姚佳
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- BimS慢病毒RNA干扰载休的干扰效果的实验研究
- 研究目的：应用RNA 干扰技术构建BimS 慢病毒RNA 干扰载体，感染ACC-2 细胞效率探讨干扰效果。研究方法：针对人BimS 设计三个干扰靶点，连接入载体中。将重组质粒进行病毒包装、并且通过感染ACC-2 细胞观察...
- 姚佳饶国洲李旭奎
- 关键词：RNA干扰慢病毒表达载体
- BimS慢病毒RNA干扰载体的构建及其感染效率和干扰效果的实验研究被引量：1
- 2017年
- 目的:应用RNA干扰技术构建BimS慢病毒RNA干扰载体,探讨其感染效率和干扰效果。方法:针对人BimS设计3个干扰靶点,将单链引物退火成双链oligo序列,连接入AgeI和EcoRI双酶切线性化载体中。将重组质粒进行病毒包装、并且通过感染ACC-2细胞观察其感染效率,定量PCR检测其对BimS mRNA干扰效果。结果:PCR产物经扩增电泳后阳性克隆得到337bp条带,插入序列片段与DNA测序结果完全相符。重组慢病毒载体在293T细胞中包装获得滴度为2×10~8 TU/ml的病毒颗粒,MOI=20,转染效率为85%。转染pFU-GV-BmS-1组、pFU-GV-BmS-2组及对照组BmS mRNA相对表达水平分别为:0.743±0.025、0.466±0.023、1.266±0.042(组间两两比较,P<0.05)。结论:BimS慢病毒RNA干扰载体构建成功,并能高效感染ACC-2细胞及下调BmS mRNA表达。
- 姚佳饶国洲李旭奎
- 关键词：RNA干扰慢病毒表达载体
- BimS慢病毒RNA干扰载体的干扰效果的实验研究
- 研究目的:应用RNA干扰技术构建BimS慢病毒RNA干扰载体,感染ACC-2细胞效率探讨干扰效果。研究方法:针对人BimS设计三个干扰靶点,连接入载体中。将重组质粒进行病毒包装、并且通过感染ACC-2细胞观察其感染效率,...
- 姚佳饶国洲李旭奎
- 关键词：RNA干扰慢病毒表达载体
- 文献传递
- BimS真核质粒过表达载体构建及诱导ACC-2细胞凋亡作用被引量：1
- 2016年
- 目的构建BimS真核质粒过表达载体及鉴定并转染ACC-2细胞,观察其在细胞中上调BimS蛋白表达及促凋亡作用。方法根据人BimS基因设计引物,扩增目的基因片段,挑选阳性克隆,分别采用PCR扩增电泳和DNA测序鉴定。分为对照组和实验组将构建的质粒表达载体转染ACC-2细胞,通过定量PCR和Western biot检测其基因和蛋白相对表达水平,检测细胞凋亡率和超微结构的变化。结果实验组细胞凋亡明显,凋亡率为(29.6±0.3)%;对照组细胞凋亡率仅为(0.83±0.2)%,实验组与对照组细胞凋亡率比较具有统计学差异(P<0.05)。电镜下实验组细胞呈典型的细胞凋亡形态学改变,对照组细胞形态未发生变化。结论 BimS真核质粒过表达载体构建成功,并能显著上调ACC-2细胞中BimS mRNA、蛋白表达及诱导细胞凋亡。
- 李旭奎姚佳饶国洲
- 关键词：ACC-2细胞细胞凋亡
- BimS过表达联合顺铂对体外培养人腺样囊性癌细胞系ACC-2增殖和凋亡的影响
- 2020年
- 目的探讨BimS过表达联合顺铂对涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞株ACC-2增殖和凋亡的影响及分子机制。方法(1)体外培养ACC-2细胞,分别用浓度为0,2.5,5,10,20μg/ml的顺铂对呈现对数生长期的ACC-2细胞进行处理,处理后12,24,48 h采用MTT测定细胞增殖能力。(2)体外培养ACC-2细胞和BimS过表达的ACC-2细胞,分为对照组(control组)、顺铂(DDP)组、BimS过表达组、顺铂+BimS过表达组(BimS+DDP),对照组为未做任何处理的ACC-2细胞。四组细胞处理后均继续培养48 h,采用Western blot检测各组细胞Bax、caspase-3和Bcl-2蛋白相对表达水平;四组细胞接种至96孔板后,分别于12,24,48 h采用MTT检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果与0μg/ml相比,2.5,5,10,20μg/ml顺铂处理12,24,48 h细胞增殖抑制率均显著升高,呈剂量依赖性(P<0.01)。与DDP组和BimS组相比,DDP+BimS组12,24,48 h细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01),细胞中Bcl-2蛋白表达显著减低,Bax、caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05),12,24,48 h细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。结论BimS过表达联合顺铂可明显抑制ACC-2增殖,促进其凋亡,可能与二者联合作用能够下调Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白,从而增强Bcl-2家族蛋白的促凋亡作用,活化下游caspase-3蛋白、激活线粒体凋亡途径有关。
- 吴海艳姚佳饶国洲李旭奎
- 关键词：涎腺腺样囊性癌顺铂
