包福祥
- 作品数：13 被引量：15H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学理学医药卫生更多>>
- EGFRvⅢ胞外区基因重组腺病毒的构建及单域抗体的制备
- 2022年
- 本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒,并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库,筛选和制备EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增EGFRvⅢ胞外区基因,并连接pAdTrack-CMV质粒载体,转化含有pAdEasy-1的大肠杆菌(Escherichia coli)BJ5183感受态细胞,获得同源重组质粒转染HEK293A细胞,得到表达EGFRvⅢ胞外区蛋白的重组腺病毒。利用重组腺病毒免疫双峰驼,构建EGFRvⅢ胞外区特异性噬菌体单域抗体库,并以EGFRvⅢ蛋白为筛选抗原,对其进行筛选,对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明获得了表达EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒。构建得到的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库的库容为1.4×109;经过3轮富集和筛选,通过噬菌体ELISA筛选出31个与EGFRvⅢ胞外区蛋白结合的阳性克隆,并对OD450值较高的重组单域抗体E14进行了表达和纯化。经ELISA鉴定,重组单域抗体E14可与EGFRvⅢ胞外区蛋白产生抗原抗体结合反应,具有较高的亲和力。说明制备的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性,且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原活性和免疫学反应性,为今后以EGFRvⅢ为靶点的恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的实验依据。
- 张慧敏徐嘉奇程艺付山刘艳龙胡宇靖杜雅楠包福祥
- 关键词：重组腺病毒单域抗体抗体库
- 牛抗体中超长CDR H3结构的研究进展
- 2023年
- 牛体内具有超长CDR H3结构的抗体占总抗体的10%,长度约为70个氨基酸,包含特殊的β-带状柄结构和富含二硫键的旋钮结构,其形成与IGHV1-7区域的短核苷酸复制及IGHD8-2基因有关。牛超长CDR H3结构的抗原结合活性高且具有多样性,其中旋钮结构与抗体结合活性有关,抗体结构、二硫键位置和数量、半胱氨酸数量、体细胞突变等与超长CDR H3结构多样性有关。牛独特的超长CDR H3结构为其免疫应答、免疫治疗和新型疫苗制备等方面提供了新的研究思路。笔者概述了牛超长CDR H3结构的形成机制、特性、抗原结合特性,并总结了其应用前景,以期为新型抗体的研发和应用提供参考。
- 赵绮欢高敏付山昭日格图包福祥
- 关键词：抗体半胱氨酸
- 双峰驼天然单域抗体库的构建及鉴定被引量：1
- 2017年
- 重链抗体的可变区VHH是目前天然存在的具有完整功能的最小抗体分子片段,该抗体在基础研究、药物开发等领域应用前景极为广阔。为了构建双峰驼天然单域抗体库并对其进行初步鉴定,从5峰未经免疫的健康骆驼全血中分离淋巴细胞,提取其总RNA,之后反转录为cDNA,利用PCR技术扩增全套编码重链抗体可变区的基因序列,将经过回收并酶切纯化的VHH序列克隆到噬菌体载体上,电转化大肠杆菌TG1感受态细胞,共转化343次。结果表明,构建的双峰驼天然单域抗体库库容为4.4×10~7,转化阳性率为75%,多样性良好,体现为CDR3区碱基序列及长度存在显著差异。成功地构建了双峰驼天然单域抗体库,为今后从中筛选出具有应用价值的特异性单域抗体奠定了基础。
- 包福祥芦婷阿米娜赵鑫鑫邬春艳温靖杜雅楠
- 关键词：双峰驼单域抗体噬菌体展示技术
- 梅花鹿结核病间接ELISA方法的建立
- 2022年
- 为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因,并与pET-22b(+)质粒连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达和纯化38 ku蛋白,以38 ku蛋白作为包被抗原,以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗,建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明:对梅花鹿血清IgG进行纯化,得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质;制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20000时仍有很好的结合效果;38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅花鹿血清。说明试验建立的间接ELISA方法能够作为鹿结核病血清学快速检测的有效方法,弥补了传统方法的不足。
- 包福祥张磊张磊敖可心蒋强吴玘瑶张慧敏程艺白文成白文成
- 关键词：牛结核分枝杆菌梅花鹿间接ELISA
- IBRV特异性噬菌体单域抗体库的构建、筛选及鉴定
- 2020年
