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体外观察三种支架材料对人乳牙牙髓干细胞生物学行为的影响被引量：2: 2016年; 目的:观察乳牙牙髓干细胞(SHEDs)在3种羟基磷灰石(HA)复合支架材料上黏附、增殖、分化情况。方法:利用正常替换的乳牙分离培养SHEDs,免疫组织化学法鉴定细胞来源,体外诱导实验观察细胞分化能力。将SHEDs分别接种在羟基磷灰石/β-磷酸三钙(HA/TCP),羟基磷灰石/胶原(HA/COL)和羟基磷灰石/聚乙丙交酯(HA/PLGA)支架材料上复合培养,于4、6、8、10 h 4个时间点检测各细胞黏附率,MTT比色法检测SHEDs增殖情况;碱性磷酸酶(ALP)活性检测、能谱分析钙含量;Von Kossa染色和灰度扫描细胞矿化能力。结果:SHEDs在HA/COL上的黏附少于HA/PLGA和HA/TCP(P<0.05);HA/PLGA对SHEDs矿化诱导能力最强,其次是HA/TCP,HA/COL最弱。结论:SHEDs在HA/PLGA上的黏附率、增殖率及矿化能力优于HA/TCP和HA/COL。; 于玲刘阳张媛媛谢娜刘飞郭青玉

犬乳牙牙髓干细胞体外培养及生物学性能研究: 2016年; 目的:体外分离培养比格犬乳牙牙髓干细胞(DTPSCs),研究其生物学特性。方法:用酶解组织块法培养6周龄比格犬DTPSCs,克隆法纯化,检测细胞克隆形成能力及增殖曲线;免疫组化鉴定细胞来源,流式细胞术鉴定细胞表面标记物;进行细胞多向诱导分化能力检测。结果:获得了成集落状生长的犬乳牙牙髓细胞,其克隆形成率为32%;免疫组化确定细胞为间充质而非造血来源;流式细胞术鉴定STRO-1、CD146阳性表达,而CD14、CD45及CD86阴性表达;细胞成骨、成脂诱导后分别对茜素红、油红O染色阳性,成牙本质诱导后细胞碱性磷酸酶、牙本质涎磷蛋白染色阳性,且细胞内碱性磷酸酶活性显著增高。结论:比格犬乳牙牙髓中存在具有间充质干细胞表型、自我更新及多向分化能力的干细胞。; 刘飞刘阳戴姗姗马宁虎张林郭青玉; 关键词：多向分化

变形链球菌UA159合成自诱导分子2及其影响因素的实验研究: 2015年; 目的：原核表达纯化变形链球菌（S．mutans）UA159 LuxS 蛋白，体外合成有活性的自诱导分子2（AI-2）并观察其合成的影响因素。方法：用基因重组的方法构建表达载体 pET21 a（＋）-luxS，在大肠杆菌（E．coli）BL21（DE3）中诱导表达 S-核糖基高半胱氨酸酶（LuxS）融合蛋白，镍柱亲和层析纯化、蛋白质印迹法分析鉴定 LuxS 蛋白，透析复性。纯化的 LuxS 蛋白和 S-腺苷高半胱氨酸核苷酶（Pfs）蛋白催化 S-腺苷 L 高半胱氨酸[SAH]合成 AI-2，哈氏弧菌 BB170检测 AI-2活性，并观察 LuxS 蛋白浓度、pH、氟化钠对 AI-2合成的影响。结果：与对照组相比，随着 LuxS 蛋白浓度的升高，体外合成的 AI-2活性增大（P ＜0．001）；当 pH 介于6～10之间时，AI-2活性最强，超出此 pH 范围，AI-2活性明显降低（P ＜0．001）；当氟化钠浓度≥0．3％时，AI-2活性显著降低（P ＜0．05）。结论：利用基因工程技术可以合成具有生物活性的 S．mutans UA159 AI-2；AI-2合成的最适 pH 在6～10之间；氟化钠浓度≥0．3％对 AI-2的合成有抑制作用。; 李芝香肖刚黄英赵东方刘飞刘阳郭青玉; 关键词：LUXS 生物合成氟化钠

CM-DiI体外标记人乳牙牙髓干细胞的可行性研究被引量：2: 2016年; 目的:筛选CM-DiI用于人乳牙牙髓干细胞标记的最佳浓度,并对标记后细胞的生物学行为进行评价,为下一步细胞活体移植和体内示踪打下基础。方法:酶解组织块法培养人乳牙牙髓细胞并纯化,免疫组化鉴定细胞来源,进行细胞体外多向诱导分化能力实验。将第3代细胞分别使用浓度2mg/L、3mg/L及4mg/L的CM-DiI进行标记,比较标记后细胞乳酸脱氢酶释放率及细胞增殖情况,并观察经体外多次传代后细胞荧光的表达情况。结果:酶解组织块法可获得成集落状生长的人乳牙牙髓细胞;免疫组化确定细胞为间充质而非造血来源;细胞具有成脂、成骨及成牙本质等多向分化能力。3种标记物浓度均未对细胞乳酸脱氢酶释放及细胞增殖产生显著的不利影响;随体外多次传代,标记荧光强度逐渐减退。结论:CM-DiI操作简便、染色速度快,可有效的标记人乳牙牙髓干细胞,其中3mg/L的标记浓度细胞毒性极小,标记效率高,在体外多次传代后荧光信号仍能稳定表达。; 刘飞刘阳戴姗姗郭青玉; 关键词：细胞标记

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刘阳