杨姗姗
- 作品数：23 被引量：35H指数：3
- 供职机构：山西农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省科技攻关计划项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 羊驼皮肤中可溶性鸟苷酸环化酶的表达差异
- 2013年
- 采用免疫组织化学、实时荧光定量PCR和Western blotting对可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)在棕色和白色羊驼皮肤中的表达差异进行了研究,以探讨sGC在羊驼皮肤中的作用。实时荧光定量PCR结果显示,sGC在棕色羊驼皮肤中的相对表达量较低,是其在白色羊驼皮肤中的表达量的0.16倍,且差异极显著(P<0.01);Western blot-ting结果显示,在羊驼皮肤总蛋白中含有与兔多克隆抗体发生免疫阳性反应的条带,在棕色皮肤中的反应阳性弱于白色皮肤,且差异极显著(P<0.01);免疫组织化学结果表明,sGC免疫阳性主要分布在白色羊驼皮肤毛囊的毛球上方细胞及细胞间质,而在棕色羊驼皮肤毛囊中,sGC免疫阳性主要分布在毛球底部和外根鞘细胞及细胞间质。结果提示sGC参与羊驼毛色形成。
- 张俊珍范瑞文杨姗姗石占全姬凯元董常生
- 关键词：可溶性鸟苷酸环化酶皮肤CAMP羊驼
- 内皮素-3对羊驼黑色素细胞特征及细胞内毛色基因表达的影响被引量：8
- 2013年
- 为了研究内皮素-3(Endothelin-3,EDN3)对羊驼皮肤黑色素细胞内毛色形成相关基因的影响。本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中添加不同浓度(0、10-9、10-8、10-7 mol·L-1)的EDN3,通过MTT法、紫外分光光度法、qRT-PCR和Western blotting技术分别检测黑色素细胞活力、黑色素产量、相关基因和蛋白(包括内皮素受体B(Endothelin receptor B,EDNRB)、KIT、小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associtated transcriptionfactor,MITF)和酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR))的表达情况。结果表明,在羊驼皮肤黑色素细胞添加EDN3 72h后,黑色素细胞呈双树突或三树突状,且细胞数量明显增加;在添加适当浓度10-8 mol·L-1时,细胞具有明显的增殖,细胞内EDNRB、KIT、MITF和TRY在转录水平和蛋白水平的表达量被上调,黑色素细胞产生黑色素的量也被上调,且与对照组相比,差异显著(P<0.05)。EDN3对羊驼黑色素细胞内黑色素的产生具有重要的调节作用。
- 耿建军白俊明范瑞文杨姗姗庞亚妙董常生
- 关键词：羊驼黑色素细胞
- 小鼠角蛋白10(K10)基因启动子的克隆及活性分析
- 2016年
- 【目的】角蛋白10(K10)是黑色素细胞中黑素体向周围角化细胞迁移的分子标记之一,在研究基因在黑色素细胞与角化细胞相互作用的功能时,可以作为特异的启动子。本研究欲筛选K10较强的启动子片段,为研究K10以及相关基因的功能提供理论依据和奠定理论基础。【方法】从小鼠尾巴提取基因组DNA,经质量鉴定后,采用PCR法扩增K10的6个不同片段(F1—F6),并将其分别亚克隆到p MD18-T载体,经测序验证是否正确;将K10的6个亚克隆片段再克隆到p GL0载体中,产生p GL0-F1—F6构建,用脂质体法转染293T细胞,转染结束后将细胞裂解,并通过双荧光素酶报告基因检测6个片段转染细胞后引起的荧光素酶活性变化,以筛选启动效果最好的启动子片段;用筛选到的K10启动子片段作为特异启动子,替换p GL0载体上的CMV强启动子,并与周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)基因进行重组,形成p GL0-F-CDK5构建,用脂质体法转染小鼠皮肤角化细胞,待转染结束后,分别进行细胞爬片、细胞裂解和细胞总RNA的提取,之后用免疫荧光化学、双荧光素酶报告基因检测法和实时荧光定量PCR法检测CDK5的表达定位、表达水平及荧光素酶活性,以检测其在角化细胞中的启动效果;用生物信息法Promoter Scan分析所得到的活性最强的K10启动子片段,发现其可能的转录因子结合位点。