吴凌敏
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 供职机构：江西农业大学农学院作物生理生态与遗传育种教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：江西省教育厅科技计划项目国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PchsA驱动的烟草orf25基因表达载体构建及遗传转化被引量：3
- 2016年
- 为研究orf25基因的功能及其与烟草雄性不育性的相关性,通过PCR方法从质粒p UC57-Pchs A中扩增了花特异性启动子Pchs A,并以其取代植物表达载体p BI121中的组成型启动子Ca MV35S,然后将orf25基因插入到Pchs A启动子下游,构建由Pchs A启动子驱动的orf25基因表达载体,测序结果显示植物表达载体p BI121-Pchs A-orf25构建成功。将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中,采用根癌农杆菌介导法遗传转化雄性不育烟草MS革新3号,共获得76株转基因烟草植株,经PCR鉴定,转基因阳性植株为18株,转化率为23.7%。研究结果证明目的基因orf25已整合到烟草基因组中,为进一步探究该基因的功能及其与烟草雄性不育性的关系奠定了基础。
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- 关键词：烟草表达载体构建
- RNA干扰技术及其在烟草中的应用研究进展被引量：2
- 2016年
- 基因工程技术近年来在作物研究领域发展迅速,RNA干扰(RNAi)作为一项重要的基因沉默技术,具有高效性且特异性强的显著特点,现已广泛应用于后基因组时代,对研究作物基因功能,抗性和品质改良等有着重要作用。中国烟草研究已进入基因组时代,随着烟草基因组测序的开展,RNAi作为一门反向遗传学技术在烟草中的应用越来越多。本文介绍了RNAi技术的作用机制和特点,重点介绍了RNAi在烟草基因功能研究、抗病研究、抗虫研究及烟草品质改良研究中的应用,并对RNAi技术在烟草中的应用前景进行了展望。
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- 关键词：RNA干扰烟草基因沉默
- 生殖生长期烟草orf25基因的表达和ATP酶活性分析被引量：1
- 2016年
- 为探讨烟草orf25基因与雄性不育性的关系,以处于生殖生长期的烟草雄性不育系MS革新3号及其保持系革新3号为研究材料,运用荧光定量技术测定orf25基因的表达量,同时测定ATP酶活性。结果表明,orf25基因在保持系不同器官中的表达量比不育系的相对较高,而在同一材料中,orf25基因在花器官中的表达量最高,叶片次之,根部表达量相对较低;ATP酶活性也是保持系的比不育系的相对较高,而在同一材料中,花器官中的ATP酶活性也最高,而叶与根之间则无显著差异。相关性分析表明,同一器官中orf25基因的表达量与ATP酶活性之间存在着极显著的正相关。
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- 关键词：烟草ATP酶雄性不育
- 烟草ATP合酶F_0部分4个亚基基因转录本编辑位点分析被引量：1
- 2016年
- RNA编辑是高等植物线粒体基因转录后表达调控的一种重要方式。为探究ATP合酶F_0部分的4个亚基基因与植物雄性不育性的关系,本研究以3个烟草雄性不育系(MS中烟90、MS云烟85和MS K326)及其同型保持系为供试材料,比较分析atp6、atp9、orf25和orf B线粒体基因转录本的编辑位点。结果表明,orf25和orf B基因转录本在不育系和保持系中发生的编辑位点是一致的。atp6基因在不育系中未发生编辑,在保持系中共有6处发生了RNA编辑。与保持系相比,atp9基因在不育系中除8处共同的C→T编辑外,还缺少2个C→T的特异编辑位点,其中1个导致氨基酸类型的改变。推测不育胞质因缺少特异的线粒体基因转录本编辑而导致烟草的细胞质雄性不育。
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- 关键词：烟草细胞质雄性不育ATP合酶亚基基因RNA编辑
- 烟草orf25基因RNAi表达载体的构建及遗传转化
