杨婧
- 作品数：9 被引量：12H指数：3
- 供职机构：天津市眼科医院更多>>
- 发文基金：天津市卫生局科技基金天津市应用基础与前沿技术研究计划项目天津市科委资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞分泌的外泌体与NLRP3炎性体的相关性研究
- 目的 观察蓝光诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌的外泌体中NLRP3 炎性体表达水平的变化，将其作用于正常RPE 细胞并观察其对正常细胞的影响，进而探讨复制衰老的RPE 细胞分泌外泌体在老年性黄斑变性(AMD)发病...
- 马映雪何广辉杨婧陈松
- 关键词：外泌体
- 人脐带间充质干细胞外泌体对蓝光损伤人视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子A表达的影响被引量：3
- 2016年
- 目的 观察人脐带间充质干细胞（hUCMSC）外泌体对蓝光损伤后人视网膜色素上皮（RPE）细胞血管内皮生长因子A（VEGF-A）表达的影响.方法 培养hUCMSC,收集上清液,采取梯度超速离心法分离纯化外泌体.应用透射电子显微镜观察外泌体形态;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测hUCMSC外泌体表面特异性标志蛋白CD63及hUCMSC表面蛋白CD90的表达.取生长良好的人RPE细胞,随机分为正常对照组、光损伤组和hUCMSC外泌体处理组.光损伤组和hUCMSC外泌体处理组以蓝光（2000±500） Lux照射RPE细胞12h建立光损伤模型;hUCMSC外泌体处理组细胞培养液中分别加入25、50、75 μg/ml的hUCMSC外泌体,并以此分为低浓度、中浓度、高浓度3个亚组.各浓度亚组继续培养8、16、24 h结束培养.采用Western blot及免疫荧光检测各组RPE细胞VEGF-A蛋白表达,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组RPE细胞VEGF-A mRNA表达.结果 透射电子显微镜观察发现,hUCMSC外泌体为圆形或椭圆形膜性小囊泡,直径50～100 nm.Western blot检测结果显示,hUCMSC外泌体表达外泌体表面特异性标志蛋白CD63及hUCMSC表面蛋白CD90.Western blot及RT-PCR检测结果显示,光损伤组RPE细胞VEGF-A蛋白及mRNA表达较正常对照组明显增加,差异有统计学意义（t=-16.553、-19.456,P＜0.05）.hUCMSC外泌体处理组RPE细胞培养8、16、24 h时,低浓度、中浓度、高浓度亚组RPE细胞与光损伤组RPE细胞相比,VEGF-A蛋白及mRNA表达均有下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）.随hUCMSC外泌体作用时间延长及作用浓度增强,RPE细胞VEGF-A蛋白及mRNA下调作用越强（P＜0.05）.免疫荧光检测结果显示,相同作用时间随着hUCMSC外泌体作用浓度提高,VEGF-A蛋白表达不断下降.结论 hUCMSC外泌体能够有效降低蓝光损伤后人RPE细胞VEGF-A的表达,其效应与hUCMSC外泌体作用浓度、时间呈正相关.
- 何广辉陈松马映雪杨婧王健陈莉王玉川郝朋
- 关键词：间质干细胞外泌体视网膜色素上皮
- 人脐带间充质干细胞对高糖环境中恒河猴视网膜血管内皮细胞的免疫调节作用
- 2016年
- 目的 观察人脐带间充质干细胞（hUCMSC）对高糖培养的恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）的免疫调节作用.方法 利用复合培养体系将hUCMSC加入Transwell系统上层小室,下室加入含有25 mmol/L的葡萄糖及RF/6A细胞;将hUCMSC按照1：1比例与RF/6A细胞共培养.实验分为对照组、高糖组及hUCMSC与高糖共培养组进行,3组RF/6A细胞分别采用Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）/F12完全培养液、DMEM/25 mmol/L D-葡萄糖完全培养液、hUCMSC与25 mmol/LD-葡萄糖完全培养液进行培养.采用噻唑蓝比色法检测共培养后RF/6A细胞的增生活力;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测RF/6A细胞中叉头蛋白（Foxp3）的相对表达量;酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL）-17的浓度.结果 培养后第1天,对照组、高糖组及hUCMSC与高糖共培养组RF/6A细胞存活率比较,差异无统计学意义（F=0.030,P＞0.05）.培养后第3、7天,高糖组RF/6A细胞存活率较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=36.072、27.890,P＜0.05）;hUCMSC与高糖共培养组RF/6A细胞存活率较高糖组明显提高,差异有统计学意义（t=13.280、19.650,P＜0.05）.Western blot检测结果显示,培养后第7天,高糖组RF/6A细胞中Foxp3蛋白相对表达量较对照组明显下降,差异有统计学意义（t=7.826,P＜0.05）;hUCMSC与高糖共培养组RF/6A细胞中Foxp3蛋白相对表达量较高糖组明显提高,差异有统计学意义（t=19.936,P＜0.05）.ELISA检测结果显示,培养后第7天,高糖组、hUCMSC与高糖共培养组细胞培养上清液中IL-17浓度较对照组明显升高,差异有统计学意义（F=1 267.503,P＜0.05）.hUCMSC与高糖共培养组细胞培养上清液中IL-17浓度较高糖组明显下降,差异有统计学意义（t=17.386,P＜0.05）.结论 hUCMSC能提高被高糖抑制的RF/6A细胞增生活力,可通过调控Foxp3、IL-17表达来平衡修复RF/6A细胞.
