张一帆
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：北京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金首都医学发展科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Notch修饰相关糖基因EOGT1敲除大鼠模型的制备与基因型鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的建立介导Notch分子O-GlcNAc糖基化修饰的糖基转移酶EOGT1基因敲除大鼠模型,为研究EOGT1功能及其在肝功能损伤中的作用奠定基础。方法通过TALEN基因敲除技术敲除EOGT1基因,获得EOGT1^(+/-)大鼠,将EOGT1^(+/-)大鼠杂交后获得EOGT1^(-/-)大鼠。通过PCR凝胶电泳技术及DNA测序技术对大鼠的基因型进行鉴定。结果成功建立3种基因型(EOGT1^(+/+)、EOGT1^(+/-)、EOGT1^(-/-))大鼠的鉴定方法,通过观察发现3种基因型大鼠的外观和行为表现上无显著差异。统计大鼠出生后20天的体重发现,EOGT1^(+/+)大鼠和EOGT1^(-/-)大鼠的体重有显著差异(t=2.257,P=0.0343),同时还发现EOGT1^(-/-)大鼠的生育繁殖能力降低。结论成功构建了EOGT1基因敲除大鼠模型,EOGT1基因敲除大鼠与野生型大鼠相比,体重偏低,生育繁殖能力降低。该模型的构建为研究Notch分子O-GlcNAc糖基化修饰在肝功能损伤中的作用奠定了基础。
- 郝晓花王建文张一帆叶小慧魏红山
- 关键词：基因敲除糖基转移酶NOTCH
- Colgalt2基因敲除小鼠Kupffer细胞形态及亚型差异被引量：3
- 2016年
- 目的从Colgalt2基因敲除小鼠肝脏内分离Kupffer细胞,并比较其与正常小鼠Kupffer细胞形态分化和亚型分化的差异。方法采用胶原酶灌注法、percoll密度梯度离心法和免疫磁珠分选法分离纯化Kupffer细胞,并将分离的Kupffer细胞进行培养,显微镜下观察其形态的变化和差异。用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)分别刺激Kupffer细胞6小时、12小时和24小时,检测细胞亚型。结果分离获得Kupffer细胞数目为(4.42±0.63)×10~6/鼠肝,流式细胞仪检测细胞纯度为97.9%。培养后的细胞逐渐延伸为不规则形态,早期Colgalt2基因敲除小鼠Kupffer细胞形态分化相比正常小鼠有延迟,后期两者无显著差异。在未刺激状态下,Colgalt2^(-/-)小鼠M1型Kupffer细胞的比例小于Colgalt2^(+/+)小鼠,Colgalt2^(-/-)小鼠M2a型Kupffer细胞所占比例较高;LPS刺激6小时后,Colgalt2^(-/-)小鼠M2a型所占比例高于Colgalt2^(+/+)小鼠;LPS刺激12小时后,Colgalt2^(+/+)小鼠M2a型和M2c型Kupffer细胞所占比例小于Colgalt2^(-/-)小鼠;LPS刺激24小时后,Colgalt2^(-/-)小鼠M2c型细胞所占比例高于Colgalt2^(+/+)小鼠。结论应用胶原酶灌注法、percoll密度梯度离心法、免疫磁珠分选法可以获得纯度较高的小鼠肝脏Kupffer细胞,为后期的细胞实验奠定基础。Colgalt2基因的敲除会影响小鼠Kupffer细胞的形态分化和亚型分化。
- 王建文张一帆李玉凤杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因敲除KUPFFER细胞细胞形态
- 敲除Colgalt2基因加重小鼠急性肝损伤
- 2016年
- 目的：初步探讨Colgalt2基因介导的胶原Glcα1，2 Galβ1？糖基化修饰在急性肝损伤过程中的作用。方法取60只Colgalt2＋／＋小鼠和60只Colgalt2－／－小鼠进行急性肝损伤实验，雌雄各半。每组随机选取20只小鼠腹腔注射CCl4（CCl4∶橄榄油＝2∶7，20 ml／kg）。观察小鼠死亡情况，并绘制生存曲线。每组剩余40只小鼠随机分为0、4、8、12 h组，每组10只，腹腔注射CCl4（剂量同上）。分别于0、4及8 h各处死6只小鼠，之后将4及8 h组剩余的小鼠均纳入12 h组（ Colgalt2＋／＋小鼠， n＝14； Colgalt2－／－小鼠， n＝16），并于12 h处死小鼠。 HE染色观察肝组织的病理学改变，取血清进行生化指标ALT、 AST测定。利用qRT？PCR和Western印迹技术检测小鼠Colgalt2在基因及蛋白水平的表达情况。结果Colgalt2基因在Col？galt2＋／＋小鼠肝组织内表达，而在Colgalt2－／－小鼠肝组织内不表达。注射CCl4后10 h， Colgalt2＋／＋小鼠死亡率为35％， Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％，两组小鼠死亡率差异显著（P＜0．05）。注射CCl4后12 h， Colgalt2＋／＋小鼠死亡率达50％， Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％，差异不显著（P＞0．05）。肝功检测及HE染色结果均提示，与Colgalt2＋／＋小鼠相比， Colgalt2－／－小鼠肝损伤较重。注射CCl4后，野生型小鼠Colgalt2在RNA水平和蛋白水平表达下调。结论 Colgalt2基因敲除在一定程度上可加重小鼠急性肝损伤。该观察结果提示， Colgalt2基因介导的胶原Glcα1，2 Galβ1？糖基化修饰可能与肝损伤的修复有关。
- 杨琪王建文王智强刘燃李玉凤张一帆郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：CCL4急性肝损伤糖基转移酶
- Fam172a基因敲除小鼠的制备与基因型鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的建立稳定的Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型,观察基因敲除对小鼠生长发育的影响以及该基因在小鼠体内的生物学的作用。方法采用基因打靶敲除技术,获得杂合子(Fam172a^(+/-))小鼠。将所得Fam172a^(+/-)小鼠饲养于屏障环境中杂交获得纯合子(Fam172a^(-/-))小鼠。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对小鼠基因型进行鉴定,称量出生后20天、40天以及60天野生型(wild type,WT)小鼠及Fam172a^(-/-)小、鼠的体重。随机处死8周龄WT小鼠和Fam172a^(-/-)小鼠,取心、肝、脾、肺及肾组织,采用Western blot险测Fam172a基因的组织表达特异性。结果 PCR及Western blot结果均证明Fam172a基因在Fam172a^(-/-)小鼠体内完全删除。Farm172a^(-/-)小鼠与WT小鼠20天、40天以及60天体重的差异均有统计学意义(P均<0.05)。FAM172A蛋白在WT小鼠中的表达有组织特异性。Fam172a^(-/-)小鼠每胎产仔数略低于WT小鼠,差异无统计学意义(P>0.05)。各小鼠外观、行为和繁殖力无显著差异。结论 Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型已成功构建,并繁育出足够数量的Fam172a^(-/-)小鼠进行下一步实验。Fam172a基因对小鼠体重和生长发育具有重要作用。
- 张一帆王建文杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因敲除小鼠