- 2017年
- 杂种优势的利用可以有效地实现烟草高产、高抗、优质的育种目标,目前,培育雄性不育系是获取杂种烟草最有效的途径。研究发现orf25基因位于线粒体基因组中,与烟草雄性不育密切相关。本研究以烟草雄性不育相关基因orf25为研究对象,根据RNA干扰载体构建原则,将长度为606 bp的orf25基因干扰片段分别以正向、反向连接到大小为190 bp的linker连接片段的两侧,构成发夹结构的RNA干扰载体片段。将RNA干扰载体片段插入到中间载体pET30a上,最后克隆到植物表达载体pCAMBIA1301中,成功构建orf25基因的RNAi表达载体。利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-orf25-RNAi转入到烟草保持系中烟90中,经抗性筛选以及分子检测最终获得35株转pCAMBIA1301-orf25-RNAi烟草植株,其中阳性烟草有18株,转化率为51.4%。结果表明pCAMBIA1301-orf25-RNAi干扰载体已成功转入到烟草中烟90中。
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- 关键词：烟草RNAI载体构建
- 烟草atp9基因RNAi表达载体的构建及遗传转化被引量：1
- 2017年
- atp9基因是烟草的雄性不育相关基因。为研究atp9基因的功能及其在烟草雄性不育形成中的作用,根据atp9基因全长序列,设计特异性引物,扩增正、反义干扰片段,将长度为239bp的atp9基因的正、反向干扰片段分别连接到linker片段的两侧,最后插入到植物表达载体pCAMBIA1301中,成功地构建了atp9基因的RNAi表达载体。利用农杆菌介导法将其转化烟草保持系品种中烟90,结果证明atp9基因的RNAi表达载体已整合到中烟90基因组中。经抗性筛选以及分子检测最终获得41株转pCAMBIA1301-atp9-RNAi烟草植株,其中阳性烟草有20株,转化率为48.8%。研究结果为下一步验证atp9基因的功能及其在烟草雄性不育形成中的作用奠定了基础。
- 谢丽娟陶瑶钟思荣吴凌敏聂亚平周玮刘栋王建革刘齐元
- 关键词：烟草RNAI表达载体构建
- 烟草雄性不育系及其保持系打顶后叶片保护酶活性的变化
- 通过打顶和不打顶处理,研究了烤烟雄性不育系及其保持系顶部叶片保护酶活性的变化规律.供试烤烟品种为3对雄性不育系及其保持系,即不育系MSK326、MS中烟90、MS云烟87和保持系K326、中烟90、云烟87.设4个处理:...
- 刘齐元程元强张志高饶文平李立新吴凌敏谢丽娟
- 关键词：烤烟雄性不育系打顶保护酶活性
- 烟草orf25基因植物表达载体的构建及遗传转化
- 2016年
- 为更好地研究烟草雄性不育的机理,构建orf25基因的植物表达载体。orf25基因是ATP合成酶F(0)部分的4个亚基因之一。以雄性不育烟草MS革新3号为受体材料,利用组成型启动子Ca MV35S构建orf25基因植物表达载体,将表达载体p BI121-orf25导入根癌农杆菌LBA4404。采用根癌农杆菌介导orf25基因遗传转化MS革新3号,结果证明载体上的目的基因orf25已整合到烟草基因组中,并获得了52株转p BI121-Ca MV35Sorf25基因烟草植株,经PCR鉴定,转基因阳性植株有14株,转化率为26.9%。为下一步研究该基因的功能及其与烟草雄性不育性的关系提供依据。
- 陶瑶饶文平吴凌敏谢丽娟聂亚平钟思荣王建革刘齐元
- 关键词：烟草表达载体构建
- 细胞质雄性不育烟草orfB基因的PCR扩增与序列分析被引量：6
- 2016年
- 为探究ATP合酶F_0部分的orfB基因与植物雄性不育性的关系,本实验以3个烟草雄性不育系(MS中烟90,ms云烟85和MSK326)及其同型保持系为供试材料,提取其花蕾总DNA,利用PCR特异引物扩增目的基因orfB,并对目的基因进行测序和对比分析。结果显示:3个保持系的orfB基因序列完全一致,且与GenBank数据库中收录的烟草orfB基因序列吻合;3个不育系的目的基因序列也完全一致,但与保持系相比不育系目的基因在第363碱基位点发生A→C的突变,导致该位点密码子编码的Lue(亮氨酸)变异为Phe(苯丙氨酸)。因此推测烟草的orfB基因可能与其雄性不育性的形成有关。
- 陶瑶王瑜吴凌敏谢丽娟聂亚平钟思荣周玮王建革刘齐元
- 关键词：烟草雄性不育性
