杨欣艳
- 作品数：16 被引量：48H指数：5
- 供职机构：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 北京地区猪圆环病毒3型感染的检测及基因组遗传变异分析被引量：10
- 2018年
- 旨在了解北京地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的流行现状、分子生物学特征和遗传变异规律,为PCV3的防控提供参考依据。采集北京地区规模化养殖场73份临床表现为繁殖障碍和呼吸系统疾病的组织样品,对其中的PCV3进行检测和测序。根据PCV3全基因组序列设计3对特异性引物,从患PDNS的断奶仔猪内脏组织中扩增PCV3全基因序列片段,克隆到pMD19-T载体中,经测序、拼接获得PCV3全长cDNA序列,利用DNAStar和DNAMAN生物软件对全基因组进行遗传变异分析。结果:北京地区PCV3感染率为30.1%(22/73),PCV3全基因组长2 000bp,GenBank序列登录号为MG546667,将该病毒命名为PCV3/CN/BJ-YH2016。其基因组有3个开放阅读框(ORF),其中两个ORF编码的蛋白与圆环病毒的复制相关蛋白(replication-associated protein,Rep)和衣壳蛋白(capsid protein,Cap)同源。PCV3/CN/BJ-YH2016与NCBI上30株PCV3基因组序列相似性为98.6%~99.3%,Rep蛋白氨基酸序列与美国毒株PCV3-US/MO2015(KX778720)的相似性最高(为100%),与中国毒株PCV3/CN/Guangdong-SG1/2016(MF589105)相似性最低(为95%),有16个氨基酸变异,全部集中在5-23位氨基酸。Cap蛋白氨基酸序列与美国毒株2164(KX458235)的相似性为100%,与其他毒株均有1~4个氨基酸发生变异,其中与PCV3-US/MO2015毒株相比变异位点分别位于24、26、56、100aa。以上试验结果表明,成功从患断奶仔猪多系统衰竭综合征仔猪体内克隆了PCV3全基因,并完成了序列分析,这些数据将为研究这种新型病毒——PCV3的遗传变异和流行病学特征提供分子生物学依据。
- 孙明马君乔明明刘巧荣田新生杨欣艳孙胜永陈西钊
- 关键词：全基因
- 猪瘟野毒感染抗体阻断ELISA检测方法的建立与初步评价被引量：1
- 2021年
- 以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法。猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000。用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率>40%为猪瘟野毒抗体阳性,阻断率≤40%为猪瘟野毒抗体阴性。用建立的ELISA方法检测84份血清,其中78份为免疫猪瘟疫苗的血清,6份为猪瘟病毒感染血清。结果显示,78份免疫血清均检测为猪瘟野毒抗体阴性,6份猪瘟感染血清均检测为猪瘟野毒抗体阳性。因此可初步判定该方法可用于鉴别诊断猪瘟病毒自然感染动物和C株疫苗免疫动物的血清抗体,并为临床检测猪瘟野毒抗体提供便捷、快速,精准的检测工具,对猪瘟的临床诊断、预防以及猪瘟净化工作具有非常重要的参考意义。
- 周景云刘百红刘雪微杨欣艳李宝春陈西钊
- 关键词：猪瘟净化
- 一株犬细小病毒毒株CPV-YH及其应用
- 本发明提供一株犬细小病毒毒株CPV‑YH，属于微生物技术领域。所述犬细小病毒毒株CPV‑YH的保藏号为CGMCC NO.12990。本发明还提供所述的犬细小病毒毒株CPV‑YH在制备犬细小病毒疫苗方面的用途，以及在制备犬...
