黄艳
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
- 供职机构：浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- Hc-fau基因结构域功能及Hc-FAU天然融合蛋白现象的初步研究
- 捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)为吸血性寄生虫,能够在L4早期阶段进入滞育状态来躲避不利于自身生存的恶劣条件。本研究旨在研究Hc-fau基因各结构域所发挥的功能以及Hc-FAU天然融合蛋白特性分析...
- 郭筱璐闫宝龙杨怡黄艳丁豪杰郑秀平陈学秋杜爱芳
- 关键词：捻转血矛线虫
- 鹌鹑常见疫病及防控对策
- 2016年
- 鹌鹑肉和鹌鹑蛋具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇等特点,营养价值高,具有＂动物人参＂的美誉. 早在20世纪,鹌鹑养殖就已成为养殖业热点,目前我国已成为鹌鹑养殖业最发达的国家之一,养殖的商品鹌鹑主要有蛋用型鹌鹑和肉用型鹌鹑,其中蛋用鹌鹑主要有日本鹌鹑、中国白羽鹌鹑、黄羽鹌鹑、朝鲜鹌鹑、自别雌雄配套系鹌鹑;肉用鹌鹑主要有法国迪法克肉用鹌鹑、中国白羽肉用鹌鹑、法国菲鹌鹑、美国加利福利亚鹌鹑、法拉安肉用鹌鹑、莎维麦脱肉用鹌鹑等.
- 黄艳丁豪杰杨怡陈学秋杜爱芳
- 关键词：鹌鹑蛋防控对策常见疫病自别雌雄配套系肉用鹌鹑低胆固醇
- 捻转血矛线虫Hc-daf-22基因的原核表达及重组蛋白酶活性测定被引量：2
- 2017年
- 【目的】捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是反刍动物主要的胃肠道线虫之一,该病在中国呈全国性流行。为研究捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)脂肪酸代谢相关蛋白DAF-22的生化特性,对其基因进行了克隆、原核表达,并对重组蛋白进行了体外酶活性测定。以期了解捻转血矛线虫Hc-DAF-22蛋白在过氧化物酶体脂肪酸β氧化中的作用。【方法】根据NCBI公布的H.contortus ZJ株daf-22 cDNA序列(Gen Bank:HQ738470.1)设计特异性引物,克隆Hc-daf-22基因并构建重组质粒pET-22b-Hc-daf-22,经测序鉴定正确后将其转化E.coli BL21,经终浓度为0.1 m mol·L^(-1) IPTG(isopropyl-β-d-thiogalactoside)诱导表达4h,离心菌液,50 mmol·L^(-1)浓度的PBS溶液重悬菌体溶液,冰浴超声破碎后上清沉淀分别进行SDS-PAGE分析。超声破碎后产物以镍柱亲和色谱法分离纯化重组蛋白Hc-DAF-22,并用SDS-PAGE检测蛋白纯化情况及以抗His血清作为一抗Western Blot鉴定。纯化后蛋白用超滤管浓缩除去盐分,并按照蛋白浓度测定试剂盒进行蛋白浓度测定。利用天然状态下的乙酰乙酰CoA(AcAc-CoA)分子会发生酮-烯醇互变形成烯醇化合物特性,酶活试验以乙酰乙酰辅酶a为底物建立标准曲线。硫解酶体外测活体系为(50 mmol·L^(-1) Tris-Cl pH 8.1,20 mmol·L^(-1) MgCl_2,60μmol·L^(-1)CoA,10μmol·L^(-1) AcAc-CoA,加入约0.1μg蛋白),通过记录反应过程中由于底物(AcAc-CoA)的减少而引起303 nm波长下的吸收值的变化,从而计算出硫解反应的初始反应速率,最终确定复性后的Hc-DAF-22的硫解酶活性。在相同条件下,取AcAc-CoA底物浓度为10μmol·L^(-1)的反应体系(50 mmol·L^(-1) Tris-Cl pH 8.1,20 mmol·L^(-1)MgCl_2,60μmol·L^(-1) CoA,10μmol·L^(-1) AcAc-CoA,加入约0.1μg蛋白于室温起始反应),分别调节反应体系的温度及pH梯度,确定Hc-DAF-22最佳酶活反应温度及pH条件。【结果】成功克隆Hc-daf-22基因,测序结果与NCBI已公布的H.
