舒娜 作品数:15 被引量:4 H指数:1 供职机构: 中国农业科学院棉花研究所 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
酵母耐盐相关基因HAL1在棉花中的功能表达 被引量:4 2016年 【目的】克隆酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)耐盐基因HAL1(halotolerance)并转化棉花,探究该基因在棉花中的功能,进一步探究酵母耐盐相关基因在高等植物中的具体功能。【方法】根据随NCBI核酸数据库中酵母耐盐基因HAL1的mRNA全长序列信息,利用RT-PCR技术从酿酒酵母AS2.375中克隆该基因。选择酶切位点XbaⅠ和SmaⅠ对表达载体pBI121::GFP进行双酶切,采用In-Fusion技术构建pBI 121-ScHAL1::GFP融合表达载体。以自发荧光较弱的陆地棉品种Y-2067、ZA-23、GZ-2的花粉为材料,用基因枪轰击棉花花粉进行瞬时表达研究。采用基因枪活体转化技术将外源基因表达载体pBI121-HAL1::GFP转化棉花盐敏感材料中s9612,获得T_0棉花转基因种子。用100mol·L^(-1)NaCl盐溶液对转基因T_0种子进行耐盐性发芽试验,并进行分子检测,对鉴定出的转基因植株进行叶盘耐盐性分析。【结果】从酿酒酵母As2.375中克隆耐盐基因ScHAL1,基因全长885 bP,共编码294个氨基酸。对其序列进行分析,发现HAL1蛋白中丝氨酸所占比例最大,整个蛋白呈碱性且带正电,属于亲水性蛋白。根据蛋白二级结构预测结果,推测该蛋白的结构功能域可能主要由无规则卷曲和β-折叠片构成。棉花花粉瞬时表达结果表明,转化HAL1后,3种陆地棉花粉的绿色荧光现象都明显增强,说明该基因可以在这3种陆地棉的花粉中表达。用100 mol·L^(-1)NaCl盐溶液对转基因棉花T_0种子和受体材料中s9612自交种进行胁迫,发现转基因种子萌发能力明显强于受体材料,表明HAL1可以提高种子耐盐性。根据基因核苦酸序列设计2对引物对T_0转基因棉花幼苗进行分子检测,将纯化后的PCR产物进行直接测序,测序结果证明转基因成功。对鉴定出的转基因植株进行叶盘耐盐性分析发现;在600 mol·L^(-1)NaCl和400 mol·L^(-1)NaCl盐胁迫下转基因植株叶盘叶绿素含量均高于对照植株,且在600 mol·L^(-1 穆敏 舒娜 王帅 郭丽雪 樊伟丽 阴祖军 王俊娟 王德龙 叶武威关键词:酵母 陆地棉 分子检测 一种棉花耐镉性的鉴定方法 本发明提供一种方便、快捷、经济地鉴定棉花耐镉性的方法,包括:(1)将棉花种子脱绒,消毒处理,再用无菌水浸泡催芽;(2)对催芽后的种子进行镉胁迫处理,清水做对照,考察两种处理下的发芽率,进行耐镉性大小评价;其中,以邯242... 叶武威 韩明格 舒娜 张冰蕾 陈修贵 王德龙 陆许可 王俊娟 王帅 崔瑞峰 樊伟莉 郭丽雪 陈超文献传递 陆地棉耐盐相关SNP筛选和鉴定 2020年 盐胁迫是限制作物产量提高的一个主要非生物因素。棉花是盐碱地的先锋作物,研究棉花的耐盐性,筛选耐盐相关分子标记,对充分利用棉花的耐盐性及棉花耐盐种质鉴定有重要意义。在本研究中,我们对前期筛选到的1281个耐盐相关候选SNP即SNPr(SNP related to salt tolerance)进行分析,利用BEDTools软件获得位于基因上的SNPr,并使用AgriGO(http://bioinfo.cau.edu.cn/agriGO/)和KAAS(http://www.genome.jp/tools/kaas/)网站对这些基因进行GO和KEGG分析。借助perl编程,获得非同义SNPr。分析发现,1281个SNPr中,有353个位于基因上,其中247个位于基因外显子区,且有174个是非同义SNPr。从中选择12个非同义SNPr,使用CAPS/dCAPS引物进行验证,并结合田间耐盐鉴定的结果,最终得到1个与耐盐相关的SNPr。这个SNPr位于CHD3/CHD4家族基因上,可能与盐胁迫过程中的表观修饰有关。 王晓歌 舒娜 王俊娟 陆许可 陈修贵 王德龙 王帅 郭丽雪 陈超 叶武威关键词:耐盐 一种棉花耐碱性的鉴定方法 本发明提供一种棉花种质耐碱鉴定的方法,包括:将棉花种子脱绒处理;依次用双氧水浸泡、无菌水冲洗;无菌水浸泡催芽;(2)对“露白”种子进行碱胁迫处理,清水做对照,考察两种处理下的胚根成活率,进行耐碱性综合评价;以中9807作... 