丁菁
- 作品数：11 被引量：44H指数：5
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
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- N-乙酰半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞eNOS的保护作用被引量：1
- 2018年
- 目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的保护作用及可能的分子机制。方法 HUVECs随机分为正常对照组、血管紧张素(Ang)Ⅱ组、单纯NAC组和NAC预处理+AngⅡ组。用Western印迹法检测e NOS蛋白、eNOS Ser1177磷酸化水平、蛋白磷酸酶(PP)2A-Cα、PP2A-cY307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平,化学比色法检测细胞组成型一氧化氮合酶(c NOS)活性及培养基中一氧化氮(NO)含量。结果 AngⅡ刺激后eNOS Ser1177、PP2A-c Y307水平和I_2^(PP2A)表达水平降低(P<0.05),cNOS活性、NO含量均降低(P<0.05);NAC预处理后上述变化均被逆转。结论 NAC预处理可上调PP2A-c Y307和I_2^(PP2A)水平,从而降低PP2A活性,最终保护eNOS活性。
- 王凌霄王阿磊丁菁张倩黄华姜君财陆德琴
- 关键词：N-乙酰半胱氨酸人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶蛋白磷酸酶2A
- miR-22通过靶向抑制DDIT4促进糖尿病肾病肾小管上皮细胞DNA损伤被引量：4
- 2021年
- 目的:探究在糖尿病肾病(DKD)中微小RNA-22(miR-22)是否能靶向抑制DNA损伤诱导转录物4(DDIT4)的表达,进而通过毛细血管扩张性共济失调突变蛋白(ATM)-细胞周期检查点激酶2(Chk2)通路促进DNA损伤。方法:(1)C57BL小鼠建立糖尿病(DM)模型,于16周后处死,分析其生化指标并对肾脏组织做HE染色,Western blot检测肾脏组织中p-ATM、p-Chk2和DDIT4蛋白水平;(2)分别用高糖(30 mmol/L葡萄糖)和正常糖(5.5 mmol/L葡萄糖)培养基培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,彗星实验检测DNA双链断裂程度,流式细胞术检测高糖对细胞周期的影响,Western blot检测细胞中p-ATM、p-Chk2和DDIT4蛋白水平;(3)构建DDIT4过表达质粒,转染NRK-52E细胞后通过彗星实验检测DDIT4过表达对DNA双链断裂的影响,并构建miR-22模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),分别转染miR-22 mimics和inhibitor,通过Western blot检测细胞中p-ATM、p-Chk2和DDIT4蛋白水平。结果:(1)DM组小鼠肾组织中p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著增高,DDIT4蛋白水平显著下降(P<0.05)。(2)高糖培养的NRK-52E细胞比正常糖培养的细胞彗尾更长,p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著增高,DDIT4蛋白水平显著下降(P<0.05)。(3)高糖培养的NRK-52E细胞过表达DDIT4后,p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著降低,细胞彗尾变短;转染miR-22 mimics后,p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著增高,DDIT4蛋白水平显著下降;转染miR-22 inhibitor后,p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著下降,DDIT4蛋白水平显著增高(P<0.05)。结论:高糖可导致DNA损伤加重,其机制可能为miR-22靶向抑制DDIT4表达,诱导肾小管上皮细胞发生DNA损伤,从而促进DKD的发生发展。
- 梁丹赵思琪李志阳肖雅文丁菁肖瑛郭兵
- 关键词：糖尿病肾病
- 棕榈酸激活人脐静脉内皮细胞PP2C降低eNOS Ser1177的磷酸化被引量：1
- 2020年
- 目的探讨棕榈酸(PA)激活人脐静脉内皮细胞(HUVEC)蛋白磷酸酶2C(PP2C)对内皮一氧化氮合酶第1177位丝氨酸(eNOS Ser1177)磷酸化的调控作用。方法HUVEC随机分为对照组、PA组、特异性PP2C抑制剂血根碱(San)联合PA组以及转染PP2Cα特异性小干扰RNA(siRNA)组。采用Western blot法检测eNOS总蛋白、eNOS Ser1177磷酸化水平和PP2Cα蛋白水平,二氨基荧光素-FM二乙酸酯(DAF-FM DA)负载法检测细胞内一氧化氮(NO)含量,免疫共沉淀法观察eNOS与PP2C之间的共定位关系。结果与对照组相比,PA处理组eNOS Ser1177磷酸化水平及NO含量均降低,San预处理组可逆转以上变化。敲低PP2Cα蛋白表达水平后,eNOS Ser1177磷酸化水平增加。eNOS与PP2C在细胞内共定位。结论PA通过激活HUVEC的PP2C引起eNOS Ser1177磷酸化水平降低。
- 王敬杰张倩张倩骆妍蓓于敏丁菁陆德琴
- AngⅡ/AT_1R通路下调内皮型一氧化氮合酶磷酸化的机制研究被引量：6
- 2018年
