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刘宝京

作品数：13 被引量：47H指数：4
供职机构：河北农业大学更多>>
发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：农业科学更多>>

合作作者

文献类型

  • 12篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 13篇农业科学

主题

  • 12篇病毒
  • 5篇猪流行性腹泻
  • 5篇猪流行性腹泻...
  • 5篇流行性
  • 5篇流行性腹泻
  • 5篇流行性腹泻病
  • 5篇流行性腹泻病...
  • 5篇腹泻
  • 5篇腹泻病
  • 5篇腹泻病毒
  • 4篇蛋白
  • 3篇丁型
  • 3篇细胞
  • 3篇冠状
  • 3篇冠状病毒
  • 3篇S蛋白
  • 2篇圆环病毒
  • 2篇树突
  • 2篇树突状
  • 2篇树突状细胞

机构

  • 13篇河北农业大学
  • 4篇河北省动物疫...
  • 1篇衡水市畜牧技...

作者

  • 13篇刘宝京
  • 11篇范京惠
  • 11篇左玉柱
  • 6篇代飞
  • 5篇顾文源
  • 5篇孔园园
  • 1篇李清艳
  • 1篇秦建华
  • 1篇马玉忠

传媒

  • 3篇中国兽医学报
  • 3篇畜牧兽医学报
  • 3篇猪业科学
  • 2篇河北农业大学...
  • 1篇北方牧业

年份

  • 2篇2019
  • 3篇2018
  • 5篇2017
  • 3篇2016
共 13 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
2017年
为了制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体(MAb),本试验将Vero细胞中增殖的PEDV超速离心纯化,作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术和PEDV重组S蛋白为基础的间接ELISA方法,制备并筛选能稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞;分别采用间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验,对单克隆抗体的亚型、特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明,本试验成功获得了1株稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞株5C3。MAb亚类鉴定为IgM,轻链为k型。杂交瘤细胞连续传至20代,细胞培养上清液和小鼠腹水抗体效价分别稳定在1∶600和1∶10 000。特异性试验结果显示,MAb不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PrV)、猪圆环病毒(PCV2)发生交叉反应。western-blot结果显示,MAb能特异性识别PEDV的重组S蛋白。IFA试验结果表明,MAb能与PEDV感染的vero细胞产生特异性荧光。说明本试验获得的MAb能特异性识别重组及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特异性。
邸晶美顾文源左玉柱罗尚星刘宝京申小强代飞范京惠
关键词：猪流行性腹泻病毒单克隆抗体S蛋白
不同药物对树突状细胞捕获猪细小病毒样颗粒的影响被引量：2
2016年
通过磁性筛选的方法从猪的脾脏分离树突状细胞(DC),经低渗和钾离子缺乏处理或与氯丙嗪、二甲基氨基吡咪、松胞素D、菲律平等药物分别在37℃下作用1h后,再与荧光素FITC标记的猪细小病毒样颗粒(FITC-PPVVLPs-E290)在37℃下作用4h,应用流式细胞仪检测在体外DC对PPV-VLPs的捕获情况。结果显示:钾离子缺乏及氯丙嗪对DC的捕获效率无影响,而经二甲基氨基吡咪、菲律平、及松胞素D处理的DC对PPV-VLPs-E290捕获效率明显下降。结果表明:DC对PPV-VLPs-E290的捕获与肌动蛋白及巨胞饮、小窝蛋白介导的方式有关,而与网格蛋白介导的方式无关。
邸晶美左玉柱申小强顾文源刘宝京罗尚星代飞常嫣嫣孔园园范京惠
关键词：病毒样颗粒树突状细胞
影响猪树突状细胞对猪细小病毒样颗粒提呈方式的因素被引量：1
2017年
