卢彬彬
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省公益性技术应用研究计划项目浙江省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学自动化与计算机技术更多>>
- 氧化还原对铁结合的大肠杆菌拓扑异构酶Ⅰ活性的调控被引量：1
- 2017年
- 大肠杆菌拓扑异构酶Ⅰ(E.coli TopA)属于I型拓扑异构酶,在DNA复制、转录、重组和基因表达调控等过程中发挥关键作用。E.coli TopA不仅能结合锌,还可以结合铁。细胞内过量铁可与锌竞争,通过与锌指结构域结合减弱其DNA结合能力和改变蛋白质空间构象,从而抑制TopA拓扑异构酶活性。然而,铁结合形式TopA的氧化还原特性以及氧化还原条件对其活性的影响仍不清楚。本研究通过紫外分光光谱和体外DNA拓扑异构酶活性分析,发现体外纯化得到的铁结合形式的TopA呈氧化状态,能够被二硫苏糖醇和连二亚硫酸钠还原,原本氧化状态下无活性的TopA在还原条件下,可恢复其拓扑异构酶活性。当还原剂被去除后,铁结合的TopA在空气中能够重新被氧化,且其活性重新受到抑制。这说明,氧化还原条件对铁结合的TopA功能具有可逆调节作用。通过金属-蛋白体外结合实验进一步发现,无金属结合的TopA蛋白(apo-TopA)在无氧条件下,与Fe^(2+)和Fe^(3+)均能结合,但与Fe^(2+)结合能力较弱,并且TopA结合的Fe^(3+)被还原成Fe^(2+)后,结合力显著下降,能够被铁螯合指示剂菲咯嗪快速捕获。此外,蛋白质内源性荧光光谱分析实验表明,铁结合的TopA在氧化还原的不同状态时,其在330 nm左右的荧光值有显著差异。这提示,氧化还原条件可能通过影响铁离子与TopA的结合状态,引起蛋白质空间构象改变,从而对TopA的拓扑异构酶活性进行调节。此研究表明,铁结合TopA的拓扑异构酶活性会受到细胞内氧化还原信号的可逆调控,也提示I型拓扑异构酶可能是细胞铁超载通过氧化损伤引起细胞功能障碍(或铁死亡)的靶点之一。
- 卢彬彬陈世良杨娟娟王佳佳黄招竹王伍
- 关键词：锌指结构
- 构建一种检测水中As^(3+)的敏感型大肠杆菌
- 2016年
- 为构建一种敏感性强、特异性好的检测砷离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究利用基因敲除技术,敲除了大肠杆菌中负责向胞外转运砷离子的ars B基因,构建对As^(3+)敏感的菌株;利用egfp基因作为报告基因,构建融合检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp。然后将检测载体p ET28b-Pars-ars R-egfp转化至ars B基因敲除菌中完成敏感型As^(3+)检测菌株的构建。接着对此微生物传感器进行了检测条件的优化,以及线性检测范围、最低检出限、特异性等性能的确定。研究结果表明,与利用野生大肠杆菌作为检测宿主相比,此敏感型砷检测菌株对检测As^(3+)的灵敏度有显著提高,最适检测As^(3+)浓度范围为0.013-42.71μmol/L,最低检出下限为5.13 nmol/L。因此,本研究利用基因敲除技术对大肠杆菌进行改造,成功地提高了砷检测微生物传感器的灵敏度,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。
- 王伍纪松军黄招竹卢彬彬吕建新
- 关键词：大肠杆菌基因敲除敏感性
- 一株检测镉的大肠埃希氏菌
- 本发明涉及一种检测重金属镉的微生物学方法，具体涉及一种检测镉大肠杆菌工程菌株的构建方法及其检测水中镉方法的建立。本发明所述工程菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除大肠埃希氏菌镉抗性zntA和zntR基因，然后采用基因敲...
- 吕建新吕攀攀王伍卢彬彬林炜炜
- 文献传递
- 一株检测镉的大肠埃希氏菌
- 本发明涉及一种检测重金属镉的微生物学方法，具体涉及一种检测镉大肠杆菌工程菌株的构建方法及其检测水中镉方法的建立。本发明所述工程菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除大肠埃希氏菌镉抗性zntA和zntR基因，然后采用基因敲...
