杨勇
- 作品数：10 被引量：22H指数：3
- 供职机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 实验室感染布鲁氏菌病的预防和控制
- 目的：布鲁氏菌病是人兽共患,我国法定乙类传染病,对畜牧业生产、畜产品质量和公共卫生安全带来严重危害.布鲁氏菌易经皮肤、粘膜、呼吸道和消化道感染人,是感染实验室人员最常见的病原细菌.本文探讨如何有效预防和控制实验室布鲁氏菌...
- 杨勇张严峻金大智姜理平施旭光蒋健敏梅玲玲
- 关键词：布鲁氏菌病疾病预防实验室生物安全管理
- 食品中志贺活菌叠氮溴乙锭实时荧光聚合酶链反应技术研究被引量：3
- 2016年
- 目的利用叠氮溴乙锭（ethidium monoazide bromide,EMA）实时荧光聚合酶链反应（PCR）技术,建立一种简便、快速、特异、灵敏的在食品中检测志贺活菌的方法。方法根据志贺菌ipa H基因保守序列设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品EMA前处理条件。用已知菌验证志贺活菌检测的敏感性和志贺死菌检测的抑制性。用31株志贺菌、26株单增李斯特菌、24株沙门菌、25株副溶血弧菌、11株阪崎肠杆菌、10株致病性大肠埃希菌和1株大肠埃希菌验证方法的特异性和稳定性。同时用本研究方法和常规分离培养法,对30件模拟样品进行实样验证。结果志贺活菌EMA实时荧光PCR方法的循环阈值（Ct）=32.10~3.19×log（菌量）（R2=0.994）。最低检测浓度为2.20 CFU/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.97%。31株志贺菌Ct值最低为15.04,最高为26.54,而97株非志贺菌的Ct值均〉35或无Ct值（呈一条直线）。重复试验Ct值变异系数〈3。30件模拟样品采用本研究方法和常规分离培养法的检测结果一致,但采用EMA实时荧光PCR方法耗时不超过7.5 h,而常规分离培养方法则需要3~5 d。结论 EMA实时荧光PCR技术是一种快速简便、特异性强、灵敏度高、仅检测志贺活菌的方法,建议在食品检测中推广应用。
- 梅玲玲徐昌平杨勇占利陈鸿鹄张云怡张俊彦陈建才程苏云
- 关键词：食品志贺菌实时荧光PCR
- EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究被引量：7
- 2017年
- 目的利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率。用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性。用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测。结果单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2=0.999)。最低检测的活菌浓度为55cfu/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.98%。35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值。重复试验Ct值变异系数小于5%。30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致。且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5~7d。结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用。
- 张俊彦梅玲玲徐昌平占利陈鸿鹄张云怡陈建才张政杨勇
- 关键词：单增李斯特菌活菌
- 香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术研究
- 目的 利用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法,建立一种简便、快速,特异,灵敏的香港海鸥型菌检测方法.方法 根据香港海鸥型菌16S rDNA的保守区域设计特异性引物和探针.用不同浓度、不同温度对反应体系引物量...
- 梅玲玲张俊彦龚璞潘军航占利张云怡杨勇
- 关键词：TAQMAN-MGB探针实时荧光PCR
- 香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术研究被引量：2
- 2016年
- 目的利用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法,建立一种简便、快速、特异、灵敏的香港海鸥型菌检测方法。方法根据香港海鸥型菌16SrDNA的保守区域设计特异性引物和探针。用不同浓度、不同温度对反应体系引物浓度、探针浓度及退火温度进行优化。用添加已知量的香港海鸥型菌样本验证方法敏感性;用香港海鸥型菌以及大肠杆菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性和稳定性。结果当25μL反应体系中上、下游引物(10μmol/L)各为0.6μL,探针(10μmol/L)为0.4μL,模板DNA量为5.0μL,反应条件:预变性95℃20s,变性95℃10s,退火57℃40s,40个循环时,香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应Ct值与待检菌浓度对数具有良好线性关系[Ct=-3.538×log(菌浓度)+13.56,r=0.999],方法的最低检测浓度达到36cfu/mL。23株香港海鸥型菌检测Ct值均小于35,而104株非香港海鸥型菌检测Ct值大于35或扩增曲线成一平滑直线。隔天连续5d重复试验Ct值变异系数小于3。20件活鲤鱼、18件活草鱼香港海鸥型菌检测率实时荧光PCR检测技术显著高于常规检测方法(P<0.01,χ2=21.50)。且后者所需时间为5d,前者仅需10h。结论 TaqMan实时荧光定量PCR法是一种快速简便、特异性强、灵敏度高的香港海鸥型菌检测方法,值得推广应用。
- 梅玲玲张俊彦龚璞潘军航占利张云怡杨勇吴嘉南
- 关键词：TAQMAN-MGB探针实时荧光PCR
- 一种香港海鸥型菌的实时荧光PCR检测试剂盒及应用
- 本发明公开了一种香港海鸥型菌的实时荧光PCR检测试剂盒及应用，所述试剂盒包括PCR扩增反应液、阳性对照和阴性对照，所述PCR扩增反应液包括特异性上游引物、特异性下游引物、荧光探针、PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷混合物和DN...