- 为了开发有效的用于治疗和诊断牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)的抗体,试验用牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)免疫双峰驼,构建IBRV特异性噬菌体单域抗体库,并以IBRV gD蛋白为筛选抗原,对其进行筛选,对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明:构建得到的IBRV特异性噬菌体单域抗体库的库容为7×10^7;经3轮富集和筛选,phage-ELISA筛选出14个与gD蛋白结合的阳性克隆,并成功对阳性值较高的重组单域抗体IB68进行表达和纯化;经ELISA和Western-blot鉴定,重组单域抗体IB68可与gD蛋白产生抗原抗体结合反应,具有较高的亲和力。说明制备的IBRV特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性,且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原抗体结合活性和免疫学反应性。
- 包福祥徐文博芦婷芦婷刘欣秦岭兄李鑫泳刘树弘杜雅楠
- 关键词：牛传染性鼻气管炎单域抗体抗体库原核表达
- 牛轮状病毒疫苗及被动免疫抗体研究进展
- 2023年
- 牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)是集约化养殖中犊牛腹泻的重要致病原之一。BRV是一种二十面体对称的双链RNA病毒,其基因组含有多种结构蛋白和非结构蛋白,并分为众多血清型,流行型多为G6和G10型,具有较强的致病性。目前,国内BRV的商品化疫苗和针对性治疗产品仍处于市场空白阶段。随着养牛业的蓬勃发展,对于BRV的防治已经迫在眉睫。对BRV的结构特点、传播途径、以及养牛业发达国家市场上的BRV疫苗上市情况和BRV卵黄抗体的研究进程进行综述,旨在为下一步疫苗和抗体的研发应用提供一定的参考。
- 高敏付山赵绮欢杨霖贺志雄包福祥
- 关键词：卵黄抗体犊牛腹泻
- 基于gB蛋白的牛传染性鼻气管炎间接ELISA检测方法的建立
- 2024年
- 为建立一种针对牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotrachetitis virus,IBRV)的早期快速检测方法,并能判定免疫后是否再次发生感染,本研究利用原核表达IBRV gB蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot检测gB蛋白的表达,并初步建立基于gB蛋白检测IBRV的间接ELISA方法。结果表明:1)对IBRV标准阳性血清,本试验方法的最低检测限度为1∶4096,说明建立的gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性。2)该方法对其他4种常见的牛疫病阳性血清检测均为阴性,不存在交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。3)在对200头牛的临床样品的检测中,该方法与IDEXX(IBRV gB X3)抗体检测试剂盒符合率高达97.5%。综上,本研究建立的gB-ELISA检测方法敏感性高,特异性好,该方法为开发一种在感染早期快速对疾病进行诊断,并可以判定疫苗免疫后是否再次发生IBRV感染的试剂盒奠定基础。
- 温靖于佳梁李丹包福祥
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒ELISA
- 犬瘟热病毒H、F和N基因的克隆及原核表达
- 2018年
- 犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)为负链RNA病毒，属于副黏病毒科麻疹病毒属，可引起犬科、鼬科和浣熊科动物的急性、高度接触性、致死性疾病，该病的主要传染源为患病动物和隐性感染的带毒动物。目前，犬瘟热常年发生，呈散发、地方流行，传染性强、发病率和死亡率高，是养犬业、经济动物养殖和野生动物危害最大的疾病之一。CDV由15 616个核苷酸组成，编码基因按3’～5’端排序依次为：3’端前导序列、核衣壳蛋白基因（N）、磷蛋白基因（P）、基质蛋白基因（M）、融合蛋白基因（F）、血凝素蛋白基因（H）、聚合酶蛋白基因（L）和5’端引导序列。研究表明，CDV的N、F和H三种蛋白在病毒感染和宿主免疫方面起主要作用。因此，H、F和N蛋白的克隆和表达将对CDV的诊断和治疗具有非常重要的意义。
- 包福祥阿米娜阿米娜芦婷赵鑫鑫杜雅楠
- 关键词：犬瘟热病毒原核表达核衣壳蛋白基因N基因熊科动物融合蛋白基因
- 动物医学专业复合应用型人才培养过程中实践教学的改革与应用被引量：9
- 2018年
- 为了满足不同用人单位对动物医学专业技术人才实践能力的需求,高等农业院校应通过多种途径提高动物医学人才培养的质量,不断提高学生实践技能,为社会输送合格人才。内蒙古农业大学兽医学院在动物医学专业实践教学体系建设、实验条件建设、校内外实习基地建设,以及实践教学方法等方面进行了全面的改革与实践,建立了一套适用于动物医学专业的复合应用型专业人才培养模式,提高了学生的实践动手能力和创新能力,取得了较好的教学效果。
- 王文龙王瑞么宏强周伟光包福祥刘大程
- 关键词：动物医学教学效果
- 猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其S基因序列分析
- 2019年
- 旨在明确内蒙古地区猪传染性胃肠炎流行毒株S基因遗传进化关系,为该病的防控提供依据。对内蒙古赤峰市采集的腹泻样品进行TGEV分离鉴定,成功分离到1株TGEV,将其命名为TGEV-CF(NMG)株。对TGEV-CF(NMG)株进行S基因的克隆、测序并与国内外已报道的25条基因序列进行比对和遗传进化分析。遗传进化分析结果表明,TGEV-CF(NMG)株与中国的attenuated H株和H16株亲缘关系最近,位于同一分支上。核苷酸序列比对结果显示,TGEV-CF(NMG)株与其他25株TGEV的同源性在95.1%~99.2%之间,其中与中国H16株同源性最高,为99.2%。表明分离株TGEV-CF(NMG)的S基因保守性较高,可作为制备TGEV疫苗的重要候选毒株。
- 杜雅楠刘艳成李静杜鹏陈翠英包福祥
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒S基因
