- 肝脏GPAT4基因敲除小鼠模型构建
- 2024年
- 目的为胰岛素抵抗及非酒精性脂肪肝(NAFLD)发病与甘油-3-磷酸酰基转移酶-4(GPAT4)后续相关研究提供肝脏GPAT4基因敲除小鼠模型。方法选择C57BL/J6雌性与雄性小鼠各10只及白蛋白启动子调控的Cre转基因(Alb-Cre)小鼠作为研究对象。采用Cre/LoxP基因打靶策略,构建基因打靶载体,引入LoxP位点,获得基因同源重组胚胎干细胞(ES);将ES植入小鼠,分别获得嵌合鼠、杂合子、纯合子小鼠。最终获得肝脏特异性GPAT4敲除小鼠。基因分型实验对第8外显子下游的loxP位点设计基因型鉴定引物,以便进行批量快速基因型分析;随机抽取3只小鼠进行解剖,从高表达GPAT4的小鼠肝脏、白色脂肪和棕色脂肪提取总RNA,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测组织中GPAT4mRNA表达;在小鼠的肝脏组织中提取总蛋白,使用蛋白质印迹法检测肝脏GPAT4表达,进一步验证肝脏GPAT4的敲除效果。结果成功组装靶向载体,且GPAT4基因位于小鼠第8号染色体;酶切分析结果显示,6条带为线性后的靶标载体,线性载体在电泳中相对分子质量最大、速度最慢;导入ES后,确认了6个潜在的靶向克隆,即2A2、2A4、2C7、2C8、2F8和2G11。基因分析结果显示,编号3、6小鼠为肝脏特异性GPAT4敲除小鼠。qRT-PCR检测结果显示,肝脏组织GPAT4特异敲除雄鼠与雌鼠的GPAT4mRNA表达量分别为0.88±0.24和0.49±0.13,低于小鼠GPAT4被loxP两侧标记(GPAT4-FLOX)的11.24±1.43和10.78±1.98,差异有统计学意义,t值分别为-22.594和-16.399,均P<0.001;而棕色脂肪及白色脂肪组织中的GPAT4mRNA的表达均没有受到影响,差异无统计学意义,均P>0.05。蛋白质印迹法检测结果显示,GPAT4-FLOX小鼠肝脏细胞内GPAT4的表达正常,而GPAT4肝脏特异性敲除小鼠的肝脏细胞内GPAT4不表达。结论成功建立了肝脏特异性GPAT4敲除小鼠模型,为后期相关研究提供可靠的动物模型。
- 刘亿兰孙志纯余靖谢宛润洪真真
- 关键词：胰岛素抵抗非酒精性脂肪肝
- 姜黄素及其衍生物C086抑制人白血病细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系
- Hsp90作为分子伴侣，其已确定的客户蛋白超过200个。由于它的许多客户蛋白是细胞增殖信号通路中的重要分子，与肿瘤密切相关，Hsp90已经成为抗肿瘤药物的很有前景的靶点。
姜黄素是一种黄色的多酚化合物，能够阻断多条...
- 余靖
- 关键词：姜黄素衍生物BCR/ABL细胞增殖HSP90分子伴侣异种移植瘤
- 长、短期高脂饮食对胰岛素抵抗小鼠肝脏脂质代谢的作用
- 胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)是许多代谢疾病的共同的病理生理机制,与2型糖尿病的发生、发展密切相关,与代谢性疾病最为相关主要是肝脏、脂肪、肌肉。其中,肝脏IR对糖脂代谢异常、脂肪肝的发生及发展起...
- 余靖
- 关键词：胰岛素抵抗肝脏脂肪变性甘油-3-磷酸酰基转移酶内质网应激
- 文献传递
- 4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素抗慢性粒细胞白血病的作用与BCR-ABL和HSP90的关系
- 目的 研究姜黄素新衍生物4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素(C086)对人慢性粒细胞白血病(CML)细胞抑制作用,比较C086、姜黄素(Cur)以及甲磺酸伊马替尼(STI571)对含野生型bcr/abl的32D细胞...
- 许建华余靖刘洋张连茹黄慧卿黄秀旺
- 关键词：姜黄素衍生物慢性粒细胞白血病BCR/ABLHSP90
- 姜黄素衍生物C086抗慢性粒细胞白血病的作用与阻断Hsp90伴侣功能的关系
- 目的:研究姜黄素衍生物4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素[4-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl-methyl)curcumin,C086]对人慢性粒细胞白血病(CML)细胞抑制作用,并研究C0...
- 余靖刘洋黄慧卿吴丽贤许建华
- 关键词：姜黄素K562热休克蛋白90分子伴侣BCR/ABL
- 文献传递