- 郑秀平丁豪杰郭筱璐杨怡黄艳陈学秋周前进杜爱芳
- 关键词：捻转血矛线虫原核表达酶活测定
- 国内羊胃肠道寄生虫流行病学调查及捻转血矛线虫系统进化分析被引量：12
- 2018年
- 为更好地掌握我国部分地区羊胃肠道寄生虫病的流行情况以及捻转血矛线虫zJ株近年来的系统进化关系，从而为捻转血矛线虫病的防治提供科学依据，于2014年9-12月采集了来自山东、吉林、黑龙江、内蒙古、辽宁、河北、江苏、天津和青海9个省（市）的49（9份羊粪样品，对其进行了寄生虫虫卵分类鉴定，对羊寄生虫病的流行病学特征进行总结分析；此外实验室于2004-2013年采集了来自浙江省嘉兴地区的15份捻转血矛线虫ZJ株成虫样品，设计特异性引物对样品ITG2和ND4基因进行分子克隆测序鉴定比对，对该虫近10年来的系统进化进行分析。结果表明，全国各地羊体内肠道寄生虫的感染情况均较为严重，其中感染虫种的严重程度依次为原虫（83．27‰）、线虫（64．29％）和绦虫（49．80％），感染相对最为严重的3个地区分别为天津、青海和内蒙古，而相对较轻的3个地区为江苏、黑龙江、山东。对捻转血矛线虫ZJ株的15份样品进行系统进化分析显示，ITS-2和ND4基因在10年间均有不同程度的遗传变异发生，变异范围分别为0．0％-3．9％和0．4‰-4．8％，而ND4突变程度较大可能是由于虫种固有差异引起的。而2种基因都有部分位点突变后与H．placei（Haemonchus pacei）相同，说明嘉兴地区可能存在捻转血矛线虫和H．placei交叉感染的情况。调查分析结果将为制定更合理的羊寄生虫病防控方案提供参考依据，并为寄生虫系统进化分析研究奠定基础。
- 郭筱璐杨怡施宇黄艳时恒枝张玲周静茹陈学秋杜爱芳
- 关键词：胃肠道寄生虫流行病学调查捻转血矛线虫系统进化分析
- 鸦胆子提取物BJ-1抗鸡球虫病作用研究
- 鸦胆子提取物BJ-1具有抗多种原虫的作用,但是关于其潜在的抗球虫作用尚未有研究报道.为研究BJ-1对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)引起的肉鸡球虫病的治疗作用,我们制备了BJ-1饲料预混剂.将SPF级肉鸡分为6组,分...
- 蓝丽华左保杏子丁豪杰黄艳陈学秋杜爱芳
- 关键词：中药提取物抗球虫肉鸡柔嫩艾美耳球虫
- 捻转血矛线虫Hc-TTR-51蛋白的定位及功能被引量：2
- 2019年
- 捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是最重要的家畜寄生虫之一。已报道秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)转甲状腺素蛋白(transthyretin,TTR)参与虫体细胞间的相互作用。目前捻转血矛线虫转甲状腺素蛋白(Hc-TTR-51)的定位及功能尚未见报道。研究首先克隆捻转血矛线虫Hc-ttr-51基因,然后分析其蛋白在捻转血矛线虫、HEK 293T细胞内的定位情况,最后RNA干扰Hc-ttr-51基因分析对秀丽隐杆线虫生长发育的影响,从而对其功能进行预测分析。结果表明,捻转血矛线虫Hc-ttr-51基因在虫体各发育阶段均有表达,与其他发育期虫体相比,L1、L3、雄成虫该基因的转录水平显著上升。在L3期虫体体内该蛋白广泛表达,L4期和成虫体内该蛋白特异性表达于性腺。在HEK 293T细胞中,该蛋白在细胞质中呈明显的点状分布。RNA干扰秀丽隐杆线虫Hc-ttr-51基因表达后,虫体产卵量极显著下降,体长体宽显著缩短,咽泵率显著下降。以上研究为捻转血矛线虫生长发育特性、疫苗研究等提供依据。
- 黄晓翠时恒枝陈学秋黄艳周静茹吴飞杨怡杜爱芳
- 关键词：捻转血矛线虫秀丽隐杆线虫
- 捻转血矛线虫Hc-FAR-4蛋白的表达特性及其与配体结合能力分析被引量：1
- 2019年
- 【目的】捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生在牛羊等反刍动物的皱胃中,引起的捻转血矛线虫病在我国呈全国性流行。文章通过研究脂肪酸与视黄醇结合相关蛋白Hc-FAR-4的表达特性及配体结合能力,以了解其在捻转血矛线虫生长、发育、繁殖过程中的作用。【方法】对Hc-far-4进行克隆、并且构建原核表达载体pET-30a-Hc-far-4,pET-30a-Hc-far-4重组质粒经过PCR与双酶切鉴定准确无误之后转化到E.coli BL21感受态细胞中,用0.1 mmol·L^-1 IPTG(isopropyl-β-d-thiogalactoside)进行重组蛋白的诱导表达。