【结果】PCR扩增、克隆得到K10启动子的6个片段(F1—F6),片段大小分别为1 201、908、664、787、790、656 bp;质粒p GL0-F1—F6分别转染293T细胞后,通过双荧光报告检测发现长度为787bp的F4启动子活性最强;但F1—F6启动子的活性均弱于p GL0-basic中CMV的启动活性;F4序列中含有基本启动子保守区域的共同序列即TATAAAA,经Promoter Scan分析发现F4序列中含有C/EBPβ、GATA、HSF、CAP等多个转录因子的结合位点,这些位点利于K10在角化细胞中表达;p GL0-F4-CDK5转染角化细胞后,通过荧光蛋�
- 张俊珍刘彧姬凯元杨姗姗胡帅鹏刘学贤范瑞文
- 关键词：角蛋白10启动子特异启动子CDK5小鼠
- 黑色素细胞中过量表达lpa-miR-nov-66对TYRP2的影响被引量：1
- 2017年
- 本研究旨在探讨lpa-miR-nov-66对黑色素生成相关基因TYRP2的影响。采用细胞转染技术,在羊驼黑色素细胞中过表达lpa-miR-nov-66,运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术和免疫印迹法(western blotting)技术分别检测转染lpa-miR-nov-66后黑色素细胞内TYRP2在mRNA和蛋白水平的表达差异。RT-PCR结果显示:TYRP2的部分片段扩增,扩增片段长度为151 bp。qRT-PCR和免疫印迹(western blotting)结果显示:与对照组相比,实验组TYRP2在mRNA表达水平显著降低,降低0.44倍;蛋白表达水平也显著降低,降低0.78倍。结果表明,lpa-miR-nov-66可以影响TYRP2的表达,可能参与了动物毛色的形成过程。
- 杨姗姗范瑞文焦丁兴董常生
- 关键词：黑色素细胞
- 内皮素3在不同毛色绵羊皮肤中的差异表达被引量：3
- 2015年
- 本研究旨在探讨内皮素3在绵羊皮肤毛色中的作用。采用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学对内皮素3在黑色和白色绵羊皮肤中的表达差异进行分析。实时荧光定量PCR结果显示,内皮素3在黑色绵羊皮肤中的相对表达量较高,是其在白色绵羊皮肤中的表达量的2.89倍,且差异极显著(P<0.01);Western blotting结果显示,内皮素3在黑色绵羊皮肤总蛋白中的表达量极显著高于其在白色绵羊皮肤总蛋白中的表达量(P<0.01);免疫组织化学结果表明,内皮素3在白色绵羊皮肤毛囊的毛乳头上方、毛球底部及外根鞘呈阳性表达,而在黑色绵羊皮肤毛囊的毛球底部和部分外根鞘呈阳性表达。综上表明,内皮素3可能参与绵羊毛色形成。
- 杨姗姗白俊明范瑞文耿建军焦丁兴周英董常生
- 关键词：皮肤绵羊
- Lpa-miR-nov-66在羊驼黑色素细胞中的作用研究
- microRNAs (miRNAs)在调控哺乳动物黑色素生成和毛色方面具有重要的作用,在不同毛色羊驼皮肤miRNA的表达谱分析中,发现一个新的miRNA(命名为lpa-miR-nov-66),并呈差异表达。经预测,sol...
- 杨姗姗
- 关键词：黑色素细胞CAMPSGC黑色素
- 文献传递
- miR-380调控羊驼黑色素细胞MAPK/ERK信号通路被引量：1
- 2018年
- miR-380是不同羊驼毛色中差异表达的基因之一,但是否与黑色素生成有关未见报道。为了丰富调控黑色素生成的机制,挖掘黑色素生成路径中所涉及到的更多新的基因并揭示miR-380在黑色素细胞中的功能,本实验通过生物信息学方法预测出MAPK信号通路的成员MAP3K6是miR-380的靶基因之一。在293T细胞中共转染miR-380和MAP3K6后,与对照组相比双荧光报告酶活性下降(28.92±25.63)%(P<0.01),下降趋势明显,说明MAP3K6可能是miR-380的靶基因之一;在羊驼黑色素细胞中转染miR-380后,MAP3K6、MEK1、ERK1/2、CREB和MITF在转录水平的表达量与NC组相比具有显著下降趋势,其中CREB下降趋势尤为显著(64.20±54.30)%(P<0.01),Western印迹检测MAP3K6、p-MEK1、p-ERK1/2、CREB和MITF在蛋白质水平的表达与NC组相比下降趋势明显且p-MEK1和CREB基因下降极为显著,分别为(29.09±10.68)%(P<0.001)和(47.12±6.70)%(P<0.001),抑制组则反之。通过Masson-Fontana黑色素颗粒染色法检测miR-380抑制黑色素细胞产生黑色素颗粒,用紫外分光度法检测真黑素(eumelanin,EM)和褐黑素(pheomelanin,PM),含量结果提示EM与PM含量分别下降为(38.63±2.00)%(P<0.01),(54.10±5.73)%(P<0.001)且PM含量下降极为显著。综上所述miR-380通过靶向抑制MAP3K6等基因的表达,从而对MAPK/ERK信号通路起调控作用,最终影响黑色素生成生物学功能,此研究对哺乳动物毛色形成机制和防止皮肤受紫外辐射有重要意义。