- 陈莉陈松张惟姜鉴洪王健武斌何广辉杨婧马映雪
- 关键词：间质干细胞免疫调节
- 视网膜色素上皮细胞外泌体的分离与鉴定
- 目的 外泌体是一种通过质膜内部囊泡融合后分泌到细胞外环境的纳米级囊泡，其所含有的分子物质反映了其释放细胞的特性。研究发现多种不同细胞均可以释放外泌体至细胞外环境，例如造血细胞及肿瘤细胞等。视网膜色素上皮(RPE)细胞作为...
- 何广辉陈松马映雪杨婧
- 关键词：视网膜色素上皮外泌体
- 外泌体在年龄相关性黄斑变性发病机制中的作用研究进展被引量：6
- 2017年
- 外泌体是细胞分泌的纳米级膜性小泡，分布于多种体液，包括外周血、尿液、唾液等。目前多步差速离心是较为有效的外泌体提取方法。外泌体来源多样，可来自各种类型细胞，携带其来源细胞的蛋白质及核酸，参与细胞间的信息交流，在免疫调节、炎症反应等许多病理生理过程中发挥重要功能。年龄相关性黄斑变性（AMD）是引起50岁以上人群严重视力障碍的主要疾病，其发病机制尚不明确，目前认为AMD的发生与多种因素相关。最新研究表明，视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌的外泌体可能与AMD的发生有关，RPE细胞通过外泌体释放的orB晶体蛋白等相关蛋白的增加可能导致玻璃膜疣的形成，氧化应激下的外泌体蛋白参与了RPE细胞的凋亡和存活。外泌体中的补体调节因子CD46、CD59通过损伤外层视网膜及Bruch膜参与AMD病程的进展。此外，RPE细胞的外泌体可能与脉络膜血管生成有关。随着对外泌体的深入研究，未来可能为AMD的诊治提供新的途径。
- 杨婧陈松
- 关键词：外泌体年龄相关性黄斑变性发病机制
- 精氨酸酶抑制剂对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞的保护作用被引量：1
- 2017年
- 目的 观察精氨酸酶（Arg）抑制剂N羟基-正-Ｌ精氨酸（nor-NOHA）对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A细胞）的保护作用。 方法 体外培养RF/6A细胞，并将其分为正常对照组（A组）、高糖对照组（B组）、高糖＋nor-NOHA处理组（C组）、高糖＋二甲基亚砜（DMSO）对照组（D组）。A组细胞以5.5 mmol/L葡萄糖继续培养；B～D组以25.0 mmol/L葡萄糖继续培养，C、D组分别加入125 mg/L的nor-NOHA及1%DMSO。采用噻唑蓝比色法、Transwell小室法和体外成管实验分别检测各组RF/6A细胞增生、迁移和管腔形成能力。采用荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组RF/6A细胞中ArgⅠ、内皮型一氧化氮（NO）合酶（eNOS）、诱导型NO合酶（iNOS）的mRNA相对表达量。采用酶链免疫吸附测定试验（ELISA）检测各组RF/6A细胞培养上清液中NO和白细胞介素（IL）-1b的分泌量。 结果 B组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较A组明显降低，差异有统计学意义（t=2.367、5.633、7.045，P＜0.05）；C组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较B组提高，差异有统计学意义（t=5.260、6.952、8.875，P＜0.05）。RT-PCR检测结果显示，与A组比较，B组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量升高（t=6.836、3.342），C组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量降低（t=4.904、7.192），差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量降低（t=4.165），C组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量升高（t=6.594），差异均有统计学意义（P＜0.05）。ELISA检测结果显示，与A组比较，B组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量减少（t=4.925），C组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量增多（t=5.368），差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量增多（t=5.032），C组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量减少（t=7.792），差异均有统
- 张惟姜鉴洪陈松惘产墀杨婧马映雪陈莉宋建
- 蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞分泌外泌体与核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白炎性体的相关性研究
- 2017年