- 目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT_1R)通路通过激活蛋白磷酸酶2 A(protein phosphatase 2 A,PP2 A)导致大鼠肠系膜动脉中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)磷酸化水平下调的机制。方法:采用体重160~180 g成年雄性SD大鼠90只,在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉。首先明确AngⅡ下调大鼠肠系膜动脉中e NOS(Ser1177)磷酸化的效应,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组和AngⅡ组,AngⅡ组用浓度为1×10^(-7)mol/L、1×10^(-6)mol/L和1×10^(-5)mol/L AngⅡ分别孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h;然后进一步探讨AngⅡ使eNOS(Ser1177)发生磷酸化下调的分子机制,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组、AngⅡ组和坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性抑制剂)+AngⅡ组(用1×10^(-5)mol/L CAN预处理大鼠肠系膜动脉血管1 h后,再用1×10^(-7)mol/L AngⅡ继续孵育12 h)。采用Western blot法检测肠系膜动脉中eNOS蛋白表达和eNOS(Ser1177)磷酸化水平,以及PP2Ac的蛋白表达、PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I^2^(PP2A)的表达水平,并用PP2A活性检测试剂盒测定大鼠肠系膜动脉PP2A活性变化。结果:(1)与control组比较,AngⅡ孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平均明显降低(P<0.05),且12 h组和24 h组eNOS(Ser1177)磷酸化水平下降均出现明显浓度依赖性,但不同浓度组间eNOS蛋白表达水平差异均无统计学显著性;(2)与control组比较,1×10^(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平降低(P<0.05);CAN预处理可明显上调eNOS(Ser1177)磷酸化水平(P<0.05),且各组间eNOS蛋白表达水平差异无统计学显著性;(3)与control组比较,1×10^(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和I_2^(PP2A)蛋白表达均降低(P<0.05);CAN预处理可使PP2Ac(
- 姜君财丁菁张倩骆妍蓓于敏王胜男杨飞方沛钰陆德琴
- 关键词：蛋白磷酸酶2A内皮型一氧化氮合酶
- 蛋白磷酸酶4在棕榈酸降低人脐静脉内皮细胞eNOS Ser633位点磷酸化中的作用被引量：3
- 2020年
- 目的:探讨蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)在棕榈酸(palmitic acid,PA)引起内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)Ser633位点磷酸化水平降低中的调控作用。方法:选用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为研究对象,分别用终浓度为25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L的PA处理HUVECs 36 h,另用100μmol/L PA处理HUVECs 12 h、24 h、36 h和48 h,用蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)家族抑制剂福司曲星(fostriecin,FST)20 nmol/L或冈田酸(okadaic acid,OA)5 nmol/L分别预处理细胞30 min,然后用蛋白磷酸酶4催化亚基(protein phosphatase 4 catalytic subunit,PP4c)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和蛋白磷酸酶2A催化亚基(protein phosphatase 2A catalytic subunit,PP2Ac)siRNA分别转染HUVECs。用Western blot法检测eNOS总蛋白、PP4c和PP2Ac蛋白表达水平及eNOS Ser633磷酸化水平,用DAF-FM DA荧光探针检测细胞内一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。结果:(1)与control组比较,PA(终浓度25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)处理HUVECs 36 h后,eNOS Ser633磷酸化水平均显著降低(P<0.05),100μmol/L PA处理HUVECs 24 h、36 h和48 h后eNOS Ser633磷酸化水平均显著降低(P<0.05);各组间eNOS总蛋白表达无显著差异。(2)与control组相比,FST和OA预处理均可逆转PA处理引起的eNOS Ser633磷酸化水平降低(P<0.05)和细胞内NO产量减少(P<0.05);各组间eNOS总蛋白表达无显著差异。(3)与siControl组相比,si-PP4c转染组PP4c蛋白表达水平显著降低(P<0.05),同时eNOS Ser633磷酸化水平显著增高(P<0.05);si-PP2Ac转染组PP2Ac蛋白表达水平显著降低(P<0.05),但eNOS Ser633磷酸化水平表达无显著差异;各组间eNOS总蛋白表达无显著差异。结论:PA可显著降低HUVECs中eNOS Ser633磷酸化水平及NO产量,其机制可能是由于PA诱导PP2A家族中的PP4而不是PP2A激活所致。
- 秦思张倩王敬杰于敏骆妍蓓丁菁陆德琴
- 关键词：棕榈酸蛋白磷酸酶4内皮型一氧化氮合酶磷酸化蛋白磷酸酶2A
- AngⅡ/AT_1R通路通过激活人脐静脉内皮细胞PP2A导致eNOS Ser1177磷酸化水平下调被引量：6
