田晓彦
- 作品数：12 被引量：16H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金高层次人才科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 国内活禽市场新型环形病毒AGV2的发现被引量：1
- 2015年
- 为了解国内鸡群是否存在新型环形病毒AGV2,研究对来自扬州的一个活禽市场的20份鸡羽囊样品进行了AGV2的PCR检测。通过对鸡羽囊DNA提取、PCR扩增以及序列分析,在20份样品中检测到4份阳性样品。测序比对发现,本研究检测到的国内AGV2序列与NCBI中发表的AGV2的同源性为95.7%~99.4%。并对一份阳性样品的PCR产物进行了TA克隆,测定了该PCR的灵敏度为2.7个拷贝数。这一结果不仅首次证明国内活禽市场存在AGV2,而且为进一步开展国内鸡群AGV2的分子流行病学及其致病性等研究奠定良好的基础。
- 张雨沈元朝田晓彦谢泉谢泉王雨蒙邵红霞秦爱建邵红霞
- 关键词：鸡群PCR
- 犬细小病毒2型变异株对高母源抗体犬的致病性被引量：4
- 2019年
- 为了探究CPV-2变异株的致病性,用CPV-2a和CPV-2b野毒株,分别攻击犬细小病毒(CPV-2)高母源抗体(MDA)幼犬,根据犬临床症状,组织病理学,粪便排毒和血清抗体应答等指标,评价高母源抗体(HI滴度≥1∶160)对不同CPV病毒变异株的保护作用。结果表明, CPV-2a和CPV-2b攻毒后引起明显临床症状,攻毒后3～6 d粪便中CPV排毒。感染犬的组织样品经PCR检测表明,CPV-2a/2b病毒广泛分布。组织病理学分析表明,CPV-2a/2b感染引起肠道黏膜出血。研究表明,CPV-2高母源抗体对CPV-2a/2b变异株攻击不能提供有效保护,有必要开发CPV变异株的新型疫苗。
- 甘军纪田晓彦高巍刘秀梵
- 关键词：犬细小病毒变异株母源抗体
- 犬细小病毒2a型致弱疫苗株的培育与免疫效力试验被引量：2
- 2020年
- 为了获得犬细小病毒(CPV)变异株的致弱疫苗株,将CPV-2a野毒株(YZ10-5)在FK81细胞上连续传代,评价不同代次毒种对易感幼犬的毒力。用高代次传代毒种免疫高母源抗体(MDA)幼犬,经CPV-2a和CPV-2b强毒攻毒,评价致弱株的免疫保护效力。结果表明,CPV-2a毒株(YZ10-5株)在FK81细胞上连续传至31代,毒力明显减弱,传至61代无明显毒力。用61代致弱毒种(YZ10-5/F61),2×10^3TCID50/剂,间隔3周,2次皮下注射接种高母源抗体幼犬,第2次免疫后3周用CPV-2a和2b变异株口鼻攻毒,所有免疫犬无明显临床症状,且粪便无排毒,而未免疫犬全部发病和粪便排毒。初步研究表明, CPV-2a传代致弱毒株(YZ10-5/F61)有希望用于开发CPV防控的新型疫苗。
- 甘军纪田晓彦吕海峰刘秀梵
- 关键词：犬细小病毒VP2基因免疫效力
- 犬冠状病毒M和N蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定
- 2021年
- 为制备抗犬冠状病毒(CCV)特异性单克隆抗体,以纯化的CCV为抗原免疫BALB/c小鼠4次,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞,用聚乙二醇(PEG1500)进行细胞融合,通过间接免疫荧光试验(IFA)筛选抗体阳性杂交瘤细胞。经3次克隆,获得4株能稳定分泌抗CCV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其抗体效价在体外连续传40代均稳定,命名为2H11、2G3、3E2和2B8。这些杂交瘤细胞株的细胞染色体数目均属于杂交瘤染色体组型。单抗Ig亚类鉴定结果表明,除了2H11单抗为IgG3外,其他3株单抗均为IgG1亚类。Western blot分析表明,2H11、2G3单抗识别CCV M蛋白(28~32 kDa),2B8、3E2单抗识别CCV N蛋白(43~50 kDa)。M蛋白特异的2H11、2G3杂交瘤培养上清IFA效价均为1∶1000,ELISA效价均≥1∶10~5;N蛋白特异的2B8、3E2杂交瘤培养上清IFA效价均为1∶100,2B8 ELISA效价≥1∶10~5,3E2 ELISA效价≥1∶10~3。单抗特异性试验结果表明,这些单克隆抗体与犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)和犬副流感病毒(CPIV)等均无交叉反应。CCV M、N蛋白特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,为CCV鉴定和相关诊断方法的建立奠定坚实的基础。
- 甘军纪吕海峰汤也田晓彦刘秀梵
- 关键词：犬冠状病毒单克隆抗体M蛋白N蛋白杂交瘤细胞
- 新型环形病毒GyV3的VP3基因克隆、表达及其多抗制备
- 引言鸡传染性贫血病毒—凋亡蛋白(CAV-VP3)具有一种重要的能力是在多种人类癌细胞中能够诱导肿瘤选择性细胞凋亡,而对机体正常细胞无毒副作用。新型人源环形病毒HGyV序列是由Sauvage等在健康人的皮肤棉试样品中首次检...
