范哲
- 作品数：7 被引量：27H指数：3
- 供职机构：安徽医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高糖环境下肾小管上皮细胞来源外泌体诱导巨噬细胞激活的作用与机制被引量：11
- 2018年
- 目的探讨高糖环境下肾小管上皮细胞来源外泌体诱导巨噬细胞激活的作用与机制。方法（1）正常糖（5．5mmol／L）及高糖（30．0mmol／L）分别处理人肾小管上皮细胞（HK2）48h，收集两组上清液，使用超速离心法提取外泌体，采用透射电镜、Western印迹鉴定外泌体。（2）两组外泌体以PKH67标记后分别刺激人急性单核细胞白血病细胞株（THP-1）诱导分化的巨噬细胞，激光共聚焦观察THP-1巨噬细胞是否吞噬外泌体；显微镜下观察THP-1巨噬细胞的形态；Transwell小室法检测THP-1巨噬细胞的趋化能力；实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测THP-1巨噬细胞的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1／CCL2）水平；Western印迹检测各组p-JNK、p-p38MAPK和NF—κBp65蛋白的水平。结果（1）上清液经超速离心获取的囊泡，在电镜下观察到外泌体，粒径30～100nm。Western印迹检测囊泡表达外泌体的标志蛋白CD63和TSG101，不表达Calnexin蛋白，提示所获取外泌体的纯度较高。（2）激光共聚焦证实各组外泌体均能被THP-1巨噬细胞吞噬。与正常糖外泌体刺激组相比，高糖外泌体刺激组的THP-1巨噬细胞趋化能力增强，iNOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1的表达和分泌水平均上调（均P〈0．01），p-JNK、p-p38MAPK和NF-κBp65蛋白水平也显著升高（均P〈0．01）。结论高糖环境下肾小管上皮细胞分泌的外泌体可通过MAPK／NF-κB信号通路诱导巨噬细胞的激活和功能改变。
- 王东徐兴欣范哲齐向明吴永贵
- 关键词：巨噬细胞丝裂原活化蛋白激酶外泌体
- 褪黑素通过Toll样受体4信号通路抑制高糖诱导的小鼠系膜细胞增殖及炎性因子表达被引量：8
- 2019年
- 目的探讨褪黑素(MT)对高糖刺激小鼠系膜细胞(SV40)的增殖、Toll样受体4(TLR4)信号通路及炎性因子表达的影响。方法分组:甘露醇对照组(30mmol/L甘露醇),正常对照组(5mmol/L葡萄糖),对照(5mmol/L葡萄糖)+1000μmol/LMT组,高糖组(25mmol/L葡萄糖),高糖+10、100、1000μmol/LMT组及高糖+TLR4抑制剂(TAK242)组。(1)利用CCK-8细胞毒性试剂盒检测细胞活力,EdU试剂盒测定细胞增殖。利用细胞免疫荧光观察TLR4的表达及核因子κB(NF-κB p65)的入核情况。(2)实时定量PCR检测TLR4 mRNA表达,实时定量PCR及ELISA法分别测定各组细胞下游炎性因子单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA和蛋白分泌水平;Western印迹检测TLR4通路蛋白TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(Trif)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)和磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB)的表达。结果高糖可刺激系膜细胞增殖,促进TLR4表达、NF-κB p65核转移,而MT和TLR4抑制剂均可抑制上述现象,且MT的抑制作用呈浓度依赖性。与正常对照组比较,高糖刺激不仅上调TLR4、MCP-1、IL-1β和TNF-αmRNA的表达(均P<0.05),而且MyD88、Trif、p-IRF3、pI-κB的蛋白表达也明显增加(均P<0.05)。与高糖组比较,高糖+10、100、1000μmol/LMT组及高糖+TAK242组TLR4表达下调的同时,MyD88、Trif、p-IRF3、pI-κB、MCP-1、IL-1β、TNF-α的表达也降低了(均P<0.05),且MT的干预作用呈浓度依赖性。结论高糖刺激增加了系膜细胞的增殖,MT可通过TLR4信号通路抑制高糖诱导的系膜细胞增殖和炎性因子表达。
- 任莉莉杨雯雯范哲吴永贵
- 关键词：褪黑激素肾小球系膜细胞TOLL样受体4
- 巨噬细胞Bruton酪氨酸激酶基因特异性敲除减轻糖尿病小鼠肾脏损害的作用及机制被引量：2
- 2020年
