胡正
- 作品数：19 被引量：14H指数：2
- 供职机构：吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 基于piggyBac转座子系统构建长期表达人细胞因子的免疫缺陷小鼠模型
- 2020年
- 目的:探讨表达人白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素3 (IL-3)、白细胞介素15 (IL-15)、干细胞生长因子(SCF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的piggyBac (PB)转座子系统在免疫缺陷小鼠体内的长效表达情况,为改善人源化小鼠模型中人免疫细胞的重建提供简单长效的新方法。方法:构建含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的PB转座子质粒(PB-GFP),构建含有人IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF基因的PB转座子质粒(PB-5F)。293T细胞分为阴性对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pLVTHM质粒)、瞬时转染组(转染PB-GFP质粒)和稳定转染组[共同转染PB-GFP和转座酶质粒(super-PB)]。转染后每3d,采用流式细胞术检测各组细胞中GFP阳性(GFP+)细胞百分率。将NOD.Cg-Prkdcscid IL2rgtm1Wjl/SzJ (NCG)小鼠分为瞬时转染组和稳定转染组,瞬时转染组小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒,稳定转染组小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒和super-PB质粒。小鼠尾静脉高压注射后1、3、5和9d及随后每周1次采血分离血清,ELISA法检测各组NCG小鼠血清中IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF水平。结果:PB-GFP转染293T细胞30d后,稳定转染组GFP+细胞百分率(4.61%±0.42%)明显高于阳性对照组(0.58%±0.05%)和瞬时转染组(0.86%±0.10%)(P<0.05)。NCG小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒,注射后第30天,稳定转染组小鼠血清中IL-6、IL-15和GM-CSF水平均高于瞬时转染组(P=0.048,P=0.051,P=0.045);注射后第60天,稳定转染组小鼠血清中仍能检测到IL-6、IL-15和GM-CSF。结论:体外验证了PB转座子系统的长效表达,成功构建了具有人IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF基因的PB转座子载体的质粒,建立了长效稳定表达人IL-6、IL-15和GM-CSF的免疫缺陷小鼠模型。
- 吕亚楠范伟胡正
- 关键词：白细胞介素3白细胞介素15干细胞生长因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转座子
- 人胸腺前体细胞长期生存并支持胸腺发育
- 研究背景:胸腺发育对于T细胞的分化、成熟和免疫系统的形成起着至关重要的作用.长期以来,胸腺中的前体细胞被认为生命周期短,无法持续性支持胸腺发育.而长期的胸腺发育依赖于由造血干细胞(HSC)分化来的T细胞前体细胞持续地向胸...
- 胡正夏金星杨永广
- 关键词：胸腺发育
- Fah^(-/-)Rag2^(-/-)IL2Rg^(-/-)小鼠肝脏原位异种重建模型的建立及其评价
- 2023年
- 目的:构建猪-小鼠肝细胞嵌合模型,探讨猪肝细胞在无T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)介导排斥条件下的移植及再生的相关条件,评估猪肝细胞在异种受体中的定居、增殖和功能因子分泌情况,为提高猪源化小鼠模型中猪肝细胞的重建效率提供依据。方法:采用脾脏内注射法将猪肝细胞移植至Fah^(-/-)Rag2^(-/-)IL2Rg^(-/-)(FRG)小鼠体内,构建移植模型。将16只FRG小鼠随机分为对照组、空白对照组、实验组和绿色荧光蛋白(GFP)基因实验组,每组4只。空白对照组小鼠停止给予2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-1,4-环己二酮(NTBC),监测体质量;对照组4只小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;实验组小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;GFP基因实验组小鼠注射携带GFP基因猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d。观察各组小鼠体质量、生存情况。检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,流式细胞术检测各组小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1+细胞表达情况,ELISA法检测各组小鼠血清中猪白蛋白表达水平,免疫组织化学法检测各组小鼠猪肝细胞再生效率。结果:与剪碎后再以胶原酶消化的方式比较,两步灌注法消化过程更温和、对细胞损伤更小,细胞活性可以达到92%。停止给予NTBC后,对照组小鼠体质量进行性降低,生命活力逐渐降低。连续停药第28天小鼠开始出现死亡现象。小鼠肝组织中出现肝细胞肿大、细胞浆疏松透亮和细胞核溶解等不可逆细胞损伤。空白对照组小鼠停药后血清中ALT水平逐渐升高。对照组停药小鼠重新给予NTBC后,体质量逐渐恢复至正常水平。流式细胞术,停止给予NTBC后,小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1
- 张蒙周琪胡正
- 关键词：肝细胞免疫缺陷小鼠
- NOD/SCID小鼠巨噬细胞排斥人红细胞的机制研究
- 研究背景:具有人红细胞组成的人源化小鼠模型的建立对于研究由胚胎干细胞分化而来的人红细胞的应用以及研究人红细胞相关疾病(如疟疾等)都具有重要意义。将人造血干细胞(HSC)移植入NOD/SCID小鼠建立的人源化小鼠中虽然具有...
