黄朋
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 恶性疟原虫PfRNase Ⅱ的克隆表达与降解特性的初步分析被引量：3
- 2016年
- 目的利用原核表达系统诱导表达恶性疟原虫融合蛋白pGEX-PfRNaseⅡ,并分析其RNA降解特性。方法分析并选取恶性疟原虫3D7株PfRNaseⅡ的活性区,以cDNA为模板PCR扩增目的片段。将目的片段插入到pGEX-4T-1表达载体中,构建pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒,转化至大肠埃希菌BL21-CodonPlus(DE3),利用IPTG诱导表达目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ。应用Glutathione-SepharoseTM 4B树脂纯化目的蛋白。并用pGEX-PfRNaseⅡ体外分析PfRNaseⅡ的RNA降解特性。结果经PCR、双酶切、测序鉴定,pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒构建正确,转化DE3后在IPTG的作用下表达目的蛋白。纯化的目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ在体外可降解单链RNA,但不能降解双链RNA。pGEX-PfRNaseⅡ在低浓度的Mg2+条件下降解活性较强,高浓度Mg2+条件下活性受到抑制,在5mmol/L EDTA存在下活性降低。结论克隆表达的pGEX-PfRNaseⅡ重组蛋白能水解单链RNA,且该水解活性具有二价金属离子依赖性。
- 余胜超常志广土志伟黄朋韩悦赵帅杰魏晓艳周健华陆慧君姜宁陈启军
- 关键词：原核表达RNA降解
- 刚地弓形虫ME49株AP核酸内切酶的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2016年
- 目的原核表达、纯化刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)ME49株AP核酸内切酶,并制备多克隆抗体。方法采用PCR方法扩增出刚地弓形虫ME49株DNA TGME49-216600(681bp)基因。将该片段分别插入到pET-28a和pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pET-28a-TGME49-216600和pGEX-4T-1-TGME49-216600并测序,转入大肠埃希菌BL21-CodonPlus后用IPTG诱导表达重组蛋白质。用His标签重组蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测抗体效价;采用Western blot方法分析抗体特异性。结果 SDS-PAGE分析表达的His标签重组蛋白质分子质量单位约为35ku,GST标签重组蛋白质分子质量单位约为55ku。间接ELISA方法检测制备的兔抗His标签重组蛋白抗体效价>1∶16 000,Western blot方法验证显示该抗体能识别天然AP核酸内切酶。结论成功构建了TGME49-216600的表达载体,制备的多克隆抗体具有特异性,为刚地弓形虫ME49株AP核酸内切酶功能的研究奠定了基础。
- 赵帅杰张东超王威黄朋陆慧君尹继刚姜宁
- 关键词：刚地弓形虫原核表达多克隆抗体
- 恶性疟原虫肝素结合蛋白质PF3D71104400的原核表达与多克隆抗体的制备被引量：1
- 2017年
- 为研究肝素结合蛋白质PF3D7_1104400的功能以及其作为疟疾疫苗候选抗原的可行性,通过PCR方法扩增目的基因,并将其与p ET-28a和p GEX-4T-1表达载体连接构建重组表达质粒。将构建成功的重组表达质粒转化入大肠杆菌BL21-Condon Plus(DE3)-RIPL中诱导表达,利用亲和层析的方法纯化His-tag和GSTtag重组蛋白质。用His-tag重组蛋白质免疫家兔制备多克隆抗体,以该抗体为一抗,利用Western blot检测该抗体的特异性以及PF3D7_1104400蛋白质在虫体内是否表达。结果表明:成功构建重组表达质粒PF3D7_1104400-p ET和PF3D7_1104400-p GEX,诱导表达并纯化出特异性好、纯度高的重组蛋白。制备的多克隆抗体能够特异性识别虫体天然蛋白,PF3D7_1104400蛋白质在恶性疟原虫体内全长表达。
- 黄朋赵帅杰陆慧君尹继刚姜宁陈启军
- 关键词：恶性疟原虫肝素原核表达多克隆抗体疫苗候选抗原
- 恶性疟原虫3D7株新型裂殖子蛋白质(PF3D7_1361800)的表达纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2015年
- 目的用大肠埃希菌表达PF3D7_1361800蛋白,制备多克隆抗体。方法根据PF3D7_1361800蛋白的水溶性分析,设计目的基因引物,采用PCR技术扩增目的基因片段,长度为897bp。将其克隆到pMD18-T载体,测序正确后将该片段连接到pET-28a和pGEX-4T-1表达载体中,测序鉴定正确后将重组质粒转化到大肠埃希菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL中,用0.1mmol/L IPTG诱导表达,用His GraviTrapTM和Gluthathione-Sepharose 4B亲和层析柱纯化目的蛋白质。用His-tag重组蛋白免疫家兔,每2周免疫一次,分别于免疫后14、28、42、52d采血,用间接ELISA法测定抗体效价。以制备的多克隆抗体作为一抗,采用Western blot分析其特异性。结果经测序和酶切鉴定,成功构建了表达载体pET-PF3D7_1361800和pGEX-PF3D7_1361800。SDS-PAGE分析亲和纯化的重组蛋白纯度较好,间接ELISA法检测该蛋白免疫兔血清抗体效价>1∶16 000。结论成功克隆了PF3D7_1361800的表达载体并表达目的蛋白,制备的抗重组蛋白多克隆抗体具有特异性,为研究该蛋白质的生物学功能及疟疾疫苗的研发奠定了基础。
- 魏晓艳姜宁周健华常志广赵欣土志伟余胜超韩悦黄朋赵帅杰陆慧君陈启军
- 关键词：裂殖子原核表达多克隆抗体
