王帅
- 作品数：95 被引量：198H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院棉花研究所更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家科技重大专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 杜氏盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因在棉花中的转化及分子检测被引量：2
- 2015年
- 根据NCBI核酸数据库中杜氏盐藻耐盐基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(dunaliella salina glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,Ds GAPDH)的c DNA全长序列信息,本研究利用RT-PCR技术扩增克隆该基因,获得完整全长为1 131 bp并编码376个氨基酸的多肽的ORF序列。生物信息学分析表明:Ds GAPDH编码的蛋白与拟南芥、蒺藜苜蓿、玉米和葡萄等物种高度同源,分别达到90%、92%、96%和97%。构建的系统发育树结果显示,该基因编码的蛋白与团藻中该蛋白的亲缘关系最为接近。该蛋白主要由四种二级结构即α-螺旋、β-折叠、转角和无规则卷曲等组成。构建p BI121-Ds GAPDH植物表达载体,以非抗虫棉F12A、F12B和HU-749513为材料,利用基因枪活体技术转化棉花花粉,并对T0代种子进行分子检测和相关序列验证,成功获得两株阳性转基因植株,为基因枪活体转化技术研究奠定了一定的实践基础,同时也为棉花耐盐机制的研究提供了新材料。
- 孔静静陆许可赵小洁阴祖军王帅王德龙王俊娟樊伟丽张德超张天豹叶武威
- 关键词：杜氏盐藻陆地棉分子检测
- 碱胁迫下棉花分子响应及棉花花青素生物合成的相关基因研究
- 碱胁迫是影响植物正常生长发育的主要非生物胁迫之一,也是制约农作物产量和持续性生态环境体系建设的主要因素。棉花在我国不仅是一种重要的经济作物,也是适应盐碱环境的先锋植物,因此深入探究棉花耐碱机制对于有效提高棉花的耐碱性、培...
- 王心蕾王帅王俊娟陆许可陈修贵王德龙阴祖军郭丽雪赵兰杰叶武威
- 关键词：棉花花青素碱胁迫LC-MS
- 酵母耐盐相关基因HAL1在棉花中的功能表达被引量：4
- 2016年
- 【目的】克隆酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)耐盐基因HAL1(halotolerance)并转化棉花,探究该基因在棉花中的功能,进一步探究酵母耐盐相关基因在高等植物中的具体功能。【方法】根据随NCBI核酸数据库中酵母耐盐基因HAL1的mRNA全长序列信息,利用RT-PCR技术从酿酒酵母AS2.375中克隆该基因。选择酶切位点XbaⅠ和SmaⅠ对表达载体pBI121::GFP进行双酶切,采用In-Fusion技术构建pBI 121-ScHAL1::GFP融合表达载体。以自发荧光较弱的陆地棉品种Y-2067、ZA-23、GZ-2的花粉为材料,用基因枪轰击棉花花粉进行瞬时表达研究。采用基因枪活体转化技术将外源基因表达载体pBI121-HAL1::GFP转化棉花盐敏感材料中s9612,获得T_0棉花转基因种子。用100mol·L^(-1)NaCl盐溶液对转基因T_0种子进行耐盐性发芽试验,并进行分子检测,对鉴定出的转基因植株进行叶盘耐盐性分析。【结果】从酿酒酵母As2.375中克隆耐盐基因ScHAL1,基因全长885 bP,共编码294个氨基酸。