李庆华
- 作品数：17 被引量：56H指数：4
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目河南省高校科技创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基于RNA-seq的杜氏盐藻全转录组测序与分析被引量：7
- 2016年
- 目的:利用RNA-seq技术对杜氏盐藻细胞的全部转录本进行测序、功能分析。方法:提取杜氏盐藻总RNA,反转录得c DNA,在Illumina平台上进行测序,经拼接、组装、聚类后获得全部unigene,并将所得unigene与数据库比对,对其进行功能注释和分类。结果与结论:共得到197 295个unigene,将获得的unigene与NR、SWISSPROT、CDD、KEGG和TREMBI数据库进行比对,有89 800个unigene获得注释。其中95 767个unigene映射到GO的不同功能节点;5 710个unigene获得COG注释,并分为22个功能分类;9 497个unigene获得了KEGG注释,映射到282条信号通路。所得杜氏盐藻的转录组信息为今后相关研究与应用提供了丰富的资源和线索。
- 朱立强李庆华张彦婷朱相展关方霞薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻转录组RNA-SEQ
- 下调Ets2表达对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨下调Ets2表达对裸鼠Eca109移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法:选择已筛选出的在体外靶向下调Ets2基因表达的siRNA片段,构建包含此片段的慢病毒(LV-siE ts2)并感染Eca109,15只裸鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和LV-siE ts2组,分别背部皮下接种Eca109、LV感染的Eca109和LV-siE ts2感染的Eca109,形成移植瘤,之后观察肿瘤生长情况、绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤抑制率。应用qRT-PCR检测肿瘤组织中Ets2 mRNA的表达,TUNEL法检测肿瘤组织细胞的凋亡,Western blot法检测肿瘤组织中Ets2、Caspase-3、Bcl-2、E-cadherin以及mTOR/p70S6K信号通路蛋白的表达。结果:LV-siE ts2组肿瘤生长速度明显变慢,肿瘤体积和质量显著小于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);LV-siE ts2组肿瘤组织中Ets2 mRNA及蛋白表达水平均显著降低;LV-siE ts2能引起Eca109细胞的凋亡,且上调Caspase-3和E-cadherin蛋白表达水平,而下调Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05);LV-siE ts2能显著降低mTOR及p70S6K的蛋白表达。结论:LV-siE ts2在体内通过抑制mTOR/p70S6K信号通路促进细胞凋亡,从而抑制裸鼠Eca109移植瘤的生长。
- 韩康马珊珊李庆华王欣欣朱相展孟楠韩莉关方霞
- 关键词：SIRNAECA109裸鼠
- β-胡萝卜素对食管癌细胞凋亡与Cav-1表达的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:观察β-胡萝卜素对食管癌细胞凋亡的影响,并分析食管癌细胞对β-胡萝卜素的敏感性与小窝蛋白-1(Cav-1)表达的关系。方法:采用Western blot法检测正常食管上皮细胞株Het-1A及食管癌细胞(TE1、EC1和Eca109)中Cav-1蛋白的表达;CCK-8法检测不同浓度(0、1、5、10、20、30、50μmol/L)β-胡萝卜素处理食管癌细胞12、24、36、48、60、72 h后,对食管癌细胞增殖抑制的影响,筛选出β-胡萝卜素的最佳处理时间及浓度;在筛选条件下处理食管癌细胞,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;qRT-PCR检测Cav-1 mRNA表达水平的变化;Western blot检测Cav-1蛋白表达水平的变化。结果:Cav-1蛋白在食管癌细胞中呈过表达(TE1>Eca109>EC1),而Het-1A细胞中无Cav-1表达。β-胡萝卜素对正常食管上皮细胞的增殖无抑制作用,而对食管癌细胞(TE1、EC1和Eca109)的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,且食管癌细胞对β-胡萝卜素的敏感性与Cav-1的表达有关。分别采用30、50、50μmol/Lβ-胡萝卜素处理48 h后,TE1、Eca109和EC1细胞凋亡率显著提高(P<0.05),Cav-1mRNA和蛋白质表达水平均明显下降。结论:β-胡萝卜素能够有效促进食管癌细胞凋亡,而对正常食管上皮细胞无毒性作用,且食管癌细胞对β-胡萝卜素的敏感性可能受到Cav-1的调节。
