覃建兵
- 作品数：12 被引量：27H指数：3
- 供职机构：长江大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 虎杖PcMYB1启动子的克隆及其活性分析被引量：2
- 2021年
- 获得药用植物虎杖(Polygonum cuspidatum)PcMYB1启动子,并分析其活性,为进一步研究虎杖转录因子PcMYB1的功能奠定基础。通过hiTAIL-PCR方法,从虎杖叶片基因组DNA中克隆PcMYB1启动子并进行生物信息学分析。分别构建由全长启动子或5'端缺失启动子驱动GUS的重组表达载体P1∷GUS、P2∷GUS、P3∷GUS和P4∷GUS。将重组表达载体转入发根农杆菌中进行虎杖毛状根转化试验,以转化的阳性毛状根为材料,通过GUS组织化学染色分析启动子的活性。成功获得2 884 bp的PcMYB1启动子序列(GenBank登录号MT811057)。该启动子具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,还含有茉莉酸甲酯和低温响应元件以及光响应、厌氧应答等相关的顺式调控元件。重组表达载体经PCR鉴定,证实已构建成功。转化的虎杖毛状根染色之后显蓝色,但同对照相比颜色较浅,说明全长启动子或5'端缺失启动子都具有驱动GUS的活性,但启动活性都比CaMV35S启动子的启动活性弱。PcMYB1的启动子被成功克隆,其具有驱动下游GUS表达的活性。
- 林艳丽覃建兵伍翔王岩岩潘佑找柳忠玉
- 关键词：虎杖启动子GUS活性
- 被子植物雌雄配子及早期胚胎的分离与研究应用被引量：1
- 2016年
- 被子植物的有性生殖过程复杂精巧并深藏于母体组织内进行,一直以来难以对该过程进行直接的细胞学和分子生物学研究。如今在多种植物中获得了有活力而无污染的配子细胞和早期胚胎,结合少量细胞m RNA提取技术、基因组深度测序以及离体授精系统等技术,人们已能对被子植物受精过程中的配子识别、配子融合、合子激活等重要发育事件进行深入分析。本文对有代表性的被子植物配子和早期胚胎的分离技术及其在受精作用研究中的应用、存在的问题和前景进行了总结,旨在为植物生殖发育研究提供帮助。
- 罗岸覃建兵
- 关键词：精细胞卵细胞早期胚胎分离纯化受精作用
- 小麦的非生物胁迫耐性研究进展被引量：2
- 2018年
- 温度的变化、水分的缺失以及盐渍化的土壤等非生物逆境都会对小麦的生长产生一定的影响。从小麦(Triticum aestivum L.)耐寒性、耐旱性和耐盐碱性3个方面介绍了小麦耐非生物胁迫的研究进展。
- 徐俊雄柳忠玉伍翔王岩岩覃建兵
- 关键词：胁迫
- 软枣猕猴桃种子萌发及快繁技术研究被引量：2
- 2021年
- 以软枣猕猴桃(Actinidia arguta)的种子以及种子萌发生长出的幼嫩茎段为材料,对软枣猕猴桃种子萌发特性、生根培养及快繁技术进行研究。结果表明,种子在40℃恒温水中处理1 h,然后用1200mg/L GA_(3)处理发芽率最高,为85.00%;最佳的生根培养基为1/2 MSB+IBA 0.4 mg/L,生根率达100%,根系健康粗壮,植株生长茂盛;最佳的增殖培养基为1/2 MSB+IBA 0.4 mg/L,增殖培养的苗移栽后生长良好。
- 吴端阳张鸿杰伍翔王岩岩柳忠玉覃建兵
- 关键词：种子萌发离体快繁
- 不同药剂处理对八月瓜种子萌发的影响被引量：2
- 2021年
- 为探究不同处理对种子萌发的影响,研究适宜的促进八月瓜种子萌发的方法,以台湾紫红八月瓜种子为研究对象,采用不同浓度的浓H_(2)SO_(4)、GA_(3)、H_(2)O_(2)处理种子,研究各处理对八月瓜种子发芽率的影响。结果表明,10%H_(2)O_(2)对晾干种子萌发的促进作用最显著,萌发率为48.33%;0.5 g/L GA_(3)+98%H_(2)SO_(4)处理对新鲜种子萌发的促进作用最显著,发芽率为70%。
- 张鸿杰周岚吴端阳覃建兵王岩岩
- 关键词：八月瓜萌发浓硫酸赤霉素
- 虎杖MYB转录因子PcMYB2基因的克隆与原核表达被引量：3
- 2018年
- 为了探究MYB(髓细胞组织增生病毒癌基因同源物)转录因子在虎杖苯丙烷代谢途径中的作用,以虎杖叶片为材料,通过c DNA末端快速扩增(RACE)技术获得1个MYB转录因子,命名为Pc MYB2,Gen Bank登录号为MG020557。序列分析表明,Pc MYB2基因的c DNA序列全长为938 bp,开放阅读框(ORF)为738 bp,编码245个氨基酸,推测蛋白质分子质量为27. 917 ku。Pc MYB2编码的氨基酸序列具有R2R3-MYB类转录因子的共同特征,其N端具有R2、R3这2个MYB结构域,并且R3结构域中包含1个能与b HLH转录因子相互作用的[D/E]Lx2[R/K]x3Lx6Lx3R基序。进化树分析表明,Pc MYB2蛋白与苜蓿中参与原花青素调控的MtPAR聚为1组。将该基因的ORF片段连接到原核表达载体p ET20b中,构建融合表达载体p ET20b-Pc MYB2,转化到大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta(DE3)中进行表达。SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)检测显示表达蛋白与预期大小一致,表明成功克隆Pc MYB2基因的c DNA全长序列,构建的原核表达载体p ET20b-Pc MYB2可用于该基因的功能研究。
