吴雨桐
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目重庆市杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生天文地球更多>>
- 皮秒脉冲电场抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移并阻滞细胞周期于G2/M期且促进其凋亡
- 2016年
- 目的研究皮秒脉冲电场(ps PEF)对体外人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生物学行为的影响。方法固定ps PEF脉宽800 ps、频率3 Hz、脉冲处理个数2000个,将HUVEC分为对照组和(200、300、400)KV/cm场强的低、中、高剂量处理组。在ps PEF处理HUVEC后2、4、6、8、10、12、14、16 h,CCK-8法检测ps PEF对HUVEC生长的影响,采用划痕试验及TranswellTM小室法观察ps PEF对HUVEC迁移率的影响,流式细胞术检测ps PEF对HUVEC细胞周期及凋亡的作用。结果随着场强的增加,细胞死亡率上升,生长受到抑制,12 h时抑制率最为显著;ps PEF处理可明显抑制HUVEC的迁移能力;ps PEF可将HUVEC阻滞于G2/M期,同时HUVEC凋亡细胞数增多。结论 ps PEF可抑制HUVEC增殖和迁移,并阻滞细胞周期于G2/M期并促进其凋亡。
- 吴雨桐华媛媛熊正爱吴丽梅姚陈果张睿哲王智亮
- 高强度皮秒脉冲电场抑制HUVEC迁移、增殖及小管形成的实验研究被引量：2
- 2017年
- 目前,国内外关于皮秒脉冲电场(picosecond pulsed electric field,ps PEF)治疗肿瘤的研究多集中于ps PEF对肿瘤的杀伤效应,对肿瘤所赖以生存的血管生成的研究鲜有提及。为此,采用脉冲宽度为800 ps,重复频率为3 Hz,脉冲个数为2 000,电场强度分别为20 MV/m、30 MV/m,40 MV/m的皮秒脉冲电场处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),利用划痕实验、Transwell小室法、cell counting kit-8(CCK-8)法及体外小管形成实验,初步探究了ps PEF对血管生成的影响。实验结果表明:ps PEF可以有效降低HUVEC的迁移率和增殖率,且存在明显的剂量依赖关系,细胞迁移抑制率、细胞增殖抑制率均随ps PEF的增强而逐渐增大,其中细胞增殖抑制率在脉冲处理12 h后达峰值,细胞迁移和增殖抑制率最大可达73.68%,95.54%(40 MV/m);ps PEF可抑制HUVEC小管的形成,ps PEF场强越大,脉冲处理后小管形成抑制率越高,最高可达95.83%(40MV/m)。实验结果初步验证了高强度ps PEF对血管生成的抑制效果。
- 李成祥张睿哲姚陈果米彦吴雨桐熊正爱
- 关键词：肿瘤血管增殖率小管形成
- 皮秒脉冲电场对宫颈癌侵袭能力影响的实验研究被引量：2
- 2015年
- 目的研究不同场强皮秒脉冲电场（ps PEF）对宫颈癌侵袭能力的影响。方法 24只BALB/c裸鼠建立宫颈癌荷瘤裸鼠模型,待肿瘤最大径长至0.8～1.0cm时将其随机均分为：对照组（不予脉冲电场处理）及低场强（50k V/cm）、中场强（60k V/cm）和高场强（70k V/cm）组（n=6）,后3组分别给予场强ps PEF处理。1周后处死小鼠,行HE染色和电镜观察肿瘤的组织形态学变化,免疫组化染色检测肿瘤组织内血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达,Western blotting分析VEGF和MMP-9蛋白水平的变化。结果 ps PEF处理后,HE染色观察到组织的坏死面积随脉冲电场强度的增加逐渐增大,电镜下可见随着脉冲电场强度的增加肿瘤细胞呈现出不同程度的凋亡和坏死。免疫组化检测结果显示,随着脉冲电场强度的增加,肿瘤组织内VEGF和MMP-9阳性细胞数逐渐减少,VEGF和MMP-9蛋白平均光密度值较对照组明显下降,且随着脉冲电场强度的增强,平均光密度值逐渐下降,组间差异有统计学意义（P〈0.05）。Western blotting结果显示,VEGF和MMP-9蛋白表达水平随着脉冲电场强度的增加逐渐降低,组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ps PEF具有抗宫颈癌效应,能抑制宫颈癌细胞分泌的VEGF和MMP-9,降低宫颈癌细胞的侵袭能力。
- 吴丽梅华媛媛吴雨桐姚陈果张睿哲王智亮熊正爱
- 关键词：宫颈肿瘤基质金属蛋白酶9血管内皮生长因子类
- 不可逆性电穿孔介导HPV16 E6 shRNA干扰质粒对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的:探讨利用治疗剂量脉冲电场产生不可逆电穿孔(IRE)介导HPV16E6shRNA干扰质粒进入细胞的可行性,阐明二者共同作用对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及其作用机制。方法:将HPV16E6基因特异性干扰序列插入pGenesil-1质粒,构建HPV16E6shRNA真核表达载体,将10个电压为800V、脉宽100μs、频率1Hz的IRE作用于SiHa细胞与HPV 16E6shRNA干扰质粒的混悬液,根据处理因素组合,分为空白对照组、IRE处理组、pGenesil-N组、pGenesil-N+IRE组、pGenesil-E6组和pGenesil-E6+IRE组。在荧光显微镜下观察SiHa细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达,计算GFP表达效率;RT-PCR法检测HPV 16E6mRNA表达水平,Western blotting法检测HPV16E6蛋白、P53及PCNA蛋白表达水平,CCK-8法检测各组SiHa细胞增殖能力的变化。结果:成功构建HPV16E6shRNA真核表达载体,IRE处理后24h细胞即可见到绿色荧光;与IRE组比较,pGenesil-E6+IRE组E6 mRNA表达水平下降(P<0.05),E6蛋白表达水平降低(P<0.05),P53蛋白表达水平增高(P<0.05),PCNA表达水平下降(P<0.05);CCK-8法检测,与pGenesil-E6组比较,pGenesil-E6+IRE组细胞增殖活性下降更明显(P<0.05)。结论:治疗剂量的IRE可介导外源基因进入细胞,二者联合作用能明显抑制宫颈癌SiHa细胞增殖。
- 王智亮余腾骅秦琴吴雨桐张文倩华媛媛熊正爱周玮
- 关键词：电穿孔干扰质粒
