宋建
- 作品数：7 被引量：25H指数：4
- 供职机构：天津市眼科医院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划项目天津市卫生局科技基金天津市科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人脐带间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究被引量：4
- 2015年
- 目的研究人脐带分离的间充质干细胞(UC-MSC)在体外分离、培养、扩增和鉴定以及向神经干细胞和神经元细胞分化的可能性,为临床治疗糖尿病视网膜病变(DR)神经损伤提供理论基础。方法选用足月妊娠剖宫产健康胎儿的脐带,剔除动静脉后采用贴壁法分离得到UC-MSC,选用20%FBS血清培养液进行原代培养,经传代培养、流式细胞检测后,用神经分化培养基诱导UC-MSC分别向神经干细胞和神经元细胞分化,在荧光显微镜下观察细胞形态,并以免疫荧光和RT-PCR方法进行鉴定。结果 UC-MSC呈贴壁生长,倒置显微镜可见细胞呈形态相对均一的梭形细胞,呈放射状排列生长或旋涡状生长。流式细胞检测表明这些细胞表达CD105(SH2)、CD73(SH3)及CD90等MSC标志物;不表达CD34、CD45、CD11b和CD19。经神经干细胞分化诱导后,细胞开始聚集形成大小不等的细胞簇形成悬浮的细胞团;RT-PCR及免疫荧光检测表明,其NSE和Neuro D1阳性细胞分别达(87.3±14.7)%、(72.6±11.8)%。经神经元细胞分化诱导后,细胞呈神经元样的突起,细胞胞体饱满、折光性明显变强;RT-PCR及免疫荧光检测表明,其MAP2和NF-M阳性细胞分别达(43.1±10.3)%、(69.4±19.5)%。结论在一定的诱导条件下,UC-MSC能向神经细胞分化,可能作为DR神经损伤的细胞移植治疗来源。
- 张惟陈松王继明段红涛孔佳慧王月欣董蒙毕雪宋建
- 关键词：脐带间充质干细胞神经干细胞神经元糖尿病视网膜病变
- 蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞分泌外泌体与核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白炎性体的相关性研究被引量：1
- 2017年
- 目的观察蓝光诱导人视网膜色素上皮（RPE）细胞外泌体对核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白（NLRP3）炎性体相关因子表达的影响。方法人RPE细胞株贴壁细胞分为实验组和对照组。实验组细胞以蓝光照射6h建立光损伤模型；对照组细胞常规培养。分级低温超速离心法获得两组细胞外泌体，透射电子显微镜观察其形态；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测两组细胞外泌体表面CD63及白细胞介素（IL）-113、IL-18、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-1）蛋白相对表达水平。将两组细胞外泌体作用于正常RPE细胞，据此分为蓝光诱导细胞外泌体＋实验组、正常细胞外泌体＋对照组。培养24h后，Westernblot检测两组细胞外泌体中IL-113、IL．18、caspase．1蛋白表达；荧光实时定量聚合酶链反应检测两组细胞中NLRP3mRNA表达。结果实验组细胞发生损伤失去原有形态；外泌体均呈双凹托盘状，直径50~200nm；实验组细胞外泌体中IL-113（t=18．04）、IL-18（t=-12．55）、caspase-1（t=14．70）蛋白表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．001）。蓝光诱导细胞外泌体＋实验组细胞外泌体中IL．1B（t=-i8．59）、IL．18（t=23．95）、caspase．1（t-=35．27）蛋白表达量明显高于正常细胞外泌体＋对照组，差异均有统计学意义（P〈0．001）；蓝光诱导细胞外泌体＋实验组、正常细胞外泌体＋对照组细胞内NLRP3mRNA相对表达量分别为1．000±0．069、0．200±0．010，两者比较，差异有统计学意义（t=-12．20，P〈0．001）。结论蓝光诱导RPE细胞外泌体可使RPE细胞内NLRP3炎性体相关细胞因子IL．1B、IL．18、caspase-1蛋白和NLRP3mRNA表达上调。