- 吕建新吕攀攀王伍卢彬彬林炜炜
- 文献传递
- 构建一种基于双启动子模型的特异性检测镉离子的大肠杆菌传感器被引量：2
- 2015年
- 为构建一种能够特异性检测镉离子的大肠杆菌荧光报告菌株,本研究通过对检测元件模式和荧光蛋白的筛选后,以蓝色荧光蛋白mTagBFP2基因作为报告基因,使用双启动子模式,构建融合报告载体Pmer::merR-m-Pmer::mTagBFP2-pMD19-T。然后将报告载体转化至E.coli MC4100菌中,构建特异性检测镉离子的微生物传感器,并对此微生物传感器进行了最佳培养基、起始诱导浓度和时间、最适检测范围等相关参数的确定,以及对特异性进行了测定。研究表明,此微生物传感器检测镉离子背景信号低,选定起始菌液浓度为OD600=0.1,于IHMM培养基中诱导2 h为最佳检测条件,检测镉离子线性浓度范围为0.1-75μmol/L,并且只对Cd2+响应,特异性较高。因此,本研究成功构建了能够特异性检测镉离子的生物传感器,为重金属微生物传感器的优化研究工作提供了有用方案。
- 吕攀攀肖芳兰严锡娟卢彬彬林炜炜许清清张珍珍王伍吕建新
- 关键词：微生物传感器双启动子
- 一种检测水体重金属镉的微生物学方法
- 本发明涉及一种检测重金属镉的微生物学方法，具体涉及一种检测镉大肠杆菌工程菌株的构建方法及其检测水中镉方法的建立。本发明所述工程菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除大肠埃希氏菌镉抗性zntA和zntR基因，然后采用基因敲...
- 吕建新吕攀攀王伍卢彬彬林炜炜
- 文献传递
- 大肠杆菌YacG锌指结构的金属结合及功能特性被引量：1
- 2016年
- Yac G蛋白是一种能够抑制大肠杆菌促旋酶(E.coli gyrase)活性的内源性小分子蛋白质,仅由65个氨基酸残基组成。核磁共振(NMR)研究发现,Yac G结构中含有1个Cys-X2-Cys-X15-CysX3-Cys序列的锌指结构域,然而其作用并不清楚。本研究发现,在添加外源锌或者铁的M9基础培养基中,表达并纯化得到分别含有锌和铁的Yac G蛋白,而在同时添加铁和L-半胱氨酸的M9基础培养基中可以纯化得到含有铁硫簇的蛋白质。这表明,Yac G不仅是一个锌指蛋白,也是铁结合或铁硫簇结合蛋白。定点突变实验发现,Yac G锌指结构中的4个半胱氨酸残基突变后,其结合的锌、铁、铁硫簇的含量都显著下降。这提示,锌结合、铁结合以及铁硫簇结合的位点均位于锌指结构域中的4个半胱氨酸残基。体内Yac G过表达实验显示,用IPTG在大肠杆菌体内诱导表达野生型Yac G蛋白会导致其生长明显受到抑制,而过表达突变体蛋白(Yac G-C12/28S)对其生长的抑制作用将会减弱。体外实验进一步发现,锌结合、铁结合以及铁硫簇结合形式的Yac G蛋白对E.coli gyrase促DNA螺旋活性的抑制作用没有明显差别,但是锌指结构突变体蛋白(Yac G-C12/28S)对gyrase活性的抑制作用显著减弱。这说明,完整的锌指结构对Yac G抑制gyrase活性的功能具有重要作用。此研究有可能为gyrase抑制剂类抗生素药物的研发提供有用的线索。
- 杨娟娟章丽和苏晓璐卢彬彬纪松军黄招竹王伍
- 关键词：锌指结构
- 一种检测水体重金属镉的微生物学方法
- 本发明涉及一种检测重金属镉的微生物学方法，具体涉及一种检测镉大肠杆菌工程菌株的构建方法及其检测水中镉方法的建立。本发明所述工程菌株的构建，首先采用Red重组系统敲除大肠埃希氏菌镉抗性zntA和zntR基因，然后采用基因敲...
- 吕建新吕攀攀王伍卢彬彬林炜炜
- 文献传递