- 陈冰胡正杨永广
- 关键词：人红细胞补体
- 文献传递
- 针对人源化动物单细胞转录组测序的非人细胞过滤系统
- 本发明公开一种针对人源化动物单细胞转录组测序的非人细胞过滤系统，包括：数据采集模块、数据比对模块、数据处理模块和数据过滤模块，其中，数据采集模块、数据比对模块、数据处理模块和数据过滤模块依次连接；数据采集模块用于采集测序...
- 付聪董帅侯欣彤胡正杨永广
- Application of immunodeficient mice to study human red blood cell reconstitution in vivo
- The recent development of novel gene editing and stem cell technologies has increased the potential to cure he...
- 胡正
- 一种嵌合MHC和自身抗原的载体片段及其应用
- 本发明公开了一种嵌合MHC和自身抗原的载体片段及其应用。所述的载体片段含有HLA基因的cDNA序列、表达自身抗原的基因以及表达胞内活化域序列的基因。本发明构建了多种嵌合MHC‑多肽抗原的表达载体片段，可以通过目前特别成熟...
- 谭淑莲胡正杨永广
- 文献传递
- 人抑癌基因p53与PTEN的CRISPR-Cas9导向RNA靶点筛选与效率验证
- 2018年
- 目的:探讨应用新兴基因编辑技术规律性成簇的间隔短回文重复序列-核酸酶系统(CRISPR-Cas9)对人体内2个抑癌基因p53与PTEN进行编辑的可行性,并通过体外检测研究其编辑效果,为原代细胞向肿瘤细胞转化及建立人源化小鼠肿瘤模型提供实验研究工具。方法:序列分析确定p53及PTEN基因各亚型mRNA剪辑的共同外显子区域,针对该区域进行软件评分,设计选择针对p53及PTEN基因的CRISPR-Cas9导向RNA(sgRNA)靶点各2个,即p53-1、p53-2、PTEN-1和PTEN-2。构建共表达sgRNA与Cas9-P2A-GFP的CRISPR-Cas9质粒。选择处于对数生长期的293T细胞,将其分为对照组(未转染质粒的野生型293T细胞)和实验组(利用Lipofectamine 2000转染sgRNA-Cas9-P2A-GFP共表达质粒的293T细胞),流式细胞术分选实验组绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞(成功转染质粒的细胞),2周扩增培养后提取基因组DNA,PCR扩增基因组DNA包含突变位点的区段,将扩增产物凝胶电泳后胶回收,连接至pEASY-Blunt Zero克隆载体中,转化,挑取单克隆菌斑培养,提取质粒DNA测序,对比对照组与实验组测序结果后确定RNA介导的特异基因位点突变效率。结果:转染sgRNA-Cas9-P2A-GFP质粒的实验组流式细胞术分选后GFP阳性率高达82%,与分选前(4%)比较明显升高(P<0.05)。对分选培养后的细胞提取基因组PCR,其中包含p53突变位点的扩增片段长度均为612bp,而包含PTEN-1突变位点的扩增片段长度为667bp,包含PTEN-2突变位点的扩增片段长度为947bp。对比实验组基因测序结果与未经sgRNA-Cas9-P2A-GFP质粒转染的对照组野生型细胞测序结果,p53-1、p53-2和PTEN-2诱导的突变效率分别为54.5%、45.5%和33.3%。结论:针对人p53及PTEN基因设计的sgRNA p53-1、p53-2和PTEN-2能够在基因组水平较高效率地成功介导Cas9进行位点特异性的基因编辑。
- 许文舒胡正杨永广王晓丹
- 关键词：抑癌基因P53抑癌基因PTEN
- 基于人源化小鼠的新型冠状病毒人肺内感染研究
- 目的:新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染严重危害人类健康,需要有效动物模型开展研究。普通小鼠无法被SARS-CoV-2感染,灵长类动物实验价格昂贵且不易操作。因此,本研究旨在探索移植有人肺组织的人源化小鼠模型在SA...
- 胡正孙任任赵宗正付聪王亦心郭振东张春茂刘丽娜张诚舒畅何津李伟高玉伟华树成周琪杨永广
- 关键词：新型冠状病毒免疫病理损伤
- 人源化小鼠模型构建和应用的研究进展被引量：8
- 2018年
- 人源化小鼠是指带有功能性的人类基因、细胞或组织的小鼠模型,通常被用于人类疾病体内研究的活体替代模型,是利用转基因或同源重组的方法将人类基因"放置"在小鼠模型上所制备的模型,这类小鼠模型在模拟某些人类疾病时有效性较高。人源化小鼠模型在艾滋病、癌症、传染病和血液病研究领域等均有广泛的应用。具有人造血免疫系统组成的人源化小鼠模型已经被证明在解码人类疾病奥秘中具有巨大的优势和广泛的应用前景。本文从免疫系统人源化小鼠模型演变的历史过程、具体的分类方法及模型的应用等几个方面进行综述。
- 陈冰刘昊川李龙云赵国庆王震杨永广李凯胡正
- 关键词：肿瘤传染性疾病自身免疫性疾病
