王泽华
- 作品数：10 被引量：23H指数：3
- 供职机构：云南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金云南省教育厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血清透明质酸HA定量检测的新方法
- 2000年
- 目的建立一种可用于血清透明质酸HA定量检测的新方法.方法采用透明质酸HA纯品按常规方法免疫兔子,经心脏采血和亲和纯化获得抗HA多抗.采用常规单抗杂交瘤技术免疫小鼠,经细胞融合、阳性细胞株筛选及单克隆化,最终获取阳性HA单抗细胞株.采用腹水法制取HA单抗,蛋白A亲和株纯化抗体.利用上述自制的高质量的抗HA单抗和多抗,建成HA定量检测双抗体夹心酶联免疫检测法:以HA单抗包被酶标板,封闭洗涤后加入HA纯品及待测样品,放置洗涤后加入HA多抗,放置洗涤后再依次加入酶标二抗羊抗免IgG-HRP和底物OPD显色读数.并用此新方法来检测HA纯品及其不同期肝纤维化大鼠血清中HA的浓度.结果经心脏采血和纯化后,获得80mL抗HA多抗血清,其抗体的含量为14.35g/L,亲和常数为1×10-7mol-1,效价达1×10-7.共做了三批细胞融合,三批的融合率分别为:18.5%(71/384),22.1%(85/384),60.2%(231/384),总融合率为33.6%(387/1152).各批的阳性率分别为:21.1%(15/71),23.5%(20/85),12.1%(28/231),总阳性率为16.3%(63/387).从这些阳性杂交瘤细胞株中共选出了6株阳性较高的,克隆了其中两株,2C3F2,2C3B8.并制备了2C3F2的腹水.经纯化后,其含量、效价和亲和常数分别为:7.88%,1×10-5和1.97×10-6mo1-1.以效价为10-3HA单抗包被酶标软板,并以加入10-3浓度的HA多抗来组配建立HA定量检测法时,其光吸收值A492nm最高.用此组配来检测HA纯品时,其检测精度至少在1ng,其灵敏度与以往检测的方法相比相同或相近.用此法来检测大鼠肝硬变病程中血清HA的浓度变化,结果表明在第1,3,6,9及12wk时的血清HA含量分别为0.21μg@L-1,7.98μg@L-1,20.10μg@L-1,229.73μg@L-1和324.74μg@L-1.结论利用只针对HA的高特异高敏感性抗HA单抗和多抗建立起来的双抗体夹心法比起现有的HA放免或酶免试剂盒更为简便、经济、快速和灵敏准确.若经进一步完善,是有可能发展成为一种用于血清HA
- 马岚赵力生李春华邓双胜王泽华袁航
- 关键词：透明质酸肝硬化抗体免疫酶技术
- 抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定被引量：13
- 2006年
- 以重氮反应将盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白偶联制备免疫原和检测原,通过杂交瘤技术获得了3株能分泌特异结合CL小分子的抗体杂交瘤细胞株.经竞争法ELISA分析,9E3抗体的IC50质量浓度为19.85μg/L,14C5抗体为1.65μg/L,16F4抗体为0.84μg/L.在与类似物的交叉性反应中,16F4抗体与沙丁胺醇的交叉反应性为0.26%,特布他林为0.04%,与非诺特罗、肾上腺素、去甲肾上腺素的交叉反应性都小于0.02%.因此,所制备的抗盐酸克伦特罗的抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.
- 吕琦张爱玲王泽华马岚
- 关键词：盐酸克伦特罗单克隆抗体
- 抗前列腺特异性抗原(PSA)单克隆抗体的制备、鉴定及其检测试剂盒的初步研制
- 前列腺特异性抗原;前列腺癌;良性前列腺增生;'夹心'ELISA;表位分析文摘： 前列腺特异性抗原是前列腺癌最有效的标记物,临床上将血清PSA水平用于甑别恶性前列腺肿瘤和良性前列腺增生症. 该研究基于血清PSA水平的免疫...
- 王泽华
- 关键词：前列腺特异性抗原良性前列腺增生表位分析
- 文献传递
- 磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2007年
- 为建立磺胺类药物残留的免疫化学分析方法，利用磺胺甲基嘧啶（SM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2）分子结构中的芳香氨基，采用重氮反应和戊二醛法将其与载体蛋白（牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白）交联制备抗原，最终获得5株抗SM和18株抗SM2杂交瘤细胞株．对杂交瘤细胞株的核型、抗体的亚类和轻链型、抗体的异相包被ELISA反应性以及抗体的竞争反应性和交叉反应性进行了分析和评价．其中SM抗体11c8结合SM的竞争抑制质量浓度Ic50为14．1弘∥L，与类似物SD的交叉反应性接近20％，但与其他类似物低于10％．SM2抗体中的6株抗体的竞争抑制质量浓度IC50在38．8—70．0μL范围内，287，4D5，13c9，14c5和16c2抗体与类似物SM的交叉反应性达到73．5％。132．9％，而15D10抗体与SM的交叉反应性低于5％．因此，本研究所获得的磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶抗体，可用于SM和SM2残留的免疫分析方法研究和应用．
- 吕琦王泽华邓双胜马岚
- 关键词：磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体磺胺类
- 抗前列腺特异性抗原单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用被引量：4
- 2003年
- 通过杂交瘤技术制备抗前列腺特异性抗原(PSA)单抗细胞株,共获得68株稳定分泌PSA单克隆抗体的细胞株,并对其中与总PSA(t-PSA)反应的12株进行了详细的免疫特性鉴定.