对其序列进行分析,发现HAL1蛋白中丝氨酸所占比例最大,整个蛋白呈碱性且带正电,属于亲水性蛋白。根据蛋白二级结构预测结果,推测该蛋白的结构功能域可能主要由无规则卷曲和β-折叠片构成。棉花花粉瞬时表达结果表明,转化HAL1后,3种陆地棉花粉的绿色荧光现象都明显增强,说明该基因可以在这3种陆地棉的花粉中表达。用100 mol·L^(-1)NaCl盐溶液对转基因棉花T_0种子和受体材料中s9612自交种进行胁迫,发现转基因种子萌发能力明显强于受体材料,表明HAL1可以提高种子耐盐性。根据基因核苦酸序列设计2对引物对T_0转基因棉花幼苗进行分子检测,将纯化后的PCR产物进行直接测序,测序结果证明转基因成功。对鉴定出的转基因植株进行叶盘耐盐性分析发现;在600 mol·L^(-1)NaCl和400 mol·L^(-1)NaCl盐胁迫下转基因植株叶盘叶绿素含量均高于对照植株,且在600 mol·L^(-1
- 穆敏舒娜王帅郭丽雪樊伟丽阴祖军王俊娟王德龙叶武威
- 关键词：酵母陆地棉分子检测
- 陆地棉焦磷酸酶基因GhVP的启动子序列分析
- 2017年
- 为了筛选棉花耐盐转基因育种所需的诱导型候选启动子,本研究根据陆地棉焦磷酸酶基因GhVP的cDNA序列和陆地棉基因组序列,获得陆地棉焦磷酸酶基因GhVP启动子序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,该启动子具有多个基本元件TATA-box和CAAT-box,并含有多种逆境胁迫诱导相关的响应元件,含有丰富的光响应元件以及其他多种顺式作用元件。推测GhVP基因的转录同时受光、高温、干旱、创伤、脱落酸诱导,受生物钟控制的顺式元件调控,参与棉花的生长发育。
- 王俊娟王帅阴祖军王德龙王晓歌崔瑞峰樊伟莉郭丽雪郭晓宁叶武威
- 关键词：棉花启动子
- 一种双浓度PEG6000评价陆地棉萌发期抗旱性的方法
- 本发明涉及植物逆境胁迫技术领域，具体涉及一种双浓度PEG6000评价陆地棉萌发期抗旱性的方法。本发明首次提出采用浓度为12％和16％的PEG6000滤纸进行陆地棉萌发期抗旱性的评价。采用本发明提供的方法，能够在36份陆地...
- 王俊娟叶武威韩迎春王帅赵兰杰马宝玲阴祖军王延琴陆许可付小琼王德龙陈修贵郭丽雪陈超王晓歌孙亮庆芮存王琴琴范亚朋张悦新冯茜贤
- 陆地棉脱水素基因GhDHN1与拟南芥AtCOR47基因的比较
- 2018年
- 利用生物信息学分析了陆地棉脱水素基因GhDHN1与拟南AtCOR47基因的区别。结果发现,GhDHN1与拟南AtCOR47基因均有2个外显子,1个内含子;不同的是,AtCOR47基因的内含子和外显子均长于GhDHN1基因的。两个基因的内含子均有较高的AT含量,AtCOR47内含中AT的含量更高,两者外显子和内含子的剪接符合GT-AG规则。GhDHN1与AtCOR47基因所编码的蛋白质均为酸性,带负电荷,属于亲水性蛋白质,均属于SKn型脱水素,其氨基酸序列的一致性为45.2%;不同的是,AtCOR47比GhDHN1多一个保守性的K片段;GhDHN1和AtCOR47基因的启动子比较发现,2个基因的启动子中含有相似的响应非生物逆境胁迫的顺式作用元件和激素响应顺式作用元件,而GhDHN1拥有AtCOR47不具有的参与保卫与胁迫响应顺式作用元件TC-rich repeats,AtCOR47拥有GhDHN1不具有的乙烯响应元件。
- 王俊娟陆许可郭丽雪阴祖军王德龙陈修贵王帅樊伟丽陈超叶武威
- 关键词：陆地棉拟南芥生物信息学
- 一种棉花耐镉性的鉴定方法
- 本发明提供一种方便、快捷、经济地鉴定棉花耐镉性的方法，包括：(1)将棉花种子脱绒，消毒处理，再用无菌水浸泡催芽；(2)对催芽后的种子进行镉胁迫处理，清水做对照，考察两种处理下的发芽率，进行耐镉性大小评价；其中，以邯242...
