李燕
- 作品数：12 被引量：106H指数：6
- 供职机构：中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 瘦素对猪卵母细胞体外成熟及克隆猪妊娠率的影响被引量：2
- 2008年
- 体细胞克隆猪在人类医学、基础科学研究和畜牧业生产方面均具有很大的应用潜力.为了提高体细胞克隆猪的效率,首先比较了两种基础成熟液NCSU-23和TCM199的体外成熟效果,然后在TCM199培养液的基础上,较系统地研究了添加不同浓度的瘦素对猪卵母细胞成熟、孤雌激活胚胎和克隆胚胎的体外发育以及克隆胚胎体内发育的影响.结果表明:成熟液中添加100ng/mL或200ng/mL瘦素对猪卵母细胞的核成熟没有显著影响(P>0.05);对孤雌激活卵裂率和克隆胚胎卵裂率也没有显著影响(P>0.05);但却显著提高了孤雌激活胚胎的囊胚率和囊胚细胞数,并且显著提高了克隆胚胎的囊胚率;当添加量为100ng/mL时,克隆囊胚的细胞数显著升高.另外,研究表明,瘦素很可能具有提高克隆胚胎移植妊娠率和妊娠到期率的作用.
- 卫恒习李俊李秋艳李燕戴蕴平马育芳薛恺李宁
- 关键词：瘦素卵母细胞体外成熟体细胞核移植
- 利用体细胞核移植技术生产表达增强绿色荧光蛋白(EGFP)的转人溶菌酶基因(HLY)的猪克隆胚胎被引量：6
- 2008年
- 由于生理特性和器官大小的原因,猪在人类疾病模型和器官移植方面具有很大的应用潜力.正因如此,猪基因结构的修饰对农业生产和人类医学两方面都意义重大.研究用脂质体介导的方法转染了猪胎儿成纤维细胞,所用结构为双标的人溶菌酶质粒(pBC1-HLY-GFP-NEO).分别对包含两个品种(五指山猪、长白猪)的5个细胞系(sw7,sw8,slw3,slw6和slw9)进行了转染.经过14d,1000μg/mL浓度G418药物的筛选处理,sw7,sw8,slw3和slw6等4个细胞系的95以上细胞都表达绿色荧光蛋白,而细胞系slw9的转染效率只有49.3.用转染效率高的3个细胞系作为核供体构建猪克隆胚胎,通过电刺激方法进行融合和激活,然后在PZM3中体外培养.48h后,重构胚的平均卵裂率为76.7;经过7d培养后观察,有18.5的胚胎发育到囊胚阶段,其中93.3的囊胚在荧光显微镜下能够发出绿色荧光,但囊胚之间的荧光强度存在差异.研究结果表明,通过脂质体介导的方法可以获得高转染效率的转基因猪胎儿成纤维细胞系,但细胞系之间的转染效率不同;用转基因猪胎儿成纤维细胞构建的重构胚,能够成功发育到囊胚阶段,而且大多数为表达绿色荧光蛋白的阳性胚胎.
- 李秋艳卫恒习郭英李燕赵蕊于政权汤波张磊戴蕴平李宁
- 关键词：EGFP核移植胎儿成纤维细胞
- 季节对猪体外成熟卵母细胞的发育能力的影响被引量：5
- 2007年
- 猪的卵母细胞对外界环境非常敏感,这造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一.文章的研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响.研究中比较了不同季节每对卵巢获得A/B级卵的数量以及卵母细胞核成熟的比例(实验1),另外统计分析了不同季节孤雌(实验2)和核移植(实验3)胚胎发育能力的差异,最后在冬春两季分别进行了克隆胚胎的移植以观测其体内发育情况(实验4).结果显示实验1,春季(3月到5月)COCs/卵巢的比例最高(7.6±3.5),夏,秋,冬季的比例依次是(6.4±3.3),(6.7±2.9),(6.7±3.4),p<0.05.然而,没有发现卵母细胞的MⅡ比例有显著性差异((75.3±3.3)%,(73.5±2.3)%,(73.0±4.2)%,(76.5±6.7)%,依次是春,夏,秋,冬季的MⅡ比例,p<0.05).实验2,观察到夏季孤雌胚胎的囊胚率显著性降低(10.1±2.6)%,春,秋,冬季的孤雌胚胎囊胚率依次是(27.2±3.4)%,(22.4±3.5)%,(22.4±3.4)%,p<0.05.实验3,猪体细胞克隆胚胎在春季囊胚率获得提高((12.2±1.3)%,秋,冬季的克隆胚胎囊胚率依次是(10.2±1.2)%,(8.1±1.4)%,p<0.05).实验4,发现冬季胚胎移植无论是妊娠率还是出生率都明显低于春季.以上结果表明季节变化影响体外成熟卵母细胞的发育能力.
