李楠楠
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 相关领域：生物学更多>>
- CD2相关蛋白剪接异构体启动子区及其缺失体的构建和活性分析
- 2016年
- 目的:构建CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)剪接异构体启动子区及其缺失体,转染HEK293及He La细胞,评价其启动子活性。方法:取稳定生长的He La细胞,常规方法提取总RNA,逆转录为c DNA并以此为模板,PCR扩增CD2AP剪接异构体之一CD2AP002转录起始位点上游2 200 bp的启动子区域片段,亚克隆这些片段至p GL-3基本载体上的多个克隆位点,构建含CD2AP002启动子的重组质粒。CD2AP002质粒构建成功后,以此质粒为模板重复上述步骤构建一系列CD2AP002启动子5′侧翼区缺失体。重组质粒及其缺失体转染人胚肾HEK293细胞及人宫颈癌He La细胞,双荧光素酶报告基因检测各片段的活性。结果:酶切、核酸序列分析证实,成功构建含CD2AP002启动子的重组质粒及其缺失体。经双荧光素酶活性检测证实不同片段大小的5′侧翼区序列缺失体均具有与片段长度相应的活性。结论:成功构建出在HEK293及He La细胞中具有活性的重组质粒及其缺失体。
- 李楠楠王璐璐张慧文金蕊周国平
- 关键词：CD2相关蛋白启动子剪接异构体
