李进军 作品数:7 被引量:4 H指数:1 供职机构: 成都大学 更多>> 发文基金: 四川省国际科技合作与交流研究计划项目 四川省青年科技基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 化学工程 文化科学 更多>>
GLP-1-RA类药物市场现状分析 2024年 胰高血糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1-RA)类药物凭借降糖平稳,适应证广泛,用药依从性强的优点,在最近十几年里,发展迅速,一跃成为糖尿病药物中销售额最大的品类,但因价格高,上市时间短,普及率不足10%,故市场前景有待挖掘。GLP-1-RA类药物市场竞争激烈,有多款重磅炸弹药物问世,甚至有年销售额超百亿美元的产品。本文从作用机理、分类、市场演变史、专利状态,国内仿制药现状及国内医疗政策方面描述了GLP-1-RA类药物特点和市场现状。 李进军 赵晨 王辂 李端华关键词:糖尿病 仿制药 全新重组α-氨基酸酯水解酶的研制及应用 王辂 李端华 赵晨 田元 莫洪 李进军 邓琦 韩晓彤 葛燕 覃宇东 在头孢菌素类抗生素的工业化生产中,采用的技术分为化学合成技术和酶法合成技术两种,酶法合成技术因绿色环保(相比传统化学合成法能减少80%有机溶剂使用量)和质量更高成为发展趋势。酶法合成的核心在于高性能工业用酶的开发。项目针...关键词:关键词:头孢菌素类抗生素 合成工艺 苯丙氨酸脱氢酶分离纯化的开放实验教学设计与实践 被引量:1 2023年 开放实验教学既是一种教学理念,又是一种教学策略,在本科生毕业阶段和向研究生过渡的阶段显得尤为重要。本次开放实验教学设计依托课题组研究较为深入的苯丙氨酸脱氢酶,将发酵、提取、粗纯、精纯、酶活测定、高效液相色谱(HPLC)分析和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的整条项目链作为教学和实践内容,同时训练学生整理、处理数据和撰写报告的能力,提升其综合科研水平。 李进军 赵晨 王辂 李端华关键词:纯化 教学设计与实践 双水相系统纯化重组苯丙氨酸脱氢酶的条件研究 被引量:1 2022年 目的 研究重组大肠埃希菌表达的苯丙氨酸脱氢酶在双水相系统中的分配,并对其影响因素进行单因素考察,优化出最佳的双水相系统。方法 采用高效液相色谱法检测,依据纯度和收率来优化纯化条件。研究了聚乙二醇(PEG)分子量,聚乙二醇(PEG)浓度,硫酸铵浓度,氯化钠浓度,pH对苯丙氨酸脱氢酶在双水相中分配的影响。结果 优化的双水相系统为:PEG4000 10%,硫酸铵14%,氯化钠10%且pH 6.5,此系统下的酶活收率、纯化倍数及酶比活分别为162%、578及9280 U/mg。结论 在双水相系统的中间层提取苯丙氨酸脱氢酶是一种新的纯化方式,此方法简单易行,收率较高,纯度好且处理量大,仅通过一步实验就达到初级纯化和浓缩的目的,是一种经济有效的纯化方法,为下步工业化生产奠定基础。 李进军 赵晨 王辂 李端华关键词:硫酸铵 纯化 分子串联重复策略用于制备超短肽 被引量:2 2022年 超短肽具有更好的稳定性、组织渗透性、生物相容性以及更低的免疫原性。GHK(glycyl-L-histidyl-L-lysine)和GQPR(glycyl-L-glutamyl-L-prolyl-L-arginine)具有刺激胶原蛋白产生、减缓胶原蛋白降解的作用,作为抗皱成分广泛应用于化妆品。超短肽一般都是通过固相合成方法制备,其缺陷是制备过程中大量使用有机化学试剂而造成环境负担,故本文探讨了一种设计和制备超短肽的新方法。因序列短而无法直接重组表达,文中首先构建了适用于融合表达的载体骨架pET28a-Trxm。以GHK和GQPR串联重复基因作为滚环扩增的基本单元(tandem repeat of short peptides,TRSP),反应时随机掺入5-甲基胞嘧啶获得长基因片段,然后经Acc65Ⅰ和ApaⅠ消化产生随机长度的基因。胶回收500 bp到1500 bp的DNA片段,克隆得到表达载体pET28a-Trxm-(TRSP)n并转化获得重组菌。双酶切及测序结果表明,成功构建获得串联重复数n=1、2、3、4、6、7、8、9的阳性克隆。蛋白表达结果显示,当串联重复数n=1、2、3、4、8、9时均有相应融合蛋白表达,表达水平随着重复数增加而降低。Trxm-(TRSP)1表达水平最高,达总蛋白的50%,而Trxm-(TRSP)2表达水平为总蛋白的30%。进一步地,含Trxm-(TRSP)1的清液先后经肠激酶和胰蛋白酶切割后,HPLC分析结果表明,成功获得超短肽GHK和GQPR。该结果对于超短肽重组制备的工业化应用具有重要价值。 赵晨 李端华 李进军 王辂关键词:滚环扩增 融合蛋白 成都平原蜘蛛内生菌宏基因组文库构建及新型青霉素酰化酶的初步筛选 2017年 蜘蛛是一类种类繁多、数量庞大、分布广泛的捕食性动物(新发现的名为Bagheera kiplingi的跳蛛除外)。超过60%的蜘蛛感染了各种内生菌。内生菌在调节蜘蛛生长、繁殖、传播、防御等方面有重要作用。蜘蛛及其内生菌蕴含着极其丰富的次级代谢产物和各种酶学资源,国内外关于这方面的研究还不多。在前期蜘蛛内生菌菌群调查的基础上(工作另文发表),本研究构建了蜘蛛内生菌宏基因组文库,并从中筛到一段核心序列(NCBI登录号:KX115406),该序列与Pseudomonas mosselii SJ10菌株编码的青霉素G酰化酶(EC.3.5.1.11)序列部分同源。序列分析表明这很可能是一种新型青霉素酰化酶。 谢超颖 殷海兴 潘月 李进军 王辂 苟小军关键词:宏基因组文库 青霉素酰化酶 小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶培养条件优化 2022年 为实现小肠结肠炎耶尔森菌非特异性核酸酶(non-specific nuclease from Yersinia enterocolitica subsp.palearctica,Nucyep)的高水平分泌表达,研究从pET24a-nucyep中得到nucyep基因片段,插入穿梭质粒pBE-S得到重组载体pBE-S-nucyep,将其线性化后与枯草芽孢杆菌信号肽混合物连接并转化大肠杆菌感受态细胞,经测序验证共获得43个含正确信号肽序列的克隆。将以上重组载体分别转化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,B.subtilis)RIK1285,通过比光密度法筛选得到Nucyep分泌水平最高的工程菌株B.subtilis RIK1285/pBE-S-nucyep-YoaW。对其进行培养条件优化,结果表明,采用工程菌B.subtilis RIK1285/pBE-S-nucyep-YoaW在培养基3×LB中以体积分数5%接种量接种,培养温度30℃,摇床220 r/min振荡培养48 h时,发酵上清液中重组Nucyep酶活达到(8.27±0.41) U/μL,较优化前提高了约20倍。结果表明,通过对信号肽的筛选及培养条件的优化,重组Nucyep在B.subtilis中可获得高效分泌表达,为其进一步研究及应用奠定基础。 朱瑜 郭森林 高婷 王辂 李端华 李进军 葛燕 赵晨关键词:分泌表达 活性测定