刘彧 作品数:12 被引量:12 H指数:3 供职机构: 山西农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山西省科技攻关计划项目 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
IGF1和IGF1R在小鼠第一个毛囊生长周期皮肤的表达 被引量:2 2016年 毛囊生长周期中,真皮乳头和毛基质间的基质-上皮信号调控细胞的增殖和分化。多功能细胞调控因子胰岛素样生长因子1(IGF1)是该信号路径的成员之一。第1个毛囊生长周期决定着毛囊的正常生长和发育,但IGF1在此期的作用未见报道。实时荧光定量PCR结果显示,IGF1在生长期皮肤中的相对表达量最低,在退化期表达量最高,在静止期表达量又降低。与生长初期相比,IGF1在退化期和静止期的表达量呈差异极显著(P<0.01);胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)在生长期皮肤中的相对表达量最高,在退化期表达量最低,而在静止期表达量又升高。与生长初期相比,IGF1R在退化期和静止期的表达量呈差异极显著(P<0.01)。Western印迹结果显示,IGF1和IGF1R蛋白在小鼠皮肤第1个毛囊生长周期各阶段的表达趋势分别与其mRNA的表达趋势一致;免疫组织化学结果表明,IGF1主要分布在小鼠表皮,而IGF1R免疫阳性在小鼠毛囊毛球部、内外根鞘和毛乳头均有分布。以上实验结果揭示,IGF1和IGF1R在小鼠皮肤第1个毛囊生长周期的各阶段的差异性表达,可能在毛囊生长周期各阶段的转化过程中参与了黑色素的形成。然而,IGF1和IGF1R表达趋势不一致,提示IGF1在小鼠皮肤中发挥作用时,并非只与IGF1R结合才能发挥作用。 胡帅鹏 杨姗姗 姬凯元 刘彧 刘学贤 张俊珍 范瑞文关键词:表皮 小鼠 TGFβ3对体外培养的羊驼黑色素细胞的影响 哺乳动物表皮结构中黑色素的性质、分布和数量决定毛发的颜色,TGFβ是对细胞凋亡、分化等细胞活动起调节作用的一种多功能细胞因子。TGFβ3作为黑色素细胞分泌的因子可影响黑色素的吸收,对合成黑色素起重要的调控作用,但是TGF... 刘彧关键词:细胞表型 黑色素 黑色素细胞 文献传递 TGFβ3对体外培养的羊驼黑色素细胞表型的影响 为了研究转化生长因子β3 (transforming growth factor beta3,TGFβ3)对体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞表型的影响.本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中添加不同浓度TGFβ3 (50ng... 刘彧 姬凯元 石占全 杨姗姗 范瑞文 董常生关键词:TGFΒ3 细胞表型 黑色素 黑色素细胞 羊驼 小鼠角蛋白10(K10)基因启动子的克隆及活性分析 2016年 【目的】角蛋白10(K10)是黑色素细胞中黑素体向周围角化细胞迁移的分子标记之一,在研究基因在黑色素细胞与角化细胞相互作用的功能时,可以作为特异的启动子。本研究欲筛选K10较强的启动子片段,为研究K10以及相关基因的功能提供理论依据和奠定理论基础。【方法】从小鼠尾巴提取基因组DNA,经质量鉴定后,采用PCR法扩增K10的6个不同片段(F1—F6),并将其分别亚克隆到p MD18-T载体,经测序验证是否正确;将K10的6个亚克隆片段再克隆到p GL0载体中,产生p GL0-F1—F6构建,用脂质体法转染293T细胞,转染结束后将细胞裂解,并通过双荧光素酶报告基因检测6个片段转染细胞后引起的荧光素酶活性变化,以筛选启动效果最好的启动子片段;用筛选到的K10启动子片段作为特异启动子,替换p GL0载体上的CMV强启动子,并与周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)基因进行重组,形成p GL0-F-CDK5构建,用脂质体法转染小鼠皮肤角化细胞,待转染结束后,分别进行细胞爬片、细胞裂解和细胞总RNA的提取,之后用免疫荧光化学、双荧光素酶报告基因检测法和实时荧光定量PCR法检测CDK5的表达定位、表达水平及荧光素酶活性,以检测其在角化细胞中的启动效果;用生物信息法Promoter Scan分析所得到的活性最强的K10启动子片段,发现其可能的转录因子结合位点。【结果】PCR扩增、克隆得到K10启动子的6个片段(F1—F6),片段大小分别为1 201、908、664、787、790、656 bp;质粒p GL0-F1—F6分别转染293T细胞后,通过双荧光报告检测发现长度为787bp的F4启动子活性最强;但F1—F6启动子的活性均弱于p GL0-basic中CMV的启动活性;F4序列中含有基本启动子保守区域的共同序列即TATAAAA,经Promoter Scan分析发现F4序列中含有C/EBPβ、GATA、HSF、CAP等多个转录因子的结合位点,这些位点利于K10在角化细胞中表达;p GL0-F4-CDK5转染角化细胞后,通过荧光蛋� 张俊珍 刘彧 姬凯元 杨姗姗 胡帅鹏 刘学贤 范瑞文关键词:角蛋白10 启动子 特异启动子 CDK5 小鼠 干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的siRNA及其表达质粒和应用 本发明公开了一种干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的siRNA,具有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的正义链和反义链序列,以及构建了干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的pENTR/U6 shRNA表达质... 