- 张瑜吕琦王泽华袁航赵翠兰贾黎马以娟王永祺张远旭马岚
- 关键词：前列腺特异性抗原单克隆抗体抗原表位
- 人白血病抑制因子真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 应用RT-PCR方法从人子宫内膜组织总RNA扩增出hLIF的全长基因,然后将其克隆至pcDNA3上,成功构建了重组真核表达载体pcDNA3/hLIF.利用脂质体介导将这一表达载体导入COS-7细胞和CHO-K1细胞,分别获得了hLIF的瞬时表达和稳定表达,为进一步进行hLIF生物学功能研究和hLIF在哺乳动物细胞中的高表达研究奠定了基础.
- 马涛肖雪吕琦王泽华马岚
- 关键词：COS-7细胞CHO-K1细胞克隆基因表达
- 雄激素诱导ARD1对雄激素受体(AR)的乙酰化修饰在前列腺癌中的作用
- 在欧美发达国家中，前列腺癌是男性中常见的恶性肿瘤之一，尤其在美国，位居癌症致死病人中的第二位，目前在世界范围内前列腺癌的发病率呈逐年上升趋势。前期研究表明，雄激素通过其受体(雄激素受体，AR)介导的生物学功能对正常前列腺...
- 王泽华
- 关键词：雄激素受体雄激素前列腺肿瘤
- 变形链球菌重组表面蛋白(rA-P)人源单链抗体的筛选及其活性检测
- 2010年
- 目的从PDNA5噬菌体抗体库中筛选变形链球菌重组表面蛋白的人源噬菌体单链抗体,将其表达制备非融合单链抗体,并探讨其生物学特性。方法用变形链球菌重组表面蛋白rA-P包被免疫试管,对pDAN5噬菌体抗体库进行5轮亲和免疫筛选制备抗rA-P蛋白的噬菌体单链抗体,并将其感染大肠杆菌HB2151,用IPTG诱导表达非融合性单链抗体,非融合性单链抗体包涵体复性后用Western blot检测其生物活性。结果筛选得到13株抗rA-P蛋白的噬菌体单链抗体;用HB2151表达的非融合性单链抗体分子量为30kD,表达量达菌体蛋白的30%,Western blot检测显示,复性后的非融合性单链抗体能与rA-P蛋白发生特异性抗原抗体反应,证明表达的非融合性单链抗体有生物活性。结论成功地利用噬菌体抗体库技术筛选、表达制备有生物活性的抗变链菌表面蛋白的人源单链抗体。
- 李富祥张雅丽丁世才张以芳王泽华马岚
- 关键词：变形链球菌噬菌体抗体库单链抗体
- 用于人乳腺癌病理检测的抗人ARD1单克隆抗体的制备被引量：3
- 2010年
- hARD1蛋白是一个乙酰基转移酶，催化蛋白质N末端的乙酰化。前期的研究发现hARD1的高表达可能作为乳腺癌的一个指标。为了制备在乳腺肿瘤组织中特异识别的抗hARD1的单克隆抗体，将纯化的全长hARD1／Histag融合蛋白（1～235aa）免疫Balb／c小鼠，获得了8个稳定的阳性单克隆细胞株，酶联免疫吸附测定（ELISA）结果表明，所得抗体的轻链均为K型，重链为3种亚型：IgG1、IgG2a和IgG2b。在不同肿瘤组织样本中进行抗体特异性筛选，获得一个在乳腺肿瘤组织中具有相对特异性的抗hARD1单克隆抗体，为进一步将抗hARD1的单克隆抗体应用于乳腺癌的病理诊断奠定基础，同时也为进一步研究hARD1在肿瘤发生中的作用提供了重要的工具。
- 余敏王泽华龚军丽马明星焦扬黄惟巍吕琦李琳杨慧谭德勇
- 关键词：单克隆抗体乳腺癌
- 血清透明质酸HA定量检测的新方法
- 2001年
- 血清HA值是反映肝纤维化的重要指标,定量测定血清HA对了解肝纤维化程度,转归均有重要价值.目前检测HA多采用以HA结合蛋白即HABP为主要试剂的放免药盒进行测定.但由于HABP的提取、纯化和标记等过程均很复杂,稳定性也差,使得试剂盒的稳定性差,价格也偏高.我们利用已有的抗HA单抗和多抗建立了一种新的HA定量检测双抗体夹心法,避免了上述方法的不足,其结果如下.
- 马岚赵力生李春华邓双胜王泽华袁航
- 关键词：透明质酸血液血清学单克隆抗体肝硬化酶联免疫吸附测定
