王伍
- 作品数：33 被引量：6H指数：1
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省公益性技术应用研究计划项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学环境科学与工程更多>>
- 大肠杆菌铁硫簇组装蛋白IscA的铁结合活性研究
- 王伍谭国强司凡刘敏吕建新丁焕根
- 关键词：ISCA铁硫簇
- 一种锌离子诱导重组蛋白表达体系、其诱导方法和应用
- 本发明公开了一种锌离子诱导重组蛋白表达体系、其诱导方法和应用，属于基因和蛋白工程领域；本发明通过将大肠杆菌锌耐受操纵子znt的启动子序列PzntA和重组蛋白的编码基因进行融合，并利用pUC57‑Kan载体转化到zntA基...
- 王伍李江辉周易周怀彬谭国强周晓峰
- 文献传递
- 构建一种基于双启动子模型的特异性检测镉离子的大肠杆菌传感器被引量：2
- 2015年
- 为构建一种能够特异性检测镉离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究通过对检测元件模式和荧光蛋白的筛选后,以蓝色荧光蛋白mTagBFP2基因作为报告基因,使用双启动子模式,构建融合报告载体Pmer::merR-m-Pmer::mTagBFP2-pMD19-T。然后将报告载体转化至E.coli MC4100菌中,构建特异性检测镉离子的微生物传感器,并对此微生物传感器进行了最佳培养基、起始诱导浓度和时间、最适检测范围等相关参数的确定,以及对特异性进行了测定。研究表明,此微生物传感器检测镉离子背景信号低,选定起始菌液浓度为OD600=0.1,于IHMM培养基中诱导2 h为最佳检测条件,检测镉离子线性浓度范围为0.1-75μmol/L,并且只对Cd2+响应,特异性较高。因此,本研究成功构建了能够特异性检测镉离子的生物传感器,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。
- 吕攀攀肖芳兰严锡娟卢彬彬林炜炜许清清张珍珍王伍吕建新
- 关键词：微生物传感器双启动子
- 一种特异性检测汞离子的大肠杆菌的构建
- 2015年
- 目的：利用增强型青色荧光蛋白（ECFP）作为报告物,构建特异性检测汞离子的微生物传感器。方法：利用ecfp基因作为报告基因,构建融合报告载体mer R-O／P-ecfp-T。然后将报告载体mer R-O／P-ecfpT转化至E.coli MC4100菌中完成传感器的构建,并对此微生物传感器进行了测定条件的优化及特异性、最适检测范围等相关参数的测定。结果：研究结果表明,此生物传感器对汞离子特异性好,最适检测汞离子浓度范围为0.15~38.4μmol/L。结论：成功地构建了能够特异性检测汞离子的生物传感器,为构建汞离子等影响到人类健康、食品安全的化学物质的超敏感生物传感器奠定了基础。
- 肖芳兰吕攀攀严锡娟纪松军王伍吕建新
- 关键词：汞离子大肠杆菌
- 一种检测水体重金属镉的微生物学方法
- 本发明涉及一种检测重金属镉的微生物学方法，具体涉及一种检测镉大肠杆菌工程菌株的构建方法及其检测水中镉方法的建立。本发明所述工程菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除大肠埃希氏菌镉抗性zntA和zntR基因，然后采用基因敲...
- 吕建新吕攀攀王伍卢彬彬林炜炜
- 文献传递
- 氧化还原对铁结合的大肠杆菌拓扑异构酶Ⅰ活性的调控被引量：1
- 2017年
- 大肠杆菌拓扑异构酶Ⅰ(E.coli TopA)属于I型拓扑异构酶,在DNA复制、转录、重组和基因表达调控等过程中发挥关键作用。E.coli TopA不仅能结合锌,还可以结合铁。细胞内过量铁可与锌竞争,通过与锌指结构域结合减弱其DNA结合能力和改变蛋白质空间构象,从而抑制TopA拓扑异构酶活性。然而,铁结合形式TopA的氧化还原特性以及氧化还原条件对其活性的影响仍不清楚。本研究通过紫外分光光谱和体外DNA拓扑异构酶活性分析,发现体外纯化得到的铁结合形式的TopA呈氧化状态,能够被二硫苏糖醇和连二亚硫酸钠还原,原本氧化状态下无活性的TopA在还原条件下,可恢复其拓扑异构酶活性。当还原剂被去除后,铁结合的TopA在空气中能够重新被氧化,且其活性重新受到抑制。这说明,氧化还原条件对铁结合的TopA功能具有可逆调节作用。通过金属-蛋白体外结合实验进一步发现,无金属结合的TopA蛋白(apo-TopA)在无氧条件下,与Fe^(2+)和Fe^(3+)均能结合,但与Fe^(2+)结合能力较弱,并且TopA结合的Fe^(3+)被还原成Fe^(2+)后,结合力显著下降,能够被铁螯合指示剂菲咯嗪快速捕获。此外,蛋白质内源性荧光光谱分析实验表明,铁结合的TopA在氧化还原的不同状态时,其在330 nm左右的荧光值有显著差异。这提示,氧化还原条件可能通过影响铁离子与TopA的结合状态,引起蛋白质空间构象改变,从而对TopA的拓扑异构酶活性进行调节。此研究表明,铁结合TopA的拓扑异构酶活性会受到细胞内氧化还原信号的可逆调控,也提示I型拓扑异构酶可能是细胞铁超载通过氧化损伤引起细胞功能障碍(或铁死亡)的靶点之一。
- 卢彬彬陈世良杨娟娟王佳佳黄招竹王伍
- 关键词：锌指结构
- 大肠杆菌拓扑异构酶I是一种锌和铁结合蛋白
- 大肠杆菌拓扑异构酶I(TopA)可以催化双链DNA中单链的断裂和再连接反应而使负超螺旋拓扑状态得到松弛。TopA从结构上分析,包括了N端的催化片段和C端的锌结合域,后者对于负超螺旋结构的松弛是必需的。我们发现从LB培养基...
- 吕建新王伍谭国强易鹏思凡任亚光丁焕根
- 文献传递
- 大肠杆菌和人IscA蛋白体内外铁结合活性和铁硫簇合成的研究
- 目的：
为研究大肠杆菌和人类IscA蛋白在体内的铁结合活性以及在铁硫簇合成过程中发挥的作用，在大肠杆菌体内诱导表达目的蛋白，在M9培养基中添加和不添加外源铁，纯化后比较两者铁结合情况;并且在有氧和无氧条件下比较大肠...
- 王伍
- 关键词：大肠杆菌
- 文献传递
- 双功能大肠杆菌及其用途
- 本发明提供了一种能够同时灵敏检测和高效吸附水中铜离子的双功能大肠杆菌、其构建方法，以及其在检测和吸附水中铜离子中的应用。
- 王伍吕建新姜风英谭国强庞一林
- 文献传递
- 一株检测镉的大肠埃希氏菌
- 本发明涉及一种检测重金属镉的微生物学方法，具体涉及一种检测镉大肠杆菌工程菌株的构建方法及其检测水中镉方法的建立。本发明所述工程菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除大肠埃希氏菌镉抗性zntA和zntR基因，然后采用基因敲...
- 吕建新吕攀攀王伍卢彬彬林炜炜
- 文献传递