- 杜斌刘学贤姬凯元杨姗姗刘博张俊珍范瑞文
- 关键词：丝裂原活化蛋白激酶黑色素细胞
- IGF1和IGF1R在小鼠第一个毛囊生长周期皮肤的表达被引量：2
- 2016年
- 毛囊生长周期中,真皮乳头和毛基质间的基质-上皮信号调控细胞的增殖和分化。多功能细胞调控因子胰岛素样生长因子1(IGF1)是该信号路径的成员之一。第1个毛囊生长周期决定着毛囊的正常生长和发育,但IGF1在此期的作用未见报道。实时荧光定量PCR结果显示,IGF1在生长期皮肤中的相对表达量最低,在退化期表达量最高,在静止期表达量又降低。与生长初期相比,IGF1在退化期和静止期的表达量呈差异极显著(P<0.01);胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)在生长期皮肤中的相对表达量最高,在退化期表达量最低,而在静止期表达量又升高。与生长初期相比,IGF1R在退化期和静止期的表达量呈差异极显著(P<0.01)。Western印迹结果显示,IGF1和IGF1R蛋白在小鼠皮肤第1个毛囊生长周期各阶段的表达趋势分别与其mRNA的表达趋势一致;免疫组织化学结果表明,IGF1主要分布在小鼠表皮,而IGF1R免疫阳性在小鼠毛囊毛球部、内外根鞘和毛乳头均有分布。以上实验结果揭示,IGF1和IGF1R在小鼠皮肤第1个毛囊生长周期的各阶段的差异性表达,可能在毛囊生长周期各阶段的转化过程中参与了黑色素的形成。然而,IGF1和IGF1R表达趋势不一致,提示IGF1在小鼠皮肤中发挥作用时,并非只与IGF1R结合才能发挥作用。
- 胡帅鹏杨姗姗姬凯元刘彧刘学贤张俊珍范瑞文
- 关键词：表皮小鼠
- TGFβ3对体外培养的羊驼黑色素细胞表型的影响
- 为了研究转化生长因子β3 (transforming growth factor beta3,TGFβ3)对体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞表型的影响.本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中添加不同浓度TGFβ3 (50ng...
- 刘彧姬凯元石占全杨姗姗范瑞文董常生
- 关键词：TGFΒ3细胞表型黑色素黑色素细胞羊驼
- miR-411a-3p抑制羊驼黑色素细胞黑色素的生成被引量：2
- 2017年
- microRNA-411a-3p(miR-411a-3p)在不同毛色羊驼皮肤中差异表达,提示其可能在毛色形成中起调控作用。为证明miR-411a-3p在羊驼皮毛黑色素形成中的作用,本研究通过生物信息学预测及靶基因搜索,发现胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)是miR-411a-3p的靶基因,继而构建了含Igf1r mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因载体。报告基因转染结合报告酶活性测定证明,Igf1r是miR-411a-3p的靶基因。原位杂交显示,miR-411a-3p主要在羊驼黑色素细胞胞质中表达,提示其可能在黑色素细胞中具有重要作用。qRT-PCR揭示,棕色和黑色羊驼皮肤中miR-411a-3p表达量明显低于白色羊驼。qRT-PCR联合蛋白质印迹分析显示,在羊驼黑色素细胞过表达miR-411a-3p,伴随Igf1r下调,小眼畸形相关转录因子(Mitf)依赖的毛色基因酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸酶相关蛋白-2(Tyrp2)及黑色素表达水平明显下调。上述结果提示,miR-411a-3p可通过靶向抑制Igf1r负调控羊驼黑色素黑色素合成。该结果将加深我们对羊驼毛色形成机制的认识。
- 李佳晟孙晓江胡帅鹏姬凯元刘博刘学贤杨姗姗张俊珍范瑞文
- 关键词：黑色素