- 张坤张运海潘登科马育芳张建李旭阳卫恒习王少华李燕戴蕴平李宁
- 关键词：体细胞核移植孤雌激活卵母细胞
- 供体细胞对猪体细胞克隆胚胎早期发育的影响被引量：12
- 2006年
- 以中国农业大学实验用小型猪香猪胎儿成纤维细胞、成年耳成纤维细胞和颗粒细胞3种细胞系为供体细胞进行核移植。比较了血清饥饿法和接触抑制法处理胎儿成纤维细胞诱导进入G0/G1期的效率,发现二者差异不显著(P>0.05),血清饥饿2d和4d差异不明显,同样接触抑制2d和4d差异也不显著(P>0.05)。系统研究了影响克隆胚胎发育的供体因素:血清饥饿与否、细胞形态、细胞类型及个体差异等,结果表明:血清饥饿处理对克隆胚的早期发育没有明显的促进作用;圆形光滑细胞有利于细胞融合,对早期发育无显著影响(P>0.05);不同个体、不同类型的供体细胞对克隆胚囊胚发育率有一定的影响。
- 潘登科张运海孙秀柱李燕吴常信李宁
- 关键词：胎儿成纤维细胞血清饥饿细胞类型克隆胚胎
- 猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养被引量：16
- 2007年
- 目的本研究系统比较了体外受精胚(IVFEs)、孤雌激活胚(PAEs)以及体细胞核移植胚(NTEs)的发育率和囊胚质量,同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。方法利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术分别生产猪的NTEs、IVFEs和PAEs,开展体外培养。结果(1)IVFEs、PAEs和NTEs的卵裂率分别为72.0%,66.0%和63.5%,各组间没有显著差异(P>0.05);囊胚形成率分别为11.0%,22.6%和16.9%,也不存在明显不同(P>0.05);然而,在囊胚质量,即ICM细胞数/总细胞数的比例上,IVFEs和NTEs均优于PAEs(0.448%,0.356%vs 0.122%,P<0.05)。(2)对PAEs来讲,以PZM-3为基础培养基时囊胚率明显高于以NCSU-23为基础培养基时的处理组(35.4%vs.22.6%,P<0.05);而对NTEs而言,两种培养基在支持胚胎形成囊胚方面的效果相当(26.6%vs.21.1%,P>0.05),虽然PZM-3培养时胚胎卵裂率显著低于NCSU-23培养组(47.5%vs.63.5%,P<0.05)。结论(1)PAEs的囊胚质量在3种来源的胚胎中最差;(2)对PAEs理想的培养基,当用于NTEs培养时却不一定是最佳的选择。
- 张运海潘登科孙国杰孙秀柱李燕戴蕴平李宁
- 关键词：体外受精体细胞核移植孤雌激活体外培养
- 低氧培养早期胚胎克隆小型猪(Sus Scrofa)被引量：26
- 2006年
- 猪的体细胞克隆在人类的异种器官移植方面有着巨大的应用前景.以中国实验用小型猪胎儿成纤维细胞为核供体,从屠宰场采集初情期前母猪的卵巢,卵母细胞体外成熟后去核构建克隆胚胎,重构卵电融合并激活,在7%O2,5%CO2及88%N2的气相条件下NCSU-23或PZM-3培养基培养.给3头代孕母猪移植230枚克隆胚胎,其中一头妊娠足月并产下3头仔猪,生产克隆猪的效率达到1.3%;其中一头健康状况良好,存活至今,毛色及DNA微卫星遗传分析证实为克隆个体.以上结果表明,利用初情期前母猪的卵母细胞,克隆胚胎培养在低氧条件下,是生产克隆猪的一条有效途径.