- 目的探讨巨噬细胞Bruton酪氨酸激酶(Btk)基因特异性敲除对糖尿病小鼠肾脏损害的作用及机制。方法选用巨噬细胞Btk基因特异性敲除(Btk-/-)小鼠和C57BL/6N小鼠链脲菌素(STZ,50 mg/kg)造模成功后随机分为正常组、糖尿病组、Btk-/-组和Btk-/-糖尿病组。12周后测定小鼠一般指标,观察肾组织病理学改变,免疫荧光检测肾组织巨噬细胞标志物CD68表达,免疫组化检测足细胞标志物WT1和Nephrin的表达,Western印迹检测细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、IV型胶原(IV-Col)及转化生长因子β1(TGF-β1),巨噬细胞激活标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化(p)-Btk,炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路p-p38MAPK、p-JNK、p-ERK以及核因κB(NF-κB)通路p-p65、p-IκB蛋白水平变化;实时荧光定量PCR检测炎性因子IL-1β、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达。结果与糖尿病组相比,Btk-/-糖尿病组尿白蛋白明显减少,肾组织损伤明显减轻,肾脏巨噬细胞CD68表达明显减少,足细胞标志物WT1及Nephrin表达明显增加,细胞外基质FN、IV-Col及TGF-β1表达明显减少,炎性因子IL-1β、TNF-α及MCP-1表达明显降低,p-JNK、p-ERK、p-p38MAPK及p-p65、p-IκB表达明显下调(均P<0.05)。结论巨噬细胞Btk特异性敲除可能通过MAPK、NF-κB通路降低炎性因子的表达从而对糖尿病小鼠肾脏起到保护作用。
- 郑智超范哲吴永贵
- 关键词：糖尿病肾病炎症巨噬细胞
- 褪黑素对高糖刺激系膜细胞NF-κB与TGF-β/Smad3通路的影响被引量：5
- 2019年
- 目的探讨褪黑素(MT)对高糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞(MCs)核因子-κB(NF-κB)与转化生长因子-β(TGF-β)/Smad3通路的影响。方法将MCs分为甘露醇对照组、正常对照组、正常对照+MT组、高糖组、高糖+不同浓度(10、100、1000)μmol/LMT组。采用CCK-8检测MCs活性;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)试剂盒检测MCs增殖情况;激光共聚焦法检测MCsNF-κBp65核转移及Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(Fn)表达情况;ELISA法检测细胞上清液中ColⅣ、Fn含量变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测ColⅣ、FnmRNA表达水平;Westernblot法检测ColⅣ、Fn、核因子κB抑制因子(IκB)、核因子κB抑制因子磷酸化(p-IκB)、TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白表达。结果与正常对照组比较,高糖组MCs的增殖功能明显增强,同时MCsColⅣ、Fn、p-IκB/IκB、NF-κBp65、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达均明显上调(P<0.05);与高糖组比较,高糖+不同浓度MT组各项指标呈浓度依赖性降低(P<0.05)。结论高糖可以增强MCsNF-κBp65核转移及TGF-β/Smad3信号通路的激活,导致细胞外基质ColⅣ和Fn分泌增加,MT能干预高糖刺激的MCsNF-κBp65核转移,并且抑制TGF-β/Smad3信号通路的激活,降低纤维化因子的释放。
- 马玉杨雯雯范哲吴永贵夏玲玲
- 关键词：褪黑素肾小球系膜细胞纤维化
- 褪黑激素对糖尿病db/db小鼠肾脏Toll样受体4信号通路的调节作用被引量：1
- 2016年
- 目的 探讨褪黑激素(melatonin,MT)对糖尿病db/db小鼠肾脏的保护作用是否与调节Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路有关.方法 选取48只10周龄雄性db/db小鼠,按完全随机法分为db/db组、db/db+MT 50 μg/kg组、db/db+MT 100 μg/kg组和db/db+MT 200 μg/kg组,每组12只.MT腹腔注射给予.另选12只db/m小鼠作为对照组,db/m与db/db小鼠腹腔注射相同体积的磷酸盐缓冲液(PBS)/二甲亚砜(DMSO)溶液.12周末测定血糖、体重、肾重及24h尿白蛋白排泄率(UAER);光镜观察肾组织病理改变;免疫组化检测肾组织TLR4、核因子κB p65 (NF-κB p65)、巨噬细胞(ED-1阳性细胞)表达;Western印迹检测肾组织TLR4、转接信号髓分化因子88 (myeloid differentiation factor 88,MyD88)、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)、干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3,IRF-3)及NF-κB p65蛋白表达;实时定量PCR检测肾组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达.