- 马映雪陈松何广辉杨婧陈莉姜鉴洪宋建
- 关键词：外泌体
- 玻璃体腔移植人脐带间充质干细胞诱导的神经干细胞对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的保护作用被引量：8
- 2017年
- 目的：探讨由人脐带间充质干细胞（hUCMSC）体外诱导的神经干细胞（NSC）经玻璃体腔注射途径移植对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠血-视网膜屏障（BRB）的保护作用。方法实验研究。应用随机数字表法将60只Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为正常对照组、DR模型对照组及NSC治疗组。DR模型对照组和NSC治疗组大鼠腹腔注射STZ建立糖尿病模型。于糖尿病成模后3个月，NSC治疗组大鼠右眼玻璃体腔注射2μl NSC悬液；DR模型对照组大鼠右眼注射等容量PBS；上述两组大鼠左眼及正常对照组大鼠双眼不给予任何干预。干预后1个月，采用伊文思蓝（EB）灌注血管视网膜铺片观察视网膜血管形态及渗漏情况；EB定量检测BRB破坏情况；观察视网膜组织病理学改变情况。组间总体差异采用单因素方差分析，组间两两比较采用Dunnett t检验。结果 EB灌注视网膜铺片检查显示，正常对照组大鼠视网膜血管无明显异常，无EB渗漏到血管外；DR模型对照组背景荧光增强，可见明显的EB渗漏高荧光区；NSC治疗组背景荧光略增强，EB渗漏区较DR模型组明显减少。EB渗漏定量分析显示，正常对照组、DR模型对照组及NSC治疗组EB平均渗漏量分别为（9.91±1.53）、（24.67±2.26）及（12.85±2.58）μg/g，组间总体差异有统计学意义（F=103.801，P〈0.01）。DR模型对照组大鼠视网膜平均EB渗漏量较正常对照组增加（q=15.306，P〈0.05）；NSC治疗组较DR模型对照组明显减少（q=9.748，P〈0.05）。视网膜组织病理学检查示正常对照组视网膜各层结构清晰、排列整齐、形态正常；DR模型对照组视网膜细胞排列较紊乱，神经纤维层水肿明显，细胞核肿胀、体积增大，细胞密度降低；NSC治疗组视网膜细胞较DR模型对照组略整齐，介于两组之间。结论 hUCMSC诱导的NSC经玻璃体腔途径移植，能够改善BRB功能，减少早期DR大鼠血
- 董蒙张惟陈松王继明段红涛孔佳慧王月欣毕雪宋建
- 关键词：神经干细胞血视网膜屏障玻璃体内注射间质干细胞移植
- 精氨酸酶抑制剂对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞的保护作用被引量：1
- 2017年
- 目的 观察精氨酸酶（Arg）抑制剂N羟基-正-Ｌ精氨酸（nor-NOHA）对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞（RF/6A细胞）的保护作用。 方法 体外培养RF/6A细胞，并将其分为正常对照组（A组）、高糖对照组（B组）、高糖＋nor-NOHA处理组（C组）、高糖＋二甲基亚砜（DMSO）对照组（D组）。A组细胞以5.5 mmol/L葡萄糖继续培养；B～D组以25.0 mmol/L葡萄糖继续培养，C、D组分别加入125 mg/L的nor-NOHA及1%DMSO。采用噻唑蓝比色法、Transwell小室法和体外成管实验分别检测各组RF/6A细胞增生、迁移和管腔形成能力。采用荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组RF/6A细胞中ArgⅠ、内皮型一氧化氮（NO）合酶（eNOS）、诱导型NO合酶（iNOS）的mRNA相对表达量。采用酶链免疫吸附测定试验（ELISA）检测各组RF/6A细胞培养上清液中NO和白细胞介素（IL）-1b的分泌量。 结果 B组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较A组明显降低，差异有统计学意义（t=2.367、5.633、7.045，P＜0.05）；C组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较B组提高，差异有统计学意义（t=5.260、6.952、8.875，P＜0.05）。