- 2017年
- 目的:初步探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype1 receptor,AT_1R)通路是否通过激活人脐静脉内皮细胞蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)导致内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177磷酸化水平下调。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照(control)组、AngⅡ处理组、单纯坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性阻断剂)组和CAN预处理+AngⅡ组。用Western blot方法检测各组eNOS总蛋白表达、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2Ac蛋白表达、PP2Ac-Tyr307磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I_2^(PP2A)表达水平。采用化学比色法检测各组细胞培养基中的NO含量。结果:与control组相比,AngⅡ处理后eNOS Ser1177磷酸化水平及细胞培养基中的NO含量降低(P<0.05);与同一浓度AngⅡ组相比,CAN预处理可增加eNOS Ser1177磷酸化水平及细胞培养基中的NO含量(P<0.05);各组间eNOS蛋白表达差异无统计学显著性。与control组比较,AngⅡ处理后PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达降低(P<0.05);与同一浓度AngⅡ组相比,CAN预处理可增加PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达(P<0.05);各组间PP2Ac蛋白表达差异无统计学显著性。结论:AngⅡ可通过AT_1R通路导致人脐静脉内皮细胞eNOS Ser1177磷酸化水平下调,NO合成减少,这一效应可能与AngⅡ/AT_1R通路降低PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平、导致PP2A活性增强有关。特异性AT_1R阻断剂CAN预处理可通过增加PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平而降低PP2A活性,最终上调eNOS Ser1177磷酸化水平,恢复eNOS活性。
- 王阿磊丁菁王凌霄张倩黄华姜君财陆德琴
- 关键词：蛋白磷酸酶2A内皮型一氧化氮合酶磷酸化
- 血管紧张素Ⅱ诱导高血压大鼠肠系膜动脉PP2A激活的机制研究被引量：6
- 2019年
- 目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压大鼠肠系膜动脉中蛋白磷酸酶2A(PP2A)被激活的可能机制。方法:选用雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,采用皮下埋置微量渗透泵持续灌注AngⅡ(500 ng·kg^-1·min^-1,14 d)的方法复制高血压模型。40只大鼠被随机分为4组,即对照(control)组(n=10)、AngⅡ组(n=10)、坎地沙坦(CAN;AngⅡ1型受体阻滞剂)+AngⅡ组(n=10)和CAN组(n=10)。CAN+AngⅡ组和CAN组均于埋置微量渗透泵后第1天开始予以坎地沙坦酯(10 mg·kg^-1·d^-1)灌胃。术后第15天处死大鼠,留取血清和肠系膜动脉。用无创大鼠血压测量仪检测大鼠尾动脉收缩压,采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清AngⅡ含量,采用Western blot方法检测肠系膜动脉中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2A催化亚基(PP2Ac)蛋白表达、PP2Ac Tyr307磷酸化水平及PP2A内源性抑制蛋白I PP2A 2表达水平,采用PP2A活性检测试剂盒测定肠系膜动脉PP2A活性变化。结果:(1)与control组相比,AngⅡ组大鼠收缩压显著升高(P<0.05);与AngⅡ组相比,CAN+AngⅡ组和CAN组收缩压显著降低(P<0.05)。(2)与control组相比,AngⅡ组和CAN+AngⅡ组大鼠血清AngⅡ含量显著升高(P<0.05)。(3)与control组相比,AngⅡ组肠系膜动脉eNOS Ser1177磷酸化水平显著降低(P<0.05),PP2A活性显著增高(P<0.05),且二者变化呈负相关(r=-0.842,P<0.05);与AngⅡ组相比,CAN+AngⅡ组eNOS Ser1177磷酸化水平显著上调(P<0.05),PP2A活性显著降低(P<0.05)。(4)与control组相比,AngⅡ组PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I PP2A 2蛋白表达均显著降低(P<0.05);与AngⅡ组相比,CAN+AngⅡ组PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I PP2A 2蛋白表达显著增高(P<0.05)。(5)CAN组各项指标差异无统计学意义,各组间eNOS及PP2Ac蛋白表达差异亦均无统计学意义。结论:在AngⅡ诱导的高血压大鼠肠系膜动脉中,AngⅡ通过其1型受体介导,降低PP2Ac Tyr307磷酸化水平�
- 于敏姜君财骆妍蓓张倩丁菁陆德琴
- 关键词：高血压蛋白磷酸酶2A内皮型一氧化氮合酶肠系膜动脉
- 代谢综合征大鼠肠系膜动脉和主动脉内皮型一氧化氮合酶磷酸化的变化及机制
- 目的：以代谢综合征(metabolic syndrome，MS)大鼠为研究对象，观察代谢综合征病程中动脉血管内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)磷酸化的变化并...