- 目的观察蓝光诱导人视网膜色素上皮（RPE）细胞外泌体对核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白（NLRP3）炎性体相关因子表达的影响。方法人RPE细胞株贴壁细胞分为实验组和对照组。实验组细胞以蓝光照射6h建立光损伤模型；对照组细胞常规培养。分级低温超速离心法获得两组细胞外泌体，透射电子显微镜观察其形态；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测两组细胞外泌体表面CD63及白细胞介素（IL）-113、IL-18、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-1）蛋白相对表达水平。将两组细胞外泌体作用于正常RPE细胞，据此分为蓝光诱导细胞外泌体＋实验组、正常细胞外泌体＋对照组。培养24h后，Westernblot检测两组细胞外泌体中IL-113、IL．18、caspase．1蛋白表达；荧光实时定量聚合酶链反应检测两组细胞中NLRP3mRNA表达。结果实验组细胞发生损伤失去原有形态；外泌体均呈双凹托盘状，直径50~200nm；实验组细胞外泌体中IL-113（t=18．04）、IL-18（t=-12．55）、caspase-1（t=14．70）蛋白表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．001）。蓝光诱导细胞外泌体＋实验组细胞外泌体中IL．1B（t=-i8．59）、IL．18（t=23．95）、caspase．1（t-=35．27）蛋白表达量明显高于正常细胞外泌体＋对照组，差异均有统计学意义（P〈0．001）；蓝光诱导细胞外泌体＋实验组、正常细胞外泌体＋对照组细胞内NLRP3mRNA相对表达量分别为1．000±0．069、0．200±0．010，两者比较，差异有统计学意义（t=-12．20，P〈0．001）。结论蓝光诱导RPE细胞外泌体可使RPE细胞内NLRP3炎性体相关细胞因子IL．1B、IL．18、caspase-1蛋白和NLRP3mRNA表达上调。
- 马映雪陈松何广辉杨婧陈莉姜鉴洪宋建
- 关键词：外泌体
- 氧化应激下RPE细胞外泌体对RPE细胞Akt、VEGF-A表达的影响
- 陈松杨婧
- 氧化应激下视网膜色素上皮细胞外泌体对视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子A及丝氨酸／苏氨酸激酶表达的影响被引量：4
- 2017年
- 目的 观察氧化应激下视网膜色素上皮细胞（RPE）外泌体对RPE细胞血管内皮生长因子（VEGF）-A 及丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）表达的影响。 方法 培养人RPE（ARPE-19）细胞，细胞培养基中加入浓度为2.5 μmol/L鱼藤酮诱导ARPE-19细胞发生氧化应激损伤。收集上清液，采取梯度超速离心法分离纯化外泌体。应用透射电子显微镜观察外泌体形态；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 ARPE-19 细胞外泌体表面特异性标志蛋白CD63的表达。将氧化应激下ARPE-19细胞外泌体与ARPE-19细胞共培养作为实验组，等量正常RPE细胞外泌体与ARPE-19细胞共培养作为对照组。采用噻唑蓝比色法检测ARPE-19细胞的细胞活力，以酶联免疫检测仪测量波长570 nm处各孔的吸光度[A，旧称光密度（OD）]值表示；免疫荧光染色法和Western blot检测ARPE-19细胞VEGF-A、Akt 蛋白表达；实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测ARPE-19细胞VEGF-A、Akt mRNA表达。 结果 透射电子显微镜观察发现，ARPE-19细胞外泌体呈圆形或椭圆形膜性小囊泡，直径50～150 nm。Western blot检测结果显示，ARPE-19细胞外泌体表面表达特异性标志蛋白CD63。噻唑蓝比色法结果显示，实验组、对照组ARPE-19细胞在波长570 nm处的A 值分别为0.582±0.015、0.787±0.032。实验组ARPE-19细胞在波长570 nm处的A 值较对照组明显降低，差异有统计学意义（t=20.886，P＜0.05）。免疫荧光染色法检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A蛋白表达明显增强，Akt蛋白表达明显减弱。Western blot 检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A蛋白相对表达量明显升高，Akt蛋白相对表达量明显降低，差异均有统计学意义（t=3.822、6.527，P＜0.05）。RT-PCR 检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A mRNA相对表达量明显升高，Akt mRNA 相对表达量明显降低，差异均
- 张惟杨婧陈松何广辉马映雪陈莉姜鉴洪宋建
- 关键词：血管内皮生长因子A蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶外泌体视网膜色素上皮