RT-PCR检测结果显示，与A组比较，B组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量升高（t=6.836、3.342），C组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量降低（t=4.904、7.192），差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量降低（t=4.165），C组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量升高（t=6.594），差异均有统计学意义（P＜0.05）。ELISA检测结果显示，与A组比较，B组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量减少（t=4.925），C组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量增多（t=5.368），差异均有统计学意义（P＜0.05）；B组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量增多（t=5.032），C组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量减少（t=7.792），差异均有统
- 张惟姜鉴洪陈松惘产墀杨婧马映雪陈莉宋建
- PEDF基因修饰人脐带间充质干细胞对糖尿病大鼠视网膜的保护作用被引量：5
- 2017年
- 目的 探讨色素上皮衍生因子（PEDF）基因修饰的人脐带间充质干细胞（hUCMSC）对糖尿病视网膜病变（DR）大鼠视网膜的保护作用.方法 实验研究.采用慢病毒包装的PEDF-MSC-绿色荧光蛋白（GFP）质粒和GFP-间充质干细胞（MSC）质粒转染hUCMSC,并测量PEDF及VEGF的表达.成年SD大鼠50只采用随机数字表法随机分为5个组：正常对照组（A组）、DR对照组（B组）、磷酸盐缓冲液（PBS）治疗组（C组）、GFP-MSC治疗组（D组）及PEDF-MSC治疗组（E组）,各组均为10只大鼠.选取链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型,造模成功后4个月进行干预治疗,D组与E组分别给予玻璃体腔注射GFP-MSC和PEDF-MSC,C组给予玻璃体腔注射PBS,A组与B组不予特殊治疗.干预后8周行HE染色观察视网膜内丛状层、内核层及外核层,并进行厚度测量,免疫组织化学染色观察视网膜PEDF和VEGF阳性染色情况,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠视网膜PEDF和VEGF mRNA的表达变化.计量数据均符合正态分布.两组数据间比较采用独立样本t检验;组间的数据采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD-t检验,两个变量之间相关性分析采用Pearson相关性检验.结果 胰蛋白酶消化法获取的hUCMSC表达CD105、CD73和CD90,不表达CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR.ELISA检测结果显示,PEDF-MSC-GFP的PEDF（84.09±7.07） μg/L较GFP-MSC （9.03±0.14） μg/L表达增高,差异均有统计学意义（P〈0.05）,而VEGF表达差异无统计学意义（P〉0.05）.视网膜厚度测量分析结果显示：玻璃体腔注射后2个月,E组内丛状层厚度显著下降,内核层与外核层厚度显著增加（P〈0.05）.玻璃体腔注射后2周,荧光显微镜下观察到D组与E组大鼠玻璃体腔内放射状及簇状排列的绿色荧光,视网膜中未发现明显绿色荧光.免疫组织化学法染色结果显示：治疗后2个月,E组PEDF平均A值增加;VEGF平均A值下�
- 张惟段红涛陈松王月欣孔佳慧董蒙毕雪宋建
- 关键词：神经生长因子类舍平类血管内皮生长因子A玻璃体内注射
- 玻璃体腔注射人脐带间充质干细胞诱导分化的神经干细胞对糖尿病大鼠视网膜脑源性神经营养因子表达及视网膜神经节细胞计数的影响被引量：2
- 2016年