收集重组蛋白rHc-FAR-4,利用荧光分析法,研究rHc-FAR-4蛋白与DAUDA、视黄醇、油酸的结合能力。配体结合试验是依据荧光物质retinol与脂肪酸类似物DAUDA在极性和非极性溶液中,在某一波长的激发光激发下,所发出的荧光光谱随之变化的特性,判断rHc-FAR-4蛋白是否具有与DAUDA、retinol结合的能力。再在体系中加入非荧光长链脂肪酸油酸,根据荧光光谱的变化情况判定油酸能否分别与DAUDA、retinol竞争目的蛋白的脂肪酸结合位点,间接说明目的蛋白能否与非荧光脂肪酸油酸结合。同时制备鼠源多克隆抗体,利用ELISA技术检验免疫后小鼠的抗体效价,抗体效价合适即可收集小鼠血清。收集的血清用于免疫组织荧光(IHF)试验,探究Hc-FAR-4的表达部位,从而推测其功能。该试验过程为:对捻转血矛线虫进行石蜡包埋,石蜡切片,抗原修复,3%的BSA于4℃封闭过夜,自制鼠源多克隆抗体作为一抗孵育1 h;Alexa Fluor■488 nm羊抗鼠IgG作为二抗避光孵育1 h,DAPI染色30 min,激光共聚焦显微镜检查染色情况。利用荧光定量PCR技术分析Hc-far-4在捻转血矛线虫各个主要阶段的表达特性。【结果】成功克隆目的基因Hc-far-4,测序结果与Sanger数据库中捻转血矛线虫far-4基因序列(>HCISE00908800.t1)相似度为99.9%;重组质粒pET-30a-Hc-far-4在E.coli BL21中�
- 韦海典陈学秋黄艳时恒枝周静茹吴飞杜爱芳杨怡
- 关键词：捻转血矛线虫
- 捻转血矛线虫Hc-hrg-2拯救血红素缺陷型酵母生长表型
- 2021年
- 【目的】已有研究表明捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)Hc-hrg-2属于血红素应答基因,高浓度血红素的刺激可导致该基因的转录水平上调,但其在血红素调控中的功能尚缺乏研究。研究通过同源重组技术构建血红素合成缺陷型酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)hem1敲除株,通过异源表达Hc-hrg-2对该敲除株进行表型拯救试验,以期验证Hc-hrg-2参与细胞内血红素转运的功能。【方法】以S.cerevisiae BY4741基因组为模板,设计引物,扩增获得hem1(SGD:S000002640)基因序列5'和3'侧翼区同源臂;同时以pYES2-CT质粒为模板设计引物,扩增获得筛选标记URA3序列;利用两次重叠PCR技术依次将测序正确的上游同源臂、URA3、下游同源臂序列串联成基因敲除组件,并通过醇沉法对敲除组件进行纯化。采用醋酸锂转化法将纯化的敲除组件转化至BY4741感受态细胞中,经SD/-URA(含250μmol·L^(-1)5-氨基乙酰丙酸(ALA))培养基筛选,并利用多对引物进行PCR鉴定,以验证Δhem1敲除株的正确性。同时以含有H.contortus浙江株Hc-hrg-2序列(GenBank:MK371241)及其功能域缺失序列Hc-hrg-2(Δgst-n)和Hc-hrg-2(Δgst-c)的质粒为模板,利用特异性引物分别进行PCR扩增,通过无缝克隆将扩增得到的目的片段插入酵母pESC-LEU表达载体,经PCR鉴定以及测序验证后,采用醋酸锂转化法将正确的表达载体转化至Δhem1感受态细胞中,通过SD/-URA/-LEU(含250μmol·L^(-1)ALA)培养基筛选以及PCR鉴定验证阳性异源表达株的正确性。通过比较Δhem1敲除株及其各异源表达株在含有或不含有250μmol·L^(-1)ALA的SD/-URA/-LEU液体培养基中的生长情况,进一步验证敲除株的表型同时排除表达载体对表型的影响。用2%半乳糖对含有阳性表达质粒的敲除株进行诱导,取部分菌液进行超裂破碎,收集蛋白,通过Western Blot鉴定目的蛋白的表达;剩余菌体用去离子水重悬至OD600=0.2,用去离子水进行5倍比稀释,
- 周静茹吴飞陈学秋黄艳时恒枝杜爱芳杨怡
- 关键词：捻转血矛线虫血红素拯救
- 捻转血矛线虫-胃癌细胞共培养模型的建立及互作研究
- 捻转血矛线虫早期感染会引起宿主胃组织的病理反应，诱发宿主的早期免疫应答，如表达分泌警报因子，敦促宿主尽快建立完整的Th2型免疫保护力。本试验旨在建立捻转血矛线虫体外培养模型，并在此基础上研究体外线虫感染早期免疫应答。使用...
- 杨怡郭筱璐丁豪杰郑秀平黄艳陈学秋杜爱芳
- 关键词：捻转血矛线虫MGCBGC细胞坏死