旨在探明猪细小病毒样颗粒(PPV-VLPs)被猪脾树突状细胞(DC)捕获后,被提呈的方式。首先通过磁性筛选的方法从非免疫猪和免疫猪的脾分离CD172a+CD11R+DC及CD4-CD8+T细胞。DC分别与伯氨喹、放线菌酮、氯喹、乳胞素、布雷菲德菌素A及亮抑肽酶、胃酶抑素等作用1h后,再与细小病毒样颗粒PPV-VLPs-E290在37℃作用4h,应用CD8+T细胞的细胞毒性分析检测DC对PPV-VLPs-E290的提呈情况。乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测结果显示,伯氨喹及亮抑肽酶对DC提呈PPV-VLPs-E290的效率无明显影响,胃酶抑素部分抑制,而氯喹、放线菌酮、布雷菲德菌素A及乳胞素则可使DC提呈PPV-VLPs-E290的效率明显下降。结果表明,DC通过交叉提呈的方式提呈PPV-VLPs-E290。晚期内体的酸性环境以及蛋白酶的水解均参与了PPV-VLPs-E290的提呈过程。
罗尚星申小强顾文源范京惠邸晶美刘宝京代飞孔园园常嫣嫣左玉柱
关键词：病毒样颗粒树突状细胞
猪流行性腹泻病毒S基因的研究进展被引量：4
2016年
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种急性肠道传染病,是导致仔猪早期死亡的重要疫病之一。近年来,猪流行性腹泻的流行区域有逐渐扩大的趋势,已成为中国甚至世界最常见的猪腹泻传染病之一。通过对猪流行性腹泻病毒基因组概述、S基因及其编码蛋白的功能特性、基于猪流行性腹泻病毒S基因的诊断技术及其疫苗研究进展等方面进行综述,以期对猪流行性腹泻病毒S基因研究以及猪流行性腹泻的预防和控制提供帮助。
孔园园范京惠左玉柱邸晶美刘宝京罗尚星
关键词：猪流行性腹泻病毒S基因S蛋白
基于猪丁型冠状病毒重组S1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用被引量：8
2019年
为了解猪丁型冠状病毒(PDCoV)的流行情况,为PDCoV血清抗体检测提供工具,本研究应用原核表达系统表达部分PDCoV纤突蛋白(S)作为检测抗原,建立了基于PDCoV S1蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并用该方法检测了2017年1月至12月自河北地区部分猪场收集的待检血清样品570份。结果显示:本研究建立的PDCoV间接ELISA方法能够特异地检测血清中的PDCoV抗体;与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及伪狂犬病病毒的抗血清无交叉反应;批内重复变异系数1.9%~5.4%、批间重复变异系数2.3%~5.1%。570份待检血样中105份呈阳性,阳性率为18.4%(105/570),高于之前本实验室检测2016年1月至2016年10月河北地区PDCoV IgG抗体阳性率(11%),提示河北地区PDCoV的感染率呈上升趋势。本研究建立的ELISA方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点,可用于临床PDCoV血清抗体的检测。
侯林杉贾敬亮顾文源刘宝京师乾凯袁广富陈少杰范京惠左玉柱
关键词：间接ELISA
CSFV、PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及其应用被引量：9
2019年
由猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的繁殖障碍性疫病在中国的不断暴发,增加了猪的发病率和死亡率。为了建立同时检测这3种病毒的多重PCR方法,本研究根据GenBank中这3种病毒的参考基因序列设计引物,并对反应中的影响因素进行优化,建立了同时检测CSFV、PRV和PRRSV的多重PCR方法。该方法扩增的基因片段大小分别为570(CSFV),232 (PRRSV)和173bp(PRV)。敏感性和特异性试验结果显示,该方法对3种病毒的核酸最低检出量分别为23.88(CSFV),13.10(PRRSV)和14.60pg(PRV),对大肠杆菌(Ec.oli)、沙门菌(Salmonella)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性。对2015年5月至2016年1月收集的168份临床样本检测结果显示,CSFV阳性率为24.4%,PRRSV阳性率为21.4%,提示河北省该段时间内引起猪繁殖障碍性疫病的主要病原为CSFV和PRRSV。经多重PCR检测为PRRSV、PRV或CSFV阳性的临床样本,再次使用商品化的试剂盒进行检测,符合率为100.0%。这些结果表明,本试验建立的多重PCR方法省时、高效,可用于PRRSV、PRV和CSFV感染的临床诊断。