- 目的 观察玻璃体腔注射人脐带间充质干细胞（hUCMSC）诱导分化的神经干细胞（NSC）对糖尿病大鼠视网膜脑源性神经营养因子（BDNF）表达及视网膜神经节细胞计数（RGC）的影响.方法 成年雄性Sprague-Dawley大鼠52只,随机数字表法将其分为正常对照组（A组）、假干预组（B组）、玻璃体腔注射hUCMSC组（C组）、玻璃体腔注射NSC组（D组）,每组13只大鼠.B、C、D组大鼠腹腔注射链尿佐菌素建立糖尿病模型;并于建模后1个月,分别对其左眼行玻璃体腔注射无菌磷酸盐缓冲液、hUCMSC、NSC各2μl.干预后2、4、6、8周,免疫组织化学染色观察视网膜BDNF和胸腺肽-1（Thy-1）阳性染色情况,图像分析软件分析视网膜染色区BDNF平均累积吸光度[A,旧称光密度（OD）]（M）值,并计数Thy-1阳性染色RGC.对比分析视网膜阳性染色区BDNF平均IA值与Thy-1阳性RGC计数的关系.结果 免疫组织化学染色观察发现,A组大鼠视网膜BDNF和Thy-1呈阳性染色;B组大鼠视网膜BDNF和Thy-1阳性染色随干预后时间延长而逐渐减少;C、D组大鼠视网膜BDNF和Thy-1阳性染色随干预后时间延长而逐渐增加,D组表现更为明显.除干预后2周,B、C组大鼠视网膜染色区BDNF平均IA值、Thy-1阳性RGC计数间差异无统计学意义外（P＞0.05）;其余各时间点各组大鼠视网膜染色区BDNF平均IA值、Thy-1阳性RGC计数比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.相关性分析结果显示,糖尿病大鼠视网膜染色区BDNF平均IA值与Thy-1阳性RGC计数呈明显正相关（r=0.964,P=0.000）.结论 玻璃体腔注射hUCMSC诱导分化的NSC能促进糖尿病大鼠视网膜BDNF表达,提高RGC计数.
- 张惟王月欣陈松段红涛孔佳慧董蒙毕雪宋建
- 关键词：视网膜神经节细胞
- 氧化应激下视网膜色素上皮细胞外泌体对视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子A及丝氨酸／苏氨酸激酶表达的影响被引量：4
- 2017年
- 目的 观察氧化应激下视网膜色素上皮细胞（RPE）外泌体对RPE细胞血管内皮生长因子（VEGF）-A 及丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）表达的影响。 方法 培养人RPE（ARPE-19）细胞，细胞培养基中加入浓度为2.5 μmol/L鱼藤酮诱导ARPE-19细胞发生氧化应激损伤。收集上清液，采取梯度超速离心法分离纯化外泌体。应用透射电子显微镜观察外泌体形态；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 ARPE-19 细胞外泌体表面特异性标志蛋白CD63的表达。将氧化应激下ARPE-19细胞外泌体与ARPE-19细胞共培养作为实验组，等量正常RPE细胞外泌体与ARPE-19细胞共培养作为对照组。采用噻唑蓝比色法检测ARPE-19细胞的细胞活力，以酶联免疫检测仪测量波长570 nm处各孔的吸光度[A，旧称光密度（OD）]值表示；免疫荧光染色法和Western blot检测ARPE-19细胞VEGF-A、Akt 蛋白表达；实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测ARPE-19细胞VEGF-A、Akt mRNA表达。 结果 透射电子显微镜观察发现，ARPE-19细胞外泌体呈圆形或椭圆形膜性小囊泡，直径50～150 nm。Western blot检测结果显示，ARPE-19细胞外泌体表面表达特异性标志蛋白CD63。噻唑蓝比色法结果显示，实验组、对照组ARPE-19细胞在波长570 nm处的A 值分别为0.582±0.015、0.787±0.032。实验组ARPE-19细胞在波长570 nm处的A 值较对照组明显降低，差异有统计学意义（t=20.886，P＜0.05）。免疫荧光染色法检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A蛋白表达明显增强，Akt蛋白表达明显减弱。Western blot 检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A蛋白相对表达量明显升高，Akt蛋白相对表达量明显降低，差异均有统计学意义（t=3.822、6.527，P＜0.05）。RT-PCR 检测结果显示，与对照组比较，实验组ARPE-19细胞VEGF-A mRNA相对表达量明显升高，Akt mRNA 相对表达量明显降低，差异均
- 张惟杨婧陈松何广辉马映雪陈莉姜鉴洪宋建
- 关键词：血管内皮生长因子A蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶外泌体视网膜色素上皮