- 丁菁
- 关键词：代谢综合征动脉血管一氧化氮合酶磷酸化
- 葛根素预处理上调内皮型一氧化氮合酶的表达减轻人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤被引量：7
- 2016年
- 目的:探讨葛根素(puerarin,PUE)预处理对缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:HUVECs随机分为正常对照(control)组、H/R组、单纯PUE组和PUE+H/R组(1.0×10^(-3)mol/L PUE预处理24 h后进行H/R)。采用Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白的表达,化学比色法检测组成型一氧化氮合酶(c NOS)的活性,TUNEL法检测细胞凋亡。此外,在PUE预处理前使用ERK蛋白激酶抑制剂U0126(1.0×10^(-5)mol/L)或PI3K/Akt蛋白激酶抑制剂LY294002(5.0×10^(-5)mol/L)处理细胞1 h,再进行H/R。结果:与control组相比,H/R组的e NOS蛋白表达水平降低(P<0.05),PUE预处理上调e NOS蛋白的表达水平(P<0.05),该上调作用均可被U0126及LY294002抑制(P<0.05);与control组相比,H/R组的c NOS活力下降(P<0.05),PUE预处理组的c NOS活力增加(P<0.05);与control组相比,H/R组细胞凋亡指数显著增大(P<0.01),PUE预处理组的细胞凋亡指数减小(P<0.01)。结论:H/R可使HUVECs受损伤,e NOS蛋白表达及活性降低,细胞凋亡增加。PUE预处理可通过ERK1/2信号通路和PI3K/Akt信号通路上调HUVECs的e NOS蛋白表达,增强e NOS活性,减少细胞凋亡,发挥内皮细胞保护作用。
- 黄华丁菁粟凤张倩陆德琴
- 关键词：葛根素人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶
- 依普利酮对高盐诱导的高血压大鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶表达及活性的影响被引量：12
- 2015年
- 目的：探讨依普利酮对高盐诱导的高血压大鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶（e NOS）的表达及活性的影响。方法：50~60 g 4周龄雄性Wistar大鼠随机分为3组：对照（control,C）组用普通饲料饲养16周,高盐饮食（high salt diet,HS）组及依普利酮（eplerenone,Epl）组用5%高盐饲料饲养16周,C组和HS组于末4周给予同等剂量生理盐水灌胃,而Epl组于末4周给予依普利酮40 mg·kg-1·d-1灌胃。每2周检测各组大鼠尾动脉收缩压,16周后处死大鼠,留取主动脉。ELISA法检测醛固酮含量,蛋白免疫印迹法检测盐皮质激素受体（MR）及e NOS蛋白表达水平,化学比色法测定一氧化氮合酶活性,免疫组化染色法观察主动脉e NOS、神经型一氧化氮合酶（n NOS）及MR蛋白表达与定位。结果：（1）高盐饲料饲养8周后,大鼠收缩压即明显升高,并逐渐上升,16周时HS组收缩压较同时点C组明显升高（P〈0.05）;依普利酮灌胃4周后,收缩压比灌胃前明显下降（P〈0.05）。（2）与C组比较,HS组、Epl组主动脉醛固酮含量明显增加（P〈0.05）,且MR表达明显增加（P〈0.05）。（3）HS组较C组e NOS蛋白表达减少（P〈0.05）、结构型一氧化氮合酶（c NOS）活性也降低（P〈0.05）;Epl组较HS组e NOS蛋白表达增加（P〈0.05）、c NOS活性增高（P〈0.05）。结论：（1）高盐诱导高血压大鼠的主动脉醛固酮含量明显增加,醛固酮可能通过激动MR降低主动脉e NOS蛋白表达及酶活性。（2）选择性MR拮抗剂依普利酮可恢复e NOS蛋白表达及活性,改善e NOS功能。
- 张倩丁菁杨飞王胜男粟凤陆德琴
- 关键词：高血压高盐饮食内皮型一氧化氮合酶盐皮质激素受体
