刘阳阳
- 作品数：18 被引量：43H指数：4
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金“十二五”国家科技计划农村领域更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 副黏病毒反向遗传研究进展
- 2016年
- 反向遗传学是对已知的生物基因序列进行适当的修饰和改造后并获取相应的表型,进而研究基因的变化对表型的影响等。副黏病毒属于单股负链RNA病毒,其反向遗传研究对其病毒蛋白的功能、致病机理及重组病毒的开发利用具有重要的研究价值,本文综述了副黏病毒反向遗传近年来的研究进展,为副黏病毒及单股负链RNA病毒的深入研究提供参考。
- 冉旭华刘阳阳闻晓波
- 关键词：副黏病毒致病机制病毒拯救
- 牛轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2016年
- 目的原核表达牛轮状病毒(rotavirus,RV)VP6蛋白,并制备其多克隆抗体。方法根据Gen Bank中登录的牛RV UK株VP6基因序列(X53667.1)设计一对特异性引物,RT-PCR扩增牛RV UK株VP6全长编码区片段,克隆至载体p ET-28a,构建重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6,转染至E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。将重组蛋白与弗氏佐剂混合后免疫豚鼠,共免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后2周,经心脏采血,分离血清,制备VP6多克隆抗体,Western blot法检测其与牛RV的反应原性。结果经双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6构建正确。重组蛋白以包涵体的形式表达,表达产物分别为43 000、34 000、27 000和15 000 4种不同相对分子质量的重组蛋白,纯化后纯度可达95%以上,可与牛RV阳性血清发生特异性反应。制备的VP6蛋白多克隆抗体效价>1∶7 000,且可识别RV天然VP6蛋白。结论原核表达了牛RV VP6蛋白,并制备了抗VP6多克隆抗体,为后续RV疫苗效力评价及RV侵入机理等方面的研究奠定了基础。
- 冉旭华曹思刘阳阳张玲玲张峣倪宏波闻晓波
- 关键词：牛轮状病毒VP6基因原核细胞基因表达多克隆抗体
- G6P[5]型牛轮状病毒的分离鉴定被引量：17
- 2016年
- 轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内引发多种幼龄动物及婴幼儿病毒性腹泻的最主要病原之一,给畜牧业发展和人类健康造成严重危害。通过RT-PCR对来自宁夏犊牛腹泻粪样进行检测,选取阳性样品经MA104细胞进行病毒分离。细胞盲传4代后出现CPE,至7代后细胞CPE现象明显,获得1株牛轮状病毒,扩增VP7、VP4基因并测序分析,结果表明该分离株属于G6P[5]型轮状病毒,命名为NX28。研究明确了G6P[5]型在国内牛群中的存在及流行,并为下一步的牛轮状病毒的分子流行病学研究奠定基础。
- 闻晓波张玲玲倪宏波刘阳阳曹思冉旭华
- 关键词：轮状病毒基因型
- 轮状病毒与细胞受体间相互作用被引量：1
- 2016年
- 轮状病毒感染具有特异的细胞嗜性,主要感染小肠绒毛顶端的肠上皮细胞,这说明轮状病毒能够与特异性的细胞受体相互作用。轮状病毒侵入细胞是一个复杂的、多步骤过程,其外层衣壳蛋白与细胞表面多种受体分子相互作用,包括唾液酸、整合素、热休克蛋白Hsc70、脂筏和人组织血型抗原等。了解轮状病毒与其细胞受体间的相互作用及其侵入机制可以为开发新药物和研制新疫苗提供参考。
- 刘阳阳冉旭华闻晓波
- 关键词：轮状病毒细胞嗜性细胞受体
- C基因型牛副流感3型病毒分离株全基因组测序及分析被引量：2
- 2016年
- 目的对宁夏地区分离得到的1株C基因型牛副流感3型病毒(bovine parainfluenza 3 virus,BPIV3)进行全基因组测序,并进行同源性及进化树分析。方法参考Gen Bank上登录的BPIV3中国分离株SD0835基因组序列设计5对引物,覆盖病毒基因组全长,提取BPIV3总RNA,以其为模板,进行RT-PCR扩增,扩增产物与p MD誖18-T Vector连接,连接产物转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,将阳性克隆进行核苷酸测序,测序结果通过分子生物学软件进行拼接,并与Gen Bank上登录的参考序列进行比较,构建系统进化树。结果成功分离得到1株BPIV3,命名为NX49,NX49株全基因组核酸序列为15 474 nt,提交至Gen Bank的序列号为KT071671。NX49与中国山东C型分离株SD0835的同源性最高,为99.3%;与中国内蒙古A型分离株NM09的同源性为82.5%;与澳大利亚B型分离株Q5592的同源性为81.4%。结论 NX49与SD0835同属一个进化分枝,但由于地域及时间上的不同,可能造成它们之间在基因水平上存在差异。