结果 12周末db/db组小鼠血糖、体重、肾重及24 h UAER明显高于db/m组(P＜021),db/db+MT(100、200 μg/kg)组肾重及db/db+MT(50、100、200 μg/kg)组24 h UAER明显低于db/db组(P＜0.01);与12周末db/m小鼠相比,db/db小鼠系膜扩张指数和肾小管-间质损伤指数评分明显增加(P＜0.01),50、100、200 μg/kg MT可显著改善肾组织病理改变(P＜0.05);免疫组化显示12周末db/db小鼠肾组织TLR4、NF-κB p65和ED-1表达明显高于db/m小鼠(P＜0.01),而db/db+MT(50、100、200 μg/kg)组小鼠肾组织TLR4、NF-κB p65和ED-1表达明显低于db/db组(P＜0.05);Western印迹显示12周末db/db组小鼠TLR4、MyD8g、TRIF、IRF-3及NF-κB p65蛋白表达明显高于db/m组(P＜0.05或P＜0.01),而db/db+MT(50、100、200 μg/kg)组小鼠TLR4、MyD88、TRIF、IRF-3及NF-κB p65蛋白表达较db/db组明显下降(P＜0.05);实时定量PCR结果表明db/db小鼠肾组织TNF-α、MCP-1 mRN
- 姜姗范哲徐兴欣邵云侠吴永贵
- 关键词：褪黑激素TOLL样受体4NF-ΚB炎症
- Btk抑制剂依鲁替尼对高糖刺激巨噬细胞炎症的抑制作用及机制
- 2020年
- 目的探讨Bruton酪氨酸激酶(Btk)抑制剂依鲁替尼(PCI-32765)对高糖诱导巨噬细胞炎症的抑制作用及机制。方法以骨髓来源巨噬细胞(BMMs)为研究对象,优化实验条件后,分为低糖组(LG)、抑制剂对照组(LG+PCI-32765)、高糖组(HG)和抑制剂组(HG+PCI-32765)。采用流式细胞术鉴定巨噬细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞及细胞上清中炎症因子——单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量及mRNA相对表达量;蛋白印记法(Western blot)检测iNOS、Btk、ERK、JNK、p38MAPK、NF-κB p65、 IκB及其磷酸化蛋白水平;激光共聚焦法检测巨噬细胞的活化及p65核转移。结果与低糖组比较,高糖组炎症因子的表达升高(P<0.05),抑制剂组较高糖组有下降(P<0.05);高糖组p-Btk相对表达量较低糖组升高(P<0.01),p-ERK、 p-JNK、 p-p38MAPK、 NF-κB p-p65和p-IκB的相对表达量亦升高(P<0.05),而PCI-32765可降低其中p-Btk、 p-ERK、 NF-κB p-p65和p-IκB的表达(P<0.05);巨噬细胞在高糖刺激下发生激活,iNOS表达升高(P<0.01),PCI-32765可减低其表达(P<0.05);高糖刺激下p65发生核转移,PCI-32765使其减少。结论 PCI-32765可以抑制高糖引起巨噬细胞激活,通过下调ERK和NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放。
- 许思敏范哲吴永贵
- 关键词：高糖NF-ΚB炎症
- 微炎症状态对腹膜透析患者铁代谢状态评估的影响
- 2015年
- 目的：分析腹膜透析患者的C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）与铁代谢相关指标间的相关性,探讨微炎症状态（microinflammatory state,MS）对腹膜透析患者铁代谢状态评估的影响。方法选择我院规律随访的持续性非卧床腹膜透析（continuous ambulatory peritoneal dialysis, CAPD）患者79例,记录患者年龄、性别、透析时间、收缩压、舒张压,计算尿素清除指数（Kt/V）,检测血红蛋白、CRP、血清铁（serum iron,SI）、转铁蛋白饱和度（transferrin saturation,TSAT）、血清铁蛋白（serum ferritin,SF）、血白蛋白、血肌酐、尿素氮。根据患者的 CRP 水平分为 A组（CRP≤8 mg/L）和B组（CRP≤8 mg/L）；并根据患者的 SF水平分为 C 组（SF〈500μg/L）和 D 组（SF≥500μg/L）,应用t检验分别比较 A 组与 B 组间年龄、性别、透析时间、收缩压、舒张压、Kt/V 值、血红蛋白、SI、TSAT、SF、血白蛋白、血肌酐、尿素氮等指标的差异,以及 C 组与 D 组间年龄、性别、透析时间、收缩压、舒张压、Kt/V值、血红蛋白、CRP、SI、TSAT、血白蛋白、血肌酐、尿素氮等指标的差异。采用Pear-son相关分析,分析患者的 CRP 水平与 SI、TSAT、SF和收缩压、舒张压水平的相关性。结果①与A组比较,B组患者的 SF水平显著升高（t=2.976,P〈0.01）,SI、TSAT、收缩压和舒张压水平降低（分别为t=3.743,P〈0.01；t=2.420,P=0.018；t=2.181,P=0.032；t=2.328,P=0.023）,血红蛋白水平（t=0.680,P=0.498）差异无统计学意义。②C 组与 D 组间比较年龄、性别、透析时间、收缩压、舒张压、Kt/V值、血红蛋白、CRP、SI、TSAT、血白蛋白、血肌酐、尿素氮差异均无统计学意义（P〉0.05）。③CRP与 SF呈正相关（r=0.460,P〈0.01）,与 SI呈负相关（r=-0.350,P=0.002）。结论腹膜透析患者的铁代谢指标受到MS的影响,需要联合检测SI、TSAT、SF以及CRP水平以正确评估患者的铁代谢状态。
- 范哲江肖吴永贵王娟齐向明
- 关键词：微炎症状态C反应蛋白腹膜透析铁代谢