- 潘登科张运海孙秀柱张健李旭阳李燕顾志良戴蕴平吴常信李宁
- 关键词：卵母细胞体外成熟核移植胚胎培养低氧
- 胚胎移植方法和受体母猪因素对克隆猪生产效率的影响被引量：8
- 2012年
- 【目的】建立高效的胚胎移植技术体系,以提高克隆猪的生产效率。【方法】比较不同移植方法和不同受体母猪状况的胚胎移植分娩率和克隆猪的出生效率,利用体外发育能力相似的不同品种和发育阶段的克隆胚胎混合移植确定最佳的受体母猪发情同期时间。【结果】克隆胚胎经由输卵管伞移植比输卵管打孔移植具有更高的移植分娩率和克隆猪效率(2.2%和0.4%,P<0.01),而胚胎移植后辅助人工授精会降低克隆效率(0.6%和2.2%,P<0.01)。利用经产母猪作为移植受体比青年猪受体具有更高的克隆效率(3.0%和0.8%,P<0.01)和平均窝产仔数((5.5±0.7)头和(2.7±0.3)头,P<0.05)。受体母猪发情时间比胚胎激活时间晚12—36 h组的克隆效率分别为显著(P<0.05)和极显著(P<0.01),高于晚0 h和早12—24 h组的克隆效率(2.0%、0.5%和0%)。最佳的受体母猪发情时间为晚于克隆胚胎激活后24 h,克隆效率达3.0%。【结论】选择自然发情时间晚于克隆胚激活后24 h的经产母猪为受体,通过输卵管伞端移植胚胎,能够获得较高的克隆效率,是猪克隆胚胎移植的较理想方法。
- 卫恒习李秋艳高凤磊李燕张守全李宁
- 关键词：克隆猪胚胎移植克隆效率体细胞核移植
- 化学激活和季节对克隆猪出生率的影响被引量：5
- 2009年
- 为了解化学激活对克隆猪出生效率的影响,研究了体外成熟的猪卵母细胞被激活恢复减数分裂到克隆猪出生的整个过程.首先研究了电激活(Ele),Ele+CHX+CB和Ele+6-DMAP3种激活方法对猪卵母细胞孤雌激活(parthenogenetic,PA)和核移植(nucleartransfer,NT)重构胚体外发育的影响.比较了Ele或Ele+CHX+CB激活方法对克隆猪出生效率的影响.实验中单独列出了PA胚的扩张囊胚率或NT优质囊胚率来代表囊胚的质量.结果表明:化学联合激活提高了PA的囊胚率和扩张囊胚率,但对PA胚的卵裂率和囊胚细胞数没有显著影响(P>0.05).Ele+6-DMAP对PA胚的囊胚率和扩张囊胚率有显著提高(P<0.05),但对NT胚的囊胚率和优质囊胚率没有提高甚至降低了NT胚的发育.Ele+CHX+CB虽然提高了NT胚的囊胚率(P<0.05),但对优质囊胚率没有影响.Ele+CHX+CB激活方法使克隆猪出生率有所提高但不显著.本文还研究了季节对猪孤雌发育和克隆猪出生率的影响.结果表明,春季收集的猪卵母细胞使用3种激活方法卵母细胞的孤雌囊胚率均高于冬季收集的猪卵母细胞的囊胚率.春季和冬季进行移植,克隆猪出生率没有区别.综上,在PA中获得的结果与NT胚中获得的结果不一定完全匹配,说明孤雌激活和重构胚的激活机制还是有区别的.化学联合激活虽然能提高囊胚率,但它的作用相当于降低囊胚形成的门槛,却不是从本质上改变囊胚发育能力,因此不能显著提高克隆猪出生效率.春季收集的卵母细胞在体外培养中的发育能力好于冬季收集的卵母细胞,但季节对克隆猪出生率没有显著影响.