- 冉旭华张峣卢元赫曹思张玲玲刘阳阳倪宏波闻晓波
- 关键词：全基因组C基因型测序
- 轮状病毒感染后先天性免疫RLRs通路部分关键因子Q-PCR检测方法建立
- 2018年
- 维甲酸诱导基因样受体(RLRs)能够识别细胞质中的病毒双链RNA,激活下游信号转导通路,最后促进I型干扰素分泌,对抗病毒感染。本试验针对牛轮状病毒UK株VP6、人IRF3及IRF7、RIG-I、MDA5基因序列设计特异性引物,从感染轮状病毒的Caco-2细胞中提取病毒总RNA,建立检测RLRs信号转导通路上述关键因子的Q-PCR方法。结果显示在感染早期各关键因子表达均有所上升,感染后期RIG-I及MDA5没有显著变化。本试验建立的检测方法可以检测宿主细胞感染轮状病毒后的先天性免疫应答反应,为是否产生免疫抑制提供数据支持。
- 王苗苗刘阳阳闻晓波冉旭华
- 关键词：轮状病毒Q-PCR免疫抑制
- 轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3的影响被引量：2
- 2018年
- 目的探讨轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法将UK毒株感染人结肠腺癌细胞Caco-2 6、12、24 h后,通过实时定量PCR和Western blot检测细胞内源性IRF3在转录水平和蛋白水平的变化;构建质粒pCMV-3×FLAG-UK-NSP1和缺失IRF3结合结构域的质粒pCMV-3×FLAG-UK-NSP1△IRF3,分别单独转染及与p EGFP-N3-IRF3质粒共转染293T细胞4、8、12 h后,Western blot分析IRF3蛋白含量的变化。结果 IRF3 m RNA转录水平无明显变化,UK毒株感染组和NSP1质粒转染组IRF3蛋白含量均下降。结论 UK-NSP1能够介导人IRF3蛋白降解,且需要IRF3结合结构域参与。
- 冉旭华刘阳阳曹思张峣闻晓波
- 关键词：干扰素调节因子3免疫抑制
- 牛RV拮抗人源细胞RLRs信号转导通路部分关键因子的研究
- 轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿和多种幼龄动物腹泻的主要病原之一,全世界每年因感染RV而死亡婴幼儿达50～60万。RV是人兽共患的病原体,目前尚无特效治疗药物,疫苗是预防该病的最主要手段。美国NIH基于改...
- 刘阳阳
- 关键词：轮状病毒先天性免疫拮抗机制
- 文献传递
- 牛轮状病毒拮抗人源宿主细胞RLRs通路关键因子的分析
- 2017年
- 目前以牛轮状病毒为亲本的人-牛重配口服疫苗临床试验保护效果不佳,可能与免疫抑制有关。为了探讨牛轮状病毒对人源宿主RLRs免疫通路的影响,将牛轮状病毒UK株感染Caco-2细胞6 h/12 h/24 h后,检测IRF3、IRF7、RIG-I和MDA5在转录和蛋白水平变化;构建UK-NSP1/NSP1△IRF3质粒分别转染及NSP1分别与IRF3/RIG-I/MDA5共转染293T细胞4 h/8 h/12 h后,western-blot分析IRF3、RIG-I和MDA5蛋白含量变化。结果显示,UK毒株感染组中各基因转录水平均有所上升,RIG-I和MDA5蛋白含量略有上升,IRF3蛋白含量逐渐下降;NSP1转染组中IRF3蛋白含量逐渐下降,RIG-I和MDA5无明显变化;NSP1△IRF3转染组中各蛋白均无明显变化;NSP1共转染组中IRF3含量逐渐下降,另两组含量均逐渐上升。表明,UK株感染后可能激活了人源宿主细胞先天性免疫RLRs通路,但UK-NSP1能够介导人IRF3蛋白降解,而且需要IRF3结合结构域参与,一定程度上拮抗宿主免疫。
- 刘阳阳冉旭华曹思闻晓波
- 关键词：轮状病毒先天性免疫
- 轮状病毒的早期细胞侵入机制被引量：3
- 2017年
- 轮状病毒(rotavirus,RV)是导致全世界范围内婴幼儿及多种幼龄动物腹泻的最主要传染性病原。该无囊膜病毒可以通过多种方式侵入细胞,而且不同的病毒毒株在细胞侵入机制上存在较大差异。阐明RV的细胞侵入机制将有助于解析病毒的致病机制并有利于疾病防控,降低其所造成的社会负担和经济损失。本文对RV在细胞侵入的早期阶段的侵入机制作一综述。
- 冉旭华刘阳阳闻晓波
- 关键词：轮状病毒受体内吞