- 朱相展张彦婷韩康李庆华张楠楠马珊珊张琨关方霞
- 关键词：Β-胡萝卜素食管癌小窝蛋白-1细胞凋亡ECA109
- β-胡萝卜素对食管鳞癌EC1细胞增殖、凋亡、迁移及细胞周期的影响被引量：4
- 2016年
- 目的:观察β-胡萝卜素对食管鳞癌EC1细胞增殖、凋亡、迁移及细胞周期的影响。方法:用不同浓度(1、5、10、20、30、50μmol/L)β-胡萝卜素分别处理EC1细胞12、24、36、48、60、72 h后,CCK-8法检测β-胡萝卜素对EC1细胞增殖率的影响,筛选β-胡萝卜素的最佳处理时间及浓度;随后,在此条件下将EC1细胞分为3组(阴性对照组、空白对照组和实验组),采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的变化,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的变化,Western blot检测小窝蛋白1(Cav-1)、p-Akt、p-NF-κB、Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin蛋白表达水平的变化。结果:经筛选,选用50μmol/Lβ-胡萝卜素作用EC1细胞48 h进行后续实验。与阴性对照组和空白对照组相比,实验组EC1细胞凋亡率显著提高(P<0.001),G0/G1期细胞比例增加(P<0.001),而S期细胞比例降低(P<0.001),发生迁移的细胞数量减少(P<0.001),且细胞黏附因子E-cadherin的表达显著增加(P<0.001),Cav-1及AKT信号通路关键蛋白p-Akt、p-NF-κB、Bcl-2表达量明显下调,而Caspase-3的表达被激活(P<0.001)。结论:β-胡萝卜素能够有效促进EC1细胞的凋亡,推测可能是通过抑制Cav-1介导的AKT/NF-κB信号通路发挥作用。
- 朱相展张彦婷杨露张楠楠李庆华马珊珊张琨薛乐勋关方霞
- 关键词：Β-胡萝卜素食管鳞癌凋亡
- Ets2 siRNA转染对EC9706细胞增殖、侵袭、周期和凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨Ets2 siRNA转染对EC9706细胞增殖、侵袭能力、周期和凋亡的影响。方法:利用Western blot检测正常食管上皮细胞系Het-1A和食管鳞状细胞癌细胞系(EC1、Eca109、EC9706)中Ets2蛋白的表达。将EC9706细胞分为4组:阴性对照组、空白对照组、转染试剂对照组和Ets2 siRNA组,处理48 h后,采用Ed U荧光标记法和CCK-8法检测4组细胞增殖率和增殖抑制率,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,Western blot检测E-cadherin、Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测早期细胞凋亡。结果:与Het-1A细胞相比,EC1、Eca109和EC9706细胞中Ets2蛋白的表达量增加(F=1 177.764,P<0.001),且EC9706细胞中增加最为显著。转染后,与阴性对照组相比,Ets2 siRNA组细胞增殖率降低、增殖抑制率升高(F=64.733和144.741,P<0.05),侵袭能力减弱(F=104.065,P<0.001),细胞周期无明显变化(P>0.05),早期凋亡细胞增加(F=37.986,P<0.001),E-cadherin蛋白和Caspase-3蛋白表达增加(F=62.223和81.015,P<0.05),而Bcl-2蛋白表达减少(F=104.439,P<0.001)。结论:Ets2下调后能有效抑制EC9706细胞增殖,降低侵袭能力,诱导凋亡;Ets2可能成为食管鳞状细胞癌的有效治疗靶点。
- 杨露张楠楠张彦婷李庆华许尧朱相展薛乐勋关方霞
- 关键词：增殖细胞周期凋亡EC9706细胞
- 杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测被引量：2
- 2012年
- 目的:构建杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SAHH,并检测其对酵母细胞的毒性和自激活作用。方法:应用RT-PCR扩增杜氏盐藻的SAHHcDNA,测序分析后与酵母双杂交诱饵载体pGBKT7连接,构建诱饵载体pGBKT7-SAHH。用PEG/LiAc法将诱饵载体转入AH109和Y187酵母中,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无毒性和自激活作用。结果:成功构建了诱饵载体pGBKT7-SAHH并成功转化到酵母细胞AH109和Y187中,表达的融合蛋白对宿主酵母细胞无毒性。在AH109和Y187酵母细胞中诱饵载体均未激活报告基因HIS3和ADE2,但是激活了报告基因MEL1。结论:诱饵载体pGBKT7-SAHH可用酵母双杂交方法筛选与SAHH相互作用的蛋白。