- 李晓筱徐俊雄刘婵王岩岩伍翔覃建兵柳忠玉
- 关键词：虎杖MYB转录因子原核表达原花青素
- ‘新冬26’和‘鄂恩1号’杂交F_(2)代萌发期耐盐性分析被引量：1
- 2022年
- 为了解杂交F_(2)代的耐盐性,明确F_(2)代对盐胁迫的生理响应特征,本研究以耐盐型小麦‘新冬26’(母本)和盐敏感型小麦‘鄂恩1号’(父本)及其正反交F_(2)代(F_(1)代自交种子)为材料,以父本和母本筛选合适的Na Cl浓度,以该Na Cl浓度处理各种子,测定各材料的发芽率,特定时期的根长、芽长、抗氧化酶活性(APX,SOD,POD,CAT)和MDA(丙二醛)含量,并通过相关性分析、隶属函数法对F_(2)代进行耐盐性综合评价,以明确F_(2)代的耐盐性生理响应特征和耐盐性差异。结果表明:200 mmol/L Na Cl为合适F_(2)代筛选浓度,在该浓度下,‘新冬26’和‘鄂恩1号’的发芽率有显著差异,能够广泛区分F_(2)代发芽率;盐胁迫下F_(2)代的发芽率、根长、芽长显著下降,抗氧化酶活性和MDA含量升高,与对照差异显著,不同材料的各指标变化程度不同,整体上F_(2)代的各指标优于盐敏感的亲本,生长良好,耐盐性强;耐盐性综合评价结果显示,F_(2)代各指标相关关系显著,各材料的耐盐性顺序为:A5>A3>A4>C10>C5>C4>C3>A7>‘新冬26’>‘鄂恩1号’,杂交F_(2)代的耐盐性强于亲本,正反交耐盐性有差异,但仍有明显的杂种优势。本研究结果为小麦的耐盐育种提供科学依据。
- 吴端阳张鸿杰王岩岩覃建兵
- 关键词：杂交萌发期耐盐综合评价
- 虎杖MYB转录因子PcMYB1的表达特性和功能研究被引量：6
- 2020年
- 目的对虎杖中1个新的R2R3-MYB转录因子基因PcMYB1进行转录活性鉴定和表达特性分析,并在转基因拟南芥中进行功能研究。方法利用酵母单杂交实验分析PcMYB1的转录活性;荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测虎杖中PcMYB1的表达模式;利用Wiesner染色和溴乙酰法检测PcMYB1转基因拟南芥中的木质素含量;RT-PCR技术分析PcMYB1转基因拟南芥木质素合成相关基因的表达。结果酵母单杂实验结果表明,PcMYB1具有转录抑制活性;RT-PCR结果显示PcMYB1在虎杖根、茎、叶中均有表达,在叶中表达量最高,并且紫外照射处理可诱导叶片中PcMYB1的表达;与野生型拟南芥相比,转基因拟南芥的株高降低了24.07%,木质部的细胞染色程度浅,转基因拟南芥木质素含量降低了14.81%,参与木质素合成的AtC4H、AtC3H、AtF5H、AtCOMT、AtCAD基因表达下调。结论 PcMYB1具有转录抑制活性,对植物木质素合成具有负调控作用。
- 徐俊雄覃建兵王岩岩伍翔林艳丽吴端阳张鸿杰柳忠玉
- 关键词：虎杖转录活性木质素合成
- 虎杖PcMYB1基因实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：1
- 2020年
- 为建立实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测虎杖(Polygonum cuspidatum)转录因子PcMYB1基因表达的方法,将PcMYB1基因的ORF片段亚克隆于pUC19载体,得到重组质粒pUC19-PcMYB1,再以pUC19-PcMYB1作为标准样品,建立目的基因的标准曲线,优化qRT-PCR反应体系与反应条件,分析qRT-PCR的灵敏度。结果表明,在qRT-PCR体系中,退火温度为54.1℃时检测结果最好;构建的目的基因标准曲线,其循环阈值与模板拷贝数对数值呈良好的线性关系,扩增效率为92.3%;该方法最低可检测101copies/μL的目的基因。
- 林艳丽李鲁汉廖辉覃建兵伍翔王岩岩吴端阳张鸿杰柳忠玉
- 关键词：MYB转录因子
- 虎杖转录因子PcMYB1基因的克隆及原核表达被引量：8
- 2018年
- 为了探明髓细胞组织增生病毒癌基因同源物(MYB)转录因子在虎杖苯丙烷代谢途径的作用,以虎杖叶片为材料,通过RT-PCR和RACE技术从虎杖中获得MYB转录因子基因,命名为PcMYB1,GenBank登录号为KY495789。序列分析表明,PcMYB1基因的cDNA序列全长1 152 bp,该基因开放阅读框为813 bp,编码270个氨基酸,推测蛋白质分子质量为30.455 ku。PcMYB1编码的氨基酸序列具有MYB类转录因子的共同特征,其N端具有R2、R3两个MYB结构域,同时其C端还存在一个抑制结构域C2基序pdLNL[D/E]LXI[G/S]。系统进化树分析表明,该基因编码的蛋白质与矮牵牛PhMYB4的亲缘关系最近。将该基因片段连接到原核表达载体pET-28a中,构建融合表达质粒pET28a-PcMYB1,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白与预期大小一致。成功克隆PcMYB1基因的全长序列,构建的原核表达载体pET28a-PcMYB1可用于该基因的功能研究。
- 柳忠玉雷健李晓筱刘婵覃建兵许锋
- 关键词：虎杖MYB转录因子原核表达RACE
