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橡胶树胶孢炭疽菌T-DNA插入突变体库的构建及插入位点分析被引量：4: 2018年; 橡胶树炭疽病主要由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起,是影响橡胶产量的重要病害之一。病原菌功能缺失突变体的构建是研究病菌致病分子机理的有效手段。为了获得充足的胶孢炭疽菌突变体用于解析其致病机理,本研究对根癌农杆菌介导的胶孢炭疽菌遗传转化体系进行优化。结果表明,当AGL-1农杆菌OD_(600)=0.8、胶孢炭疽菌孢子浓度为10~6个/mL、乙酰丁香酮(AS)浓度为100μmol/L时,共转化48 h,可使转化效率达到480个转化子/106个孢子。基于这个体系,构建了一个库容量为861的T-DNA突变体库。随机挑选8个转化子进行PCR验证,结果均为阳性。从突变体库中筛选出1株致病力下降的突变体,对其进行TAIL-PCR扩增插入位点侧翼序列,得到一个750 bp序列进行序列测定。通过与野生型菌株基因组进行序列比对,确定了T-DNA的插入位置。为进一步研究橡胶树胶孢炭疽菌致病分子机理提供理论参考。; 张贝安邦罗红丽; 关键词：胶孢炭疽菌 T-DNA插入侧翼序列

橡胶树胶孢炭疽菌T-DNA插入突变体库的构建及致病相关基因的筛选: 胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)是橡胶树炭疽病的主要病原真菌。为了寻找新的防控策略,有效防治橡胶树炭疽病,探究橡胶树胶孢炭疽菌的致病机理具有重要意义。病原菌T-DNA插入突变体的...; 张贝; 关键词：胶孢炭疽菌致病相关基因; 文献传递

胶孢炭疽菌CgFADBD基因敲除突变体的构建及其表型分析被引量：1: 2022年; 胶孢炭疽菌引发的橡胶树炭疽病是橡胶树减产的重要原因之一。为了解析橡胶树胶孢炭疽菌的致病机理,在前期研究中对胶孢炭疽菌进行了基因组和转录组测序,预测了一个编码黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合蛋白的基因,命名为CgFADBD。本研究中,通过RT-PCR技术对CgFADBD基因全长编码区进行了克隆和生物信息学分析。结果表明,该基因编码一条由505个氨基酸组成的多肽,预测分子质量为54.39 kD。该蛋白含有典型的信号肽序列(第1~26位氨基酸)和一个保守的FAD结合域(第69~203位氨基酸),此外,不含任何跨膜结构域。根据融合PCR和同源重组原理,构建了CgFADBD基因敲除突变体ΔCgFADBD。菌落生长和孢子产量统计结果表明野生型菌株WT与ΔCgFADBD没有明显差异。致病力分析结果表明,ΔCgFADBD对橡胶树叶片的致病力明显小于WT,综合以上结果表明,CgFADBD与胶孢炭疽菌对橡胶树的致病力有关,与菌丝生长和孢子产量关系不大。本研究结果对解析胶孢炭疽菌对橡胶树的致病机制提供一定的参考。; 张琦玮张贝赵丽罗红丽

芒果胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgFAE基因对孢子产量及菌丝生长的影响: 2020年; 炭疽病是芒果的重要病害之一,由胶孢炭疽菌引起。阿魏酸酯酶为细胞壁降解酶,在致病机理中起着越来越重要的作用。本研究克隆了芒果胶孢炭疽菌的一个阿魏酸酯酶基因FAE,命名为CgFAE,该基因编码一个含有539个氨基酸的蛋白,分子质量约为58.3 k D。为了进一步研究该基因的功能,根据同源重组原理,构建了CgFAE基因的敲除载体pCB1532-CgFAE,通过PEG介导的原生质体转化法将其转入到胶孢炭疽菌原生质体细胞中进行同源交换,经过对转化子进行抗性筛选和分子鉴定,获得CgFAE基因的敲除突变体ΔCgfae,并对其孢子产量和菌落生长情况进行分析,发现胶孢炭疽菌CgFAE基因的敲除突变体ΔCgfae的孢子产量低于野生型菌株,菌落生长慢于野生型菌株。以上结果表明,该基因与胶孢炭疽菌的产孢能力与菌丝生长有关。; 卢梦瑶徐祥彬孟兰环张贝安邦史学群; 关键词：细胞壁降解酶基因敲除

橡胶树胶孢炭疽菌效应蛋白基因CgE35对孢子产量的影响被引量：1: 2019年; 橡胶树炭疽病是橡胶树的重要真菌病害之一,主要由胶孢炭疽菌引起。效应蛋白是病原菌侵染植物的重要致病因子,在寄主与病原菌的相互识别中发挥重要作用。为了进一步阐明橡胶树炭疽菌的致病机理,课题组前期对橡胶树胶孢炭疽菌的效应蛋白在基因组水平上进行了预测,其中一个编码候选效应蛋白的基因被命名为CgE35。本研究对CgE35基因进行了扩增,并对其所编码的效应蛋白CgE35进行了生物信息学的分析,分析结果表明,该基因编码一条由200个氨基酸组成的多肽,分子质量约为21.7 kD,其氨基段含有一段由24个氨基酸组成的典型信号肽序列,且该蛋白不含任何跨膜结构域和已知的保守结构域。为了进一步研究该基因的功能,我们根据同源重组原理,构建了 CgE35基因的敲除载体pCB1532-CgE35,通过PEG介导的原生质体转化法将其转入胶孢炭疽菌原生质体细胞中进行同源交换,经过对转化子进行抗性筛选和分子鉴定,获得CgE35基因的敲除突变体ACgE35,并对其孢子产量和菌落生长情况进行分析,发现胶孢炭疽菌CgE35基因的敲除突变体ACgE35的孢子产量明显低于野生型菌株,而二者的菌落生长情况没有差异。以上结果表明,橡胶树胶孢炭疽菌CgE35基因编码一个未知功能的分泌蛋白,该基因与胶孢炭疽菌的产孢能力有关,但与其菌丝的生长关系不大。本研究结果为阐明胶孢炭疽菌的致病机理,建立新型橡胶树炭疽病防控策略提供理论依据。; 冯力平张贝张贝罗红丽; 关键词：胶孢炭疽菌基因敲除

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张贝

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