- 叶武威韩明格舒娜张冰蕾陈修贵王德龙陆许可王俊娟王帅崔瑞峰樊伟莉郭丽雪陈超
- 文献传递
- 棉花GhDMT3的功能验证及生物信息学分析
- 2019年
- 通过构建棉花GhDMT3的VIGS沉默载体并侵染棉花,探究该基因在棉花和高等植物中的功能。采用生物信息学方法对棉花DNA甲基转移酶基因GhDMT3(CotAD_46796)的DNA序列结构特性、该基因编码的蛋白质的理化性质、疏水性和蛋白二级结构等方面进行分析。克隆该基因,并构建pYL156:GhDMT3沉默载体。蛋白质相对分子质量为71 107.02 kD,等电点为4.85,不稳定系数为36.33。不同胁迫处理(冷、干旱)VIGS沉默GhDMT3的棉花幼苗表现出明显的表型差异。qRT-PCR的表达模式分析发现,不同胁迫下p YL156侵染的棉花中不同部位表达量没有变化,用pYL156:GhDMT3侵染过的棉花中GhDMT3转录水平与对照相比明显下降。与未沉默GhDMT3的棉花幼苗相比,沉默GhDMT3的棉花幼苗抗逆性显著增强。
- 杨笑敏王俊娟王德龙陆许可陈修贵郭丽雪王帅陈超王晓歌韩明格叶武威
- 关键词：陆地棉生物信息学分析
- 陆地棉耐碱相关基因挖掘及功能验证
- 目前,对棉花的耐盐分子机理研究取得了一定的进展,也培育了一些耐盐棉花品种,但是生产上并没有大面积推广的棉花耐盐品种,推测原因可能是盐碱地既存在盐胁迫,又存在碱胁迫,耐盐棉花品种不能很好地应对碱胁迫。因此,在棉花中开展耐碱...
- 陈修贵陆许可王德龙阴祖军王帅王俊娟郭丽雪叶武威
- 关键词：陆地棉盐胁迫碱胁迫
- 陆地棉萌发至幼苗期抗冷性的鉴定被引量：23
- 2016年
- 【目的】低温胁迫是影响棉花正常生长的重要因子之一,通过对棉花种质进行合理的抗冷性鉴定,可以为棉花的抗冷机制研究提供重要的先决条件,进而为棉花抗冷品种的选育提供一定的理论参考。【方法】利用4个抗冷性不同的陆地棉品种(系),设置0、4、10和15℃不同温度处理7 d,然后在正常条件(28℃,光照/黑暗,14 h/10 h)恢复生长7 d,筛选适合棉花萌发期进行抗冷性鉴定的低温条件;然后对4个品种(系)进行0℃低温处理1、2、3、4、5、6和7 d,恢复正常生长7 d,筛选萌发期抗冷性鉴定0℃低温处理的天数。对于芽期的抗冷性鉴定,选用抗冷性差异显著的2个陆地棉材料进行4℃低温处理0、1、2、3、4、5、6和7 d,筛选适用于芽期抗冷鉴定的低温处理的天数。将47个陆地棉材料(子叶期)进行4℃处理24 h,恢复正常生长7 d后调查冷害指数,鉴定棉花子叶期的抗冷性。采用南京建成生物工程研究所研制的试剂盒测定芽期和子叶期低温胁迫后的生化指标。【结果】通过对棉花不同时期,包括萌发期、芽期和子叶期进行不同低温胁迫条件的筛选,最终初步建立了适合棉花不同时期的抗冷性鉴定标准。0℃处理4 d,恢复正常生长7 d的相对子叶平展率可以作为萌发期的抗冷鉴定指标;4℃处理5 d,恢复正常生长的7 d的子叶平展率可以作为芽期的抗冷鉴定指标;4℃处理24 h,恢复正常生长的7 d的抗冷指数可以作为子叶期的抗冷鉴定指标。抗冷材料豫2067芽的SOD酶活和POD酶活均在低温处理前期呈上调趋势,之后下降至趋于平稳,而冷敏感材料衡棉3号芽的两种酶在低温处理前期迅速下降,然后上调后趋于平稳;2个材料芽的CAT酶活性在低温处理早期均先上升后下降,在冷处理后期抗冷材料豫2067的CAT酶活一直高于冷敏感材料衡棉3号;2个材料的可溶性蛋白含量在冷处理早期比较接近,在冷处理后期抗冷材料�
- 王俊娟王德龙阴祖军王帅樊伟丽陆许可穆敏郭丽雪叶武威喻树迅
- 关键词：生育时期抗冷性生化特性