- 马育芳卫恒习李燕李秋艳方锐赵蕊张坤薛恺娄颜坤戴蕴平连林生李宁
- 关键词：孤雌激活化学激活体细胞核移植克隆猪
- 季节对体外成熟卵母细胞的发育能力的影响被引量：2
- 2006年
- 猪的卵母细胞对外界环境非常敏感，造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一。猪卵脆弱的主要原因是其胞质中含有大量的脂肪滴，但目前其具体生物学功能还不清楚。众所周知，猪的繁殖表现和环境密切相关，例如，温度、湿度、光照等。本研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响。连续两年从当地屠宰场获取初情期前猪卵巢，抽取猪卯丘卵母细胞复合体，并在不含BSA的NCSU-23（添加10ng／mL： EGF，10ng／mL leptin，0．57mmol／Lcysteine，10IU／mLPMSG和101U／mLhCG）中培养44h，然后用透明质酸酶脱去卵丘。部分卵母细胞经过电击进行孤雌激活，部分卵母细胞用来进行体细胞核移植。对于猪体细胞核移植，使用长白猪胎儿成纤维细胞做为核供体，上述脱去卵丘的卵母细胞作为胞质供体。克隆胚和孤雌胚在添加4mg／mL的BSA液滴中培养，第2天和第6天分别计算卵裂和囊胚率（D0：融合或激活的当天）。其中每个实验至少重复3次，所有实验都经过SPSS（13．0）统计分析。比较了不同季节每对卵巢获得A级卵（外包3层以上致密的卵丘细胞并且卵胞质均匀的卵母细胞为A级卵）和B级卵（外包2～3层卵丘细胞并且胞质均匀的卵母细胞为B级卵）的数量以及卵母细胞核成熟的比例（实验1），统计分析了不同季节孤雌（实验2）和核移植（实验3）胚胎发育能力的差异。实验1中发现春季（3～5月）COCs／ovarypairs的比例最高[7．6±3．5（春）vs6．4±3．3（夏），6．7±2．9（秋），6．7±3．4（冬），P〈0．05]。然而，没有发现卵母细胞的MⅡ百分比有显著性差异[75．3％±3．3％（春），73．59／5±2．3％（夏），73．0％±4．2％（秋），76．5％±6．79／5（冬），P〈0．05]。实验2中观察到夏季孤雌胚胎的囊胚率显著性降低[10．2％±2
- 张坤张运海马育芳潘登科卫恒习王少华李燕戴蕴平李宁
- 关键词：体外成熟卵母细胞
- 利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白的猪转基因克隆胚胎被引量：25
- 2005年
- 以转染了质粒pEGFP-N1的猪胎儿成纤维细胞与体外成熟(invitromaturation,IVM)的猪卵母细胞构建克隆胚,比较了细胞转染后G418筛选与否,卵母细胞IVM持续时间及IVM时氧分压高低对克隆胚早期发育的影响.结果如下:(ⅰ)G418连续筛选10天所得转GFP细胞的克隆胚卵裂率显著低于非筛选组(47.5%vs.71.6%,P<0.05),而囊胚率差异不显著(10%vs.10.4%,P>0.05);(ⅱ)相比于36hIVM,延长IVM时间至42h卵母细胞的核成熟明显改善(83.6%vs.96.7%,P<0.05);另外,虽然IVM42h也使得克隆胚卵裂率(59.3%vs.73.6%)及囊胚率(9.3%vs.13.2%)都略有提高,但效果不显著(P>0.05);(ⅲ)7%氧IVM42h的卵母细胞与20%氧处理组相比,克隆胚的卵裂率(70.6%vs.67.1%)以及囊胚率(11.8%vs.12.3%)差异都不明显(P>0.05).上述结果显示:(ⅰ)G418筛选对转绿色荧光蛋白基因(GFP)克隆胚卵裂不利;(ⅱ)IVM36和42h的卵母细胞对克隆胚早期发育影响不明显,但IVM42h有利于核成熟,因此构建克隆胚时仍以IVM42h的卵母细胞为宜;(ⅲ)低氧对猪转GFP克隆胚早期发育无明显促进作用.
- 张运海潘登科孙秀柱孙国杰王晓波刘晓辉李燕戴蕴平李宁
- 关键词：转基因克隆绿色荧光蛋白绿色荧光蛋白基因猪卵母细胞克隆胚胎体细胞核移植技术转基因胎儿成纤维细胞
