET-Promoter报告基因重组质粒,为进一步研究C-MET对卵巢癌生物学行为的影响奠定了基础。
- 李祯生秀杰孙曼汪志辉刘启才
- 关键词：肝细胞生长因子受体卵巢癌启动子
- 结肠癌转移相关基因1与肿瘤被引量：1
- 2013年
- 结肠癌转移相关基因1（MACC1）为新近发现的调节肿瘤生长和转移的基因，在多种恶性肿瘤中异常表达，其编码蛋白作为HGF-MET信号通路的一个关键调节因子，可明显增强肿瘤细胞的侵袭及转移能力。
- 李祯生秀杰
- 关键词：肿瘤肿瘤转移
- siRNA下调LSD1基因对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和周期的影响被引量：1
- 2013年
- 目的应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)基因的表达,探讨其对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和生长周期的影响。方法采用脂质体介导法将LSD1-siRNA转染卵巢癌OVCAR-3细胞;实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)和Western blot法检测基因的表达;MTT法检测细胞增殖能力;FCM分析细胞周期。结果成功转染LSD1-siRNA后,OVCAR-3细胞中LSD1 mRNA和蛋白表达均明显下降;细胞增殖明显抑制;G_2/M期细胞比例增加。结论 LSD1-siRNA可显著下调LSD1基因在卵巢癌OVCAR-3细胞中的表达水平,在一定程度上抑制卵巢癌细胞的增殖,导致细胞周期阻滞。
- 孙曼生秀杰刘启才李祯汪志辉
- 关键词：卵巢癌小分子干扰RNA细胞增殖
- 小干扰RNA沉默基质金属蛋白酶-2基因对卵巢癌细胞恶性行为的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨靶向基质全属蛋白酶．2（MMP-2）基因的RNA干扰（RNAi）技术对卵巢癌OVCAR．3细胞MMP-2的沉默作用，以及沉默MMP-2基因对OVCAR-3细胞生长、黏附、侵袭和迁移能力的影响。方法合成特异性靶向MMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞，以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组，以培养液代替siRNA转染细胞作为空白对照组，采用实时荧光定量PCR和Westernblot分别检测转染后24、48和72hMMP．2mRNA和蛋白的表达水平，通过四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）法绘制细胞生长曲线，利用Transwell、划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果与阴性对照组相比，OVCAR-3细胞在转染siRNA．MMP．2后24、48和72hMMP-2mRNA表达量分别下降了73．8％、78．8％和78．4％（均P〈0．05），蛋白表达量分别下降了72．6％、81．2％和76．4％（均P〈0．05），以48h作用最强；细胞生长曲线显示细胞生长无明显变化（P〉0．05）；60min和90min时的黏附抑制率分别为55．0％和44．8％（均P〈0．05）；细胞的侵袭和迁移能力分别下降29．7％和35．8％（均P〈0．05）。结论siRNA介导的MMP-2基因沉默能明显抑制OVCAR．3细胞的黏附、侵袭和迁移能力，而对其生长无明显影响，MMP-2基因有可能成为卵巢癌基因治疗的重要靶点。
- 宋清源生秀杰周映群李祯孙曼汪志辉
- 关键词：基质金属蛋白酶2