- 梅玲玲张俊彦占利朱敏潘雪霞潘军航龚璞汪炜杨勇
- 文献传递
- 一种快速检测食品中志贺活菌的试剂盒及应用
- 本发明公开了一种快速检测食品中志贺活菌的试剂盒及应用，该试剂盒包含PCR反应试剂、叠氮溴乙锭、阳性对照和阴性对照；本发明的检测试剂盒能区别食品中死的志贺氏菌，并且特异性高、灵敏度高；整个检测过程不超过2h，特别适合食品中...
- 梅玲玲徐昌平占利张云怡陈鸿鹄杨勇张俊彦陈建才张政
- 文献传递
- O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法的建立被引量：1
- 2016年
- 目的建立副溶血性弧菌O3∶K6血清型三重PCR检测方法。方法基于副溶血性弧菌种特异性基因toxR,O3血清群特异性基因vp0209,K6血清型特异性基因vp0230,建立O3∶K6血清型副溶血性弧菌三重PCR检测方法。对该方法的检测特异性和灵敏度进行分析。结果与结论该方法对O3∶K6血清型副溶血性弧菌具有很好的检测特异性,灵敏度可以达到102 CFU/PCR反应体系。
- 张云怡梅玲玲张俊彦占利陈建才陈鸿鹄张政杨勇
- 关键词：副溶血性弧菌三重PCR
- 浙江省人源猪链球菌鉴定及毒力基因检测分析被引量：7
- 2021年
- 目的鉴定浙江省2005-2020年散发猪链球菌感染者分离株血清型并检测其毒力基因,了解该地区临床致病株毒力基因的分布情况与分子流行病学特征。方法收集猪链球菌感染者临床分离株,采用传统细菌学方法及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定的同时,利用聚合酶链(PCR)技术检测其链球菌属(tuf)、猪链球菌种(16S rRNA)、猪链球菌7型(Cps7H)、猪链球菌9型(Cps9D)与2型猪链球菌(Cps2J)/兼荚膜毒力基因以及毒力基因:溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(epf)、溶血素(sly)、毒力相关序列(orf2)、纤连蛋白(fbps)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)等24种毒力基因携带情况。结果28株人源分离株经综合鉴定均为2型猪链球菌,毒力基因群检测结果显示,除salKR毒力基因以及1株ZJ-31菌株外,96.43%(27/28)的菌株均携带23种毒力基因;16S rRNA基因测序构建系统发育树,结果显示除来自2018年的ZJ-31菌株单独在另一分枝外,其它菌株同源性极高均在同一分枝。结论浙江省十几年来散发猪链球菌病的人源分离株大多为2型猪链球菌强毒力株,遗传进化显示近年来已出现个别不同来源分枝群菌株。
- 朱水荣张政姚苹苹杨勇方磊张严峻
- 关键词：猪链球菌散发病例人源毒力基因PCR
- 实验室感染布鲁氏菌病的预防与控制被引量：2
- 2021年
- 布鲁氏菌病(布病)是人兽共患病和我国法定的乙类传染病,给畜牧业生产、畜产品质量和公共卫生安全带来严重危害。布鲁氏菌易通过皮肤、黏膜、呼吸道和消化道感染人,是最常见的感染实验室人员的病原细菌。近年来我国布病流行较为严重,从事布病检测和研究的任务较重,为了避免和降低实验室布鲁氏菌感染风险,切实保护检验及科研人员生命安全和健康,笔者通过查阅文献并结合自身的实验室生物安全管理经验,根据实验室全面质量管理要求,从实验室人员、设备、样本、检测和环境等控制要素入手,探讨布病感染风险识别和评价,提出预防控制措施。该文在实验室生物安全操作和安全防护方面,对实验室操作人员具有指导意义和参考作用。
- 杨勇朴东日施旭光赵鸿雁杨章女李兰玉吴蓓蓓张严峻姜海蒋健敏梅玲玲
- 关键词：布鲁氏菌病布鲁氏菌生物安全
