吕园园
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
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- α3神经型尼古丁受体基因下调对SH-SY5Y DYN1和AP180表达的影响
- 2019年
- 目的研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因下调对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)发动蛋白(DYN)1和衔接蛋白(AP)180蛋白表达的影响,探讨α3 nAChR的在AD发病机制中的神经保护作用。方法将重组质粒α3 nAChR shRNA Plasmid转染到SH-SY5Y细胞中,48 h后收集细胞,用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western印迹法检测α3 nAChR、DYN1和AP180蛋白表达。结果 SH-SY5Y细胞转染α3 nAChR shRNA Plasmid后,与对照组及空载组比较,α3 nAChR、DYN1、AP180 mRNA及蛋白水平均明显降低(P<0.05)。结论通过转染使SH-SY5Y细胞α3 nAChR表达成功下调;α3 nAChR下调降低细胞DYN1和AP180表达,可能影响了突触囊泡回收从而影响突触功能,与AD发病有一定关联。
- 吕园园王晓玲王晓玲李毅李毅官志忠
- 关键词：SH-SY5Y细胞
- α3神经型尼古丁受体基因上调对SH-SY5Y细胞突触素水平的影响
- 2018年
- 目的构建使α3nAChR基因上调的重组质粒α3nAChR-pcDNA3.1并转染至神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),研究α3nAChR基因上调对细胞突触素(SYP)水平的影响。方法设计α3nAChR上下游引物,通过逆转录PCR的方法获取人α3nAChR特异核苷酸序列,并将其克隆到质粒载体pcDNA3.1上,构建重组质粒α3nAChR-pcDNA3.1;瞬时转染至SH-SY5Y细胞后,用Real-time法和蛋白免疫印迹法分别α3nAChR及蛋白水平,并检测上调细胞中SYPmRNA和蛋白水平的变化。结果成功构建了使α3nAChR基因上调的重组质粒α3nAChRpcDNA3.1;将α3nAChR-pcDNA3.1质粒转染到SH-SY5Y细胞后,与空载质粒组及正常对照组相比,α3nAChRmRNA及蛋白表达水平分别增加了422%和106%(P<0.05);SYPmRNA及蛋白表达水平分别增加了115%和43%(P<0.05)。结论α3nAChR表达的上调可使细胞SYP的表达增加,说明了α3nAChR与SYP密切相关,在AD的发生中可能起着重要作用。
- 吕园园齐晓岚齐晓岚李毅官志忠
- 关键词：SH-SY5Y细胞
- SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因过表达对CaMK Ⅱ和CREB的影响被引量：1
- 2016年
- 目的研究SH-SY5Y神经细胞中α7 nAChR基因过表达对CaMKⅡ和CREB的影响。方法复苏稳定转染α7 nAChR-pc DNA3.1质粒及空载质粒的SH-SY5Y神经细胞后,用含G418的培养液进行筛选培养;应用实时荧光定量PCR法和蛋白印迹法(Western blot)检测α7 nAChR基因过表达组、空载质粒组和正常对照组细胞中CaMKⅡ、CREB mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,α7 nAChR基因过表达细胞组的CaMKⅡ、CREB mRNA表达水平分别增加了116.8%和114.7%(P<0.01);及CaMKⅡ、CREB蛋白表达水平分别增加了8.7%(P>0.05)和41.4%(P<0.05)。结论α7 nAChR的神经保护作用可能与上调细胞CaMKⅡ、CREB水平有关。
- 吕园园张淑丽吴昌学王晓玲官志忠齐晓岚
- 关键词：NACHRSH-SY5Y细胞CREB
- SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因过表达对钙调蛋白表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的构建稳定的α7神经型尼古丁受体(α7 nAChR)过表达的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,研究α7 nAChR过表达对钙调蛋白(CaM)表达水平的影响。方法设计α7 nAChR引物并扩增α7 nAChR特异性编码的核苷酸序列,退火后克隆至pc DNA 3.1质粒,构建α7 nAChR-pcDNA 3.1重组质粒。将α7 nAChR-pcDNA 3.1重组质粒转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量(Realtime)PCR和蛋白质印迹方法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平的变化,蛋白质印迹方法检测CaM表达水平的变化。结果构建的α7 nAChR mRNA过表达质粒成功转入SH-SY5Y细胞后,经G418筛选获得稳定转染细胞克隆株,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达量分别增加了533%和110%,CaM表达量增加了43%。结论成功构建了α7 nAChR mRNA过表达的SH-SY5Y细胞株,α7 nAChR表达上调增加了CaM表达水平,这可能与阿尔茨海默病的发病有一定的关系。
- 张淑丽吕园园官志忠李毅齐晓岚
- 关键词：钙调蛋白SH-SY5Y细胞
- SH-SY5Y细胞α7神经型尼古丁受体基因沉默对突触相关蛋白的影响被引量：2
- 2016年
- 目的研究神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)α7神经型尼古丁受体基因(α7 nAChR)表达沉默后对细胞突触相关蛋白的影响,探讨α7 nAChR神经保护作用机制及在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的发病机制中的作用。方法用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western blot)法分别测定细胞中囊泡相关蛋白(synaptophysin)和突触后膜蛋白(PSD-95)mRNA蛋白表达水平的变化。结果α7 nAChR沉默组的突触相关蛋白PSD-95、SYPmRNA及蛋白表达都有明显的减少。结论沉默SH-SY5Y细胞α7 nAChR水平能够使细胞突触相关蛋白水平减少。这可能提示了α7 nAChR与细胞突触密切相关,并且α7 nAChR对突触有一定的保护作用,进一步说明α7nAChR在阿尔茨海默病的发病中起着重要作用。
- 王晓玲吕园园张淑丽官志忠齐晓岚
- 关键词：阿尔茨海默病SH-SY5Y细胞突触
- SH-SY5Y细胞α3尼古丁受体表达水平的改变对突触相关蛋白的影响
- 目的： 研究人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)α3尼古丁受体(?3 nicotinic acetylcholine receptors,α3 nAChR)基因表达上调及下调后对细胞突触相关蛋白及钙信号通路相关蛋白的影...
- 吕园园
- 关键词：阿尔茨海默病SH-SY5Y细胞信号通路蛋白表达