顾文源范京惠邸晶美罗尚星刘宝京左玉柱
关键词：伪狂犬病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒
猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：2
2017年
本实验将构建的重组表达质粒pET-32a(+)-S798转入大肠杆菌中诱导表达,获得表达量较高的包涵体蛋白。以纯化的S重组蛋白作为包被抗原,初步建立了母猪乳汁中IgA抗体的间接ELISA检测方法。抗原包被浓度为0.938ug/mL,乳汁稀释度为1:320,对反应条件进行优化,批内批间重复性试验变异系数均小于10%,与市售试剂盒相比特异性为90%、敏感性为94%、符合率为92%,本方法具有良好的特异性和敏感性,可以对猪乳汁中抗流行性腹泻病毒的IgA抗体水平进行快速检测。
孔园园邸晶美罗尚星刘宝京范京惠左玉柱
关键词：猪流行性腹泻病毒S蛋白ELISA
猪丁型冠状病毒与猪流行性腹泻病毒双重实时荧光定量RT-PCR方法的建立和初步应用被引量：11
2018年
猪丁型冠状病毒(PDCoV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV)均为致病性冠状病毒,可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡。为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列,设计了两对特异性引物,分别扩增其N、M基因保守区,并将其克隆至pMD19-T载体;将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板,建立了一种检测PDCoV和PEDV的双重的SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,并对其反应的敏感度、特异性和重复性进行了检测。结果表明,本试验所建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法对PDCoV和PEDV的最低检测量分别为51和32拷贝·μL-1,且与PBoV、TGEV、PRV、PCV2无交叉反应,特异性较好;对2016年至2017年在河北省收集的130份仔猪腹泻样本检测,结果显示,PDCoV的检出率为16.9%,PEDV的检出率为66.2%,二者同时感染的检出率为2.3%,与普通RT-PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为PDCoV和PEDV的诊断及分子流行病学调查提供了一种快速、定量检测方法。
罗尚星范京惠刘宝京师乾凯侯林杉左玉柱
关键词：猪流行性腹泻病毒实时定量PCR
LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型的建立被引量：4
2017年
为建立LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型,通过分离、培养奶牛蹄真皮细胞,用不同浓度的LPS处理蹄真皮细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测CYP3A4、CYP1A1mRNA的表达,Western blot法检测CYP450蛋白的表达,并通过ELISA法检测细胞上清液中TNF-ɑ、IL-1β的含量,来确定LPS是否对细胞造成损伤。结果表明,随着LPS浓度的升高,对蹄真皮细胞的损伤也随之升高,CYP450蛋白的表达呈升高的趋势,在10μg/mL时表达最明显,10μg/mL LPS处理48h,对CYP3A4、CYP1A1mRNA表达的抑制作用较明显,模型组TNF-ɑ和IL-1β的含量极显著高于对照组(P<0.01)。本试验表明,10μg/mL LPS作用48h可建立可靠的蹄真皮细胞炎症模型。
田梦悦刘宝京代飞侯海婷秦建华马玉忠
关键词：LPS奶牛炎症模型
猪流行性腹泻病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用
2017年
猪流行性腹泻（porcineepidemicdiarhea，PED）是由PEDV引起的仔猪腹泻，呕吐的一种高致死性的肠道传染病。本病在英国首先爆发，后逐渐扩展到欧洲，亚洲乃至全球，在2010年，我国多省份大面积发病，对我国的养猪业造成了严重的经济损失。
罗尚星刘宝京侯林杉师乾凯范京惠左玉柱
关键词：猪流行性腹泻病毒PCR方法荧光定量肠道传染病大面积发病仔猪腹泻
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