叶武威 张冰蕾 舒娜 王俊娟 王德龙 陆许可 陈修贵 韩明格 王帅 崔瑞峰 樊伟莉 郭丽雪 陈超文献传递 UFD2结构域在棉花和其他24种植物中的进化分析 2017年 UFD2(ubiquitin fusion degradation-2)结构域是UFD2蛋白序列上一段高度保守的序列,该结构域在植物的UFD2和RKP2类泛素连接酶中都存在,UFD2结构域在植物中普遍存在,但是关于该结构域在植物中的研究还比较少。为研究含UFD2结构域的蛋白及基因在棉花和其它一些植物中的进化,以及4种棉花内的进化,本研究在已完成测序的4种棉花和其他24种植物的基因组数据库中,以酵母的UFD2(Gen Bank:Z74238.1)基因序列以及拟南芥中鉴定At UFD2(At5g15400)为参考序列通过同源比对的方法获得所有含有UFD2结构域的蛋白序列、CDS序列和基因全序列,然后用Bio Edit、Clustal X18.3、MEGA6.0、GSDS2.0等生物信息学工具对其进行序列特征、多序列比对、系统进化、基因结构等分析,从棉花和其他24种植物中共鉴定出63个基因,系统进化分析显示可分为两大类,且与植物中UFD2和RKP两类对应上,所有植物都含有UFD2类蛋白,但含有UFD2结构域的RKP类蛋白只有部分植物有。UFD2类蛋白的UFD2结构域的序列长度约是RKP类蛋白中UFD2结构域的2倍,UFD2结构域对应在基因上区域UFD2类基因有13个内含子,而RKP类只有4或5个,棉花中的6个RPK类蛋白的UFD2结构域序列完全一致,而7个UFD2类蛋白的UFD2结构域有4个差异位置共7个氨基酸位点,结果表明:两类含有UFD2结构域的蛋白在进化上独立,同一类蛋白的进化和物种进化基本一致,棉花中的RKP棉花基因保守度高于UFD2类基因的。 舒娜 舒娜 韩明格 崔瑞峰 王德龙 王帅 王德龙 樊伟丽 王俊娟 郭晓宁关键词:进化 棉花 一种筛选棉花抗旱相关基因的方法 本发明公开了一种筛选棉花抗旱相关基因的方法。本发明所提供的方法包括:(1)设置如下实验组和对照组:实验组:对待测棉花进行干旱胁迫处理;对照组:对所述待测棉花不进行干旱胁迫处理;(2)检测并比较所述实验组和所述对照组中所述... 叶武威 陆许可 陈修贵 王俊娟 舒娜 王德龙 王帅 樊伟莉 郭晓宁 郭丽雪文献传递 一种棉花耐镉性的鉴定方法 本发明提供一种方便、快捷、经济地鉴定棉花耐镉性的方法,包括:(1)将棉花种子脱绒,消毒处理,再用无菌水浸泡催芽;(2)对催芽后的种子进行镉胁迫处理,清水做对照,考察两种处理下的发芽率,进行耐镉性大小评价;其中,以邯242... 叶武威 韩明格 舒娜 张冰蕾 陈修贵 王德龙 陆许可 王俊娟 王帅 崔瑞峰 樊伟莉 郭丽雪 陈超一种用于目的基因干扰的RNA片段及其应用 本发明公开了一种用于目的基因干扰的RNA片段及其应用。本发明提供了一种用于干扰目的基因的RNA,为将miR160前体序列中的miR160序列替换为干扰目的基因RNA片段甲,且将所述miR160前体序列中的miR160序列... 阴祖军 叶武威 王晓歌 王帅 崔法 王俊娟 王德龙 舒娜 樊伟丽 郭丽雪 崔瑞峰 郭晓宁文献传递 一种筛选棉花抗旱相关基因的方法 本发明公开了一种筛选棉花抗旱相关基因的方法。本发明所提供的方法包括:(1)设置如下实验组和对照组:实验组:对待测棉花进行干旱胁迫处理;对照组:对所述待测棉花不进行干旱胁迫处理;(2)检测并比较所述实验组和所述对照组中所述... 叶武威 陆许可 陈修贵 王俊娟 舒娜 王德龙 王帅 樊伟莉 郭晓宁 郭丽雪蛋白质GhDHN1在调控植物抗逆性中的应用 本发明公开了蛋白质GhDHN1在调控植物抗逆性中的应用。所述蛋白质GhDHN1为a1)或a2)或a3):a1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质;a2)在序列表中序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋... 王俊娟 叶武威 穆敏 王帅 陆许可 陈修贵 王德龙 阴祖军 樊伟莉 郭丽雪 王晓歌 舒娜文献传递