- 王萍田晓彦邵红霞秦爱建叶建强
- 文献传递
- 新型环形病毒AGV7VP3基因克隆、表达及其多抗制备
- 2018年
- 研究对新型环形病毒AGV7 VP3基因进行了克隆、表达以及多克隆抗体的制备。利用原核表达系统获得了可溶性重组GST-VP3蛋白,纯化后免疫小鼠制备了抗GST-VP3多克隆抗体。同时构建pcDNA3.1+EGFP-VP3真核表达载体。通过共聚焦显微镜观察发现,AGV7 VP3与EGFP融合蛋白在HCT116肿瘤细胞中集中表达于细胞核,且呈散在点状分布,类似凋亡小体。研究为进一步研制AGV7血清学诊断方法提供了材料,同时为探究AGV7VP3的生物学功能打下了基础。
- 申秋平田晓彦邹海涛邵红霞邵红霞叶建强
- 关键词：VP3多克隆抗体
- 新型环形病毒AGV2的VP3基因的克隆表达及多抗制备被引量：5
- 2016年
- 新型环形病毒AGV2最早于2011年报道。为建立AGV2血清学诊断方法,并探究其VP 3基因功能,本研究对AGV2的VP3基因进行了克隆、表达及多抗制备。通过将AGV2 VP3基因克隆进pGEX-6p-1原核表达载体,获得了可溶性GST-VP3融合表达产物,并利用纯化的GST-VP3蛋白制备了小鼠抗GST-VP3多克隆抗体。同时构建获得了pcDNA3.1-VP3以及EGFP-VP3两个AGV2 VP 3基因真核表达载体。间接免疫荧光试验以及EGFP观察发现,AGV2的VP3蛋白及其EGFP融合蛋白EGFP-VP3在HCT116肿瘤细胞中的表达集中于细胞核,且呈散在点状分布,类似凋亡小体。这些AGV2 VP3表达载体的构建,表达产物、小鼠多克隆抗体的获得及其在肿瘤细胞中的表达分布,为进一步研制AGV2血清学诊断方法提供了材料,为深入探究AGV2 VP3的生物学功能打下了基础。
- 施洋洋田晓彦马靖雯韦芊含邵红霞邵红霞叶建强
- 关键词：VP3基因多克隆抗体
- J亚群禽白血病病毒囊膜蛋白胞浆区酪氨酸基序及其变体的表达
- 2014年
- J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白Env被认为与其致病致瘤密切相关,然其分子基础尚不清楚。在Env胞浆区发现免疫及肿瘤疾病发生相关的酪氨酸基序(Yxx M、ITIM、类ITAM)基础上,研究对Gen Bank中不同ALV-J毒株Env进行了统计分析。结果发现,34.7%ALV-J毒株Env仅存在ITIM,63.9%ALV-J毒株Env同时具有ITIM以及Yxx M,1.4%ALV-J毒株Env具有Yxx M以及类ITAM。同时,还构建了JS-NT以及4817毒株Env相应酪氨酸变体表达质粒,并在DF1细胞中获得了良好的表达。这些发现及构建的表达质粒,为进一步研究ALV-J Env在ALV-J致病致瘤中的作用及其分子机理奠定了基础。
- 范中雷田晓彦邵红霞秦爱建金文杰钱琨叶建强
- 关键词：J亚群禽白血病病毒囊膜蛋白变体
- 禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白YxxL基序及其突变体病毒的拯救被引量：1
- 2014年