张俊珍 董常生 范瑞文 杨珊珊 姬凯元 石占全 刘彧 胡帅鹏 刘学贤文献传递 lpa-miR-nov-66调控羊驼黑色素细胞CDK5磷酸化作用的研究 2016年 旨在研究lpa-miR-nov-66在调控羊驼黑色素细胞产生黑色素颗粒过程中对细胞周期依赖性激酶5(CDK5)磷酸化作用的影响。在体外培养的黑色素细胞中转染lpa-miR-nov-66后,采用实时定量PCR、免疫细胞化学、Western blotting、免疫共沉淀等方法检测功能性CDK5作用。结果显示:与阴性对照相比,黑色素细胞被转染lpa-miR-nov-66后,CDK5基因和蛋白表达量均下降,差异极显著(P<0.01);CDK5激活子是P35,CDK5磷酸化水平及其磷酸化底物——酪氨酸羟化酶(TH)的表达量均被上调,分别呈差异极显著(P<0.01)和差异显著(P<0.05)。结果表明:lpa-miR-nov-66过量表达可通过CDK5的激活子P35上调黑色素细胞CDK5发生磷酸化。该功能性CDK5激酶对底物TH发生磷酸化,是lpa-miR-nov-66调控黑色素生成分子机制的中间环节。 张俊珍 姬凯元 石占全 刘彧 胡帅鹏 范瑞文关键词:黑色素细胞 干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的siRNA及其表达质粒和应用 本发明公开了一种干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的siRNA,具有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的正义链和反义链序列,以及构建了干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的pENTR/U6 shRNA表达质... 范瑞文 董常生 张俊珍 杨珊珊 姬凯元 石占全 刘彧 胡帅鹏 刘学贤文献传递 lpa-miR-nov-66通过调控cAMP路径抑制α-MSH介导的羊驼黑色素生成 α-MSH和lpa-miR-nov-66在羊驼黑色素细胞产生黑色素过程中均起重要的调控作用,但二者之间的关系尚未报道.本研究在体外培养的羊驼黑色素细胞中通过转染lpa-miR-nov-66和添加α-MSH处理,用实时定量... 姬凯元 石占全 刘彧 杨姗姗 胡帅鹏 张俊珍 范瑞文关键词:Α-MSH 黑色素细胞 文献传递 IGF1和IGF1R在小鼠第一个毛囊生长周期皮肤的表达 毛囊生长周期过程中,真皮乳头和毛基质间的基质一上皮信号调控毛囊的细胞和增殖。多功能细胞调控因子~胰岛素生长因子1(IGF1)是该信号路径的成员之一。第一个毛囊生长周期决定着毛囊的正常生长和发育,但IGF1在此期的作用未见... 胡帅鹏 杨姗姗 姬凯元 刘彧 刘学贤 张俊珍 范瑞文关键词:IGF1 IGF1R 文献传递 TGF-β3对体外培养的羊驼黑色素细胞的影响 被引量:3 2015年 为了研究转化生长因子β3(Transforming growth factor beta3,TGF-β3)对体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞表型的影响。本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中添加不同浓度TGF-β3(6.25、12.5、25、50ng·mL-1),通过实时监测和检测细胞增殖、毛色相关基因小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia—associtated transcription factor,MITF)、酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)和酪氨酸酶相关蛋白2(Tyrosinase related protein 2,TYRP2)表达以及黑色素产量的变化。结果表明:(1)在羊驼皮肤黑色素细胞中添加50ng·mL-1浓度的TGF-β3后,在前30h内对细胞增殖有抑制效果,30h后对细胞增殖有明显的长时程维持细胞数量作用,但对TGF-β3添加的剂量没有依赖性;(2)添加TGF-β3后,黑色素细胞内MITF、TYR和TYRP2的表达量均被下调,而且黑色素细胞产生黑色素的量也被下调,主要以添加50ng·mL-1时下调最为显著。结果揭示,TGF-β3通过对羊驼黑色素细胞内MITF、TYR和TYRP2的表达的影响,并调控黑色素的产生,对黑色素细胞的生物学功能具有重要的影响。 刘彧 石占全 姬凯元 杨姗姗 范瑞文关键词:转化生长因子Β3 黑色素 黑色素细胞 羊驼