- 柴丹丹李庆华阎赟梦毛丽红李靓朱立强薛乐勋
- 关键词：酵母双杂交诱饵载体自激活杜氏盐藻
- 杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶基因的克隆及功能分析被引量：6
- 2011年
- 目的:探讨杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHase)基因在鞭毛再生中的作用。方法:通过设计简并引物及RACE法克隆了杜氏盐藻SAHase基因全长,使用pH休克法对杜氏盐藻进行鞭毛去除及再生,通过实时荧光定量PCR研究在转录水平上SAHase基因的变化。结果:所克隆的杜氏盐藻SAHase基因cDNA全长1926bp,包含ORF1458bp、3’UTR61bp和5’UTR407bp。实时荧光定量PCR结果显示,在鞭毛再生的过程中,SAHasemRNA转录量升高,其水平在3h时达到了未处理组的3倍左右。结论:杜氏盐藻的SAHase基因与鞭毛再生有关。
- 阎赟梦李庆华李杰柴丹丹薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻鞭毛
- 杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测
- 2011年
- 目的:观察杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a的酵母双杂交诱饵载体表达产物对酵母细胞有无毒害作用并检测其自激活作用。方法:应用PCR方法获得stt3a可溶端的基因片段,将基因片段按正确的方向插入到酵母表达质粒pGBKT7中,经限制性内酶切鉴定正确后,用PEG/LiAc法转化到酵母菌株Y187中,并通过表型筛选检测诱饵蛋白有无毒性和自激活作用。结果:成功获得了stt3a可溶端的基因片段,其表达的蛋白对酵母菌株Y187无毒害,报告基因-半乳糖苷酶活性没有被诱导。结论:酵母双杂交GAL4系统可以被用来研究杜氏盐藻中与stt3a相互作用的蛋白。
- 侯永杰李杰李庆华王建人薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻酵母双杂交
- 酵母双杂交技术筛选杜氏盐藻cDNA文库中与S-腺苷高半胱氨酸水解酶相互作用的蛋白
- 2016年
- 目的:应用酵母双杂交技术筛选杜氏盐藻c DNA文库中能与S-腺苷高半胱氨酸水解酶(ds SAHH)相互作用的蛋白。方法:将构建好的p GBKT7-ds SAHH诱饵载体转化至酵母细胞Y187,与转化有杜氏盐藻c DNA文库的酵母细胞AH109杂交,从杜氏盐藻c DNA文库中筛选出能与ds SAHH相互作用的蛋白质。扩增所得基因片段全长,并在原核内表达该融合蛋白。随后采用Far-western blot、His pull-down及免疫共沉淀方法验证ds SAHH与目的蛋白在体内、外的相互作用。结果:以ds SAHH为诱饵筛选出3个阳性克隆,扩增得到dsRACK1、ds Met AP1和dse EF1α3个新基因。His pull-down和免疫共沉淀体内外实验证实dsRACK1能与ds SAHH相互作用。结论:dsRACK1是ds SAHH的相互作用蛋白。
- 李庆华张彦婷朱立强柴丹丹关方霞薛乐勋
- 关键词：酵母双杂交蛋白相互作用免疫共沉淀
- 光照强度及盐浓度对杜氏盐藻生长及β-胡萝卜素积累的影响被引量：3
- 2016年
- 目的：探讨光照强度和盐浓度对杜氏盐藻生长和细胞内β-胡萝卜素积累的影响。方法：检测正常培养条件下杜氏盐藻生长情况和β-胡萝卜素变化,不同浓度（0.5、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mol/L）Na Cl培养后细胞内β-胡萝卜素的积累情况。采用高光（5 000~6 000 Lux）、高盐（3.5 mol/L Na Cl）及高光高盐条件对培养至对数生长末期的杜氏盐藻进行β-胡萝卜素积累的诱导。结果：正常条件下杜氏盐藻培养2周后进入稳定期,细胞内β-胡萝卜素含量呈先下降后上升趋势,第9天达到最大值,随后出现小幅度波动;杜氏盐藻细胞内β-胡萝卜素含量随Na Cl浓度升高而升高,二者呈正相关（r=0.969,P〈0.001）。与正常条件相比,高光、高盐单独作用均能够提高细胞内β-胡萝卜素含量,而高光高盐联合作用最有利于杜氏盐藻细胞β-胡萝卜素的积累。结论：高光高盐联合作用可作为杜氏盐藻细胞内β-胡萝卜素的最佳诱导条件。
- 刘真刘姗姗张玉洁朱相展张彦婷李庆华马珊珊张琨关方霞
- 关键词：杜氏盐藻Β-胡萝卜素