- 禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜蛋白Env与病毒感染、复制、致病性密切相关,然其分子基础尚不清楚。本研究对NCBI中不同REV毒株Env序列分析发现,其胞浆区存在一个高保守且可能与病毒致病性有关的酪氨酸基序YxxL。通过定点突变以及分子传染性克隆技术,构建了REV Env蛋白YxxL基序2个突变体(Y突变为F,L突变为A)。通过转染DF1细胞,并经间接免疫荧光以及测序鉴定,拯救并获得了2个REV突变体病毒,分别命名为FxxL、YxxA。Env蛋白中YxxL保守基序的发现以及相应突变体病毒的拯救为研究REV Env蛋白及其YxxL基序在REV致病中分子作用基础提供了材料。
- 田晓彦范中雷鲍衍清鲍衍清邵红霞秦爱建叶建强
- 关键词：禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白定点突变病毒拯救
- 犬冠状病毒JS1706和JS1712毒株基因组3′端分子特性分析被引量：1
- 2021年
- 为了全面了解犬冠状病毒(CCoV)分离毒株JS1706和JS1712基因组3′端主要结构蛋白基因和非结构蛋白基因的分子特征,本研究设计了8组引物进行RT-PCR扩增,产物经测序和拼接后,获得了约8.7 kb基因组片段,该基因组结构及其编码蛋白顺序为5′-S-3abc-E-M-N-7ab-3′。对CCoV JS1706、JS1712株8.7 kb基因组核苷酸序列与α冠状病毒属参考毒株的相同区域核苷酸序列进行比对,结果表明,2个分离株与CCoVⅡ型参考毒株相似性最高(83.4%~93.1%),其次为FCoVⅡ型参考毒株(87.1%~87.9%)、TGEV参考毒株(86.1%~86.8%)、CCoVⅠ型参考毒株(72.0%~72.1%)和FCoVⅠ型参考毒株(67.5%~69.9%)。JS1706、JS1712毒株与同属冠状病毒参考株的结构蛋白S、E、M和N蛋白氨基酸相似性分别为46.4%~95.2%、75.6%~100%、82.8%~99.2%和78.5%~99.7%。说明同属内冠状病毒的S基因变异度大,E、M、N基因相对保守。根据基因组3′端8.7 kb核苷酸序列和S蛋白氨基酸序列相似性比对结果,JS1706和JS1712毒株均与泛嗜型原型株CB/05相似性最高,分别为93.0%~93.1%、94.8%~95.2%,其他结构蛋白包括E、M和N氨基酸序列比对也发现与CB/05株的相似性较高,分别为97.6%~100%、92.4%~93.1%和97.9%。S蛋白氨基酸序列的进一步分析表明,JS1706和JS1712毒株的S蛋白N端有一些特有氨基酸,S蛋白氨基酸序列中没有明显的S1/S2蛋白酶切位点(RRARR),但在958—963位氨基酸有S2′裂解位点特征基序(KRKYRS)。基于S蛋白氨基酸序列构建的系统发育进化树分析显示,CCoV JS1706和JS1712株与CCoVⅡa亚型参考毒株和FCoVⅡ型参考毒株聚集形成一个分枝。CCoV JS1706和JS1712株非结构蛋白的编码基因ORF3abc和ORF7,其结构、大小与经典疫苗株INSAVC-1相似,无明显插入、缺失和移码突变。本研究有助于深入了解国内CCoV流行毒株的分子特性,为后续分子流行病学调查、诊断试剂和疫苗研发奠定了基础。
- 汤也陈怡田晓彦吕海峰甘军纪
- 关键词：犬冠状病毒基因组系统进化分析