- 孙明邓小雨张丽马永缨刘巧荣卢会英刘伯华杨欣艳陈西钊
- 文献传递
- 犬细小病毒CPV-YH毒株的分离鉴定及其基因组变异分析被引量：8
- 2017年
- 为分析当前犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)基因组遗传变异情况,本研究从细小病毒阳性患犬粪便中分离到一株病毒,经过病毒的形态学观察、血凝试验、动物回归试验以及分子生物学鉴定,分离的病毒确实为犬细小病毒,并命名为CPV-YH。病毒分离结果显示,病料接种A-72细胞能产生典型的细胞病变,病毒能凝集猪红细胞,在电子显微镜下呈圆形或六边形,无囊膜,直径约为20nm。动物回归试验复制出了犬细小病毒病典型症状:出血性肠炎、肝水肿、肺淤血。全基因组序列测定与分析显示,其基因组全长为4 921nt,与2011年兰州分离的CPV-LZ2分离株基因组相似性最高,为99%;VP2氨基酸进化树显示,CPV-YH分离株与2013-BJ-P27(中国)分离株和UY306(乌拉圭)分离株在同一个小的分支上。与GenBank上收录的CPV代表株的VP2基因比对,核苷酸和氨基酸相似性分别是98%~99.4%和97.1%~99.5%。以上试验结果表明,成功分离一株CPV变异株,这些数据将为CPV的流行情况和防控提供基础。
- 孙明邓小雨刘巧荣马永缨张丽卢会英刘伯华杨欣艳陈西钊
- 关键词：犬细小病毒
- 一种快速检测犬细小病毒抗体血凝抑制效价的胶体金试纸条、试剂盒及检测方法
- 本发明公开了一种快速检测犬细小病毒抗体血凝抑制效价的胶体金试纸条、试剂盒及检测方法。本发明涉及CPV治疗性单克隆抗体制备而成的试纸条，定量检测时将犬血清从1:10开始倍比稀释，与16个抗原单位的CPV标准抗原中和后，再滴...
- 孙明陈西钊申屠芬琴马永缨杨欣艳
- 某规模化猪场伪狂犬病的诊断被引量：1
- 2016年
- 河南平顶山某猪场母猪出现较严重的流产和产死胎现象，且50日龄～70日龄仔猪出现神经症状，根据临床表现初步诊断为伪狂犬病。为排除猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟，进行了实验室诊断。应用ELISA方法检测发病保育猪及母猪血清的伪狂犬病病毒野毒株gE抗体，并对发病仔猪病料进行了伪狂犬病病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRsV）和猪瘟病毒（CSFV）的实时荧光定量PCR检测。结果显示，伪狂犬病病毒野毒抗体阳性，实时荧光定量PCR检测确定仔猪病料中PRV核酸阳性，PRRSV和CSFV核酸阴性。结合临床症状及实验室检测，确诊该猪场发生的是猪伪狂犬病。
- 李春禄马文才乔明明杨欣艳张彦明
- 关键词：猪伪狂犬病酶联免疫吸附试验实时荧光定量PCR
- 非洲猪瘟病毒P30蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：7
- 2021年
- 为建立快速检测猪血清中非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的间接ELISA方法,本研究以ASFV Pig/HLJ/2018株基因组为模板优化合成CP204L基因(1 bp~549 bp),构建pFastbac1-P30-His重组表达载体,利用杆状病毒-昆虫细胞真核表达系统表达ASFV重组P30蛋白(rP30),以Ni亲和纯化后的rP30作为包被抗原,经过一系列条件优化,建立了一种快速检测ASFV P30抗体的血清学方法。结果显示,胞外分泌的rP30约为30 ku,western blot鉴定结果显示其具有良好的反应原性;经优化确定了ELISA最佳反应条件:包被量为0.4μg/mL,待检血清稀释倍数为1.25,血清反应时间为30 min,兔抗猪IgG-HRP稀释度为1.10000。利用该方法同时检测猪临床常见病毒阳性血清,结果显示建立的ASFV抗体间接ELISA方法仅对ASFV感染血清检测为阳性,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒和猪口蹄疫病毒阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性;将ASFV感染血清2倍倍比稀释后,利用本实验建立的ASFV抗体间接ELISA方法、ID.VET(P32)试剂盒和INGENASA(P72)试剂盒同时检测,结果显示本实验建立的方法检测灵敏度为1.128,与INGENANA(P72)试剂盒相同,低于ID.VET(P32)试剂盒(1.1024);批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,重复性良好。利用该方法与ID.VET试剂盒同时对383份临床样品进行检测,二者符合率为98.9%。本研究建立的方法可为ASF的监测和防控提供技术支持。
- 徐黎晖迟立超王雨佳李宝春梁臻妮周景云杨欣艳陈西钊
- 关键词：非洲猪瘟病毒间接ELISA
- 猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条方法建立及性能评价被引量：4
- 2020年
- 基于镧系元素Eu微球标记技术建立了一种猪瘟病毒抗体检测的免疫层析方法。通过对反应体系中包被浓度、复溶浓度以及反应时间等因素进行优化,确定最适的反应条件,建立检测方法,然后通过从敏感性、特异性、重复性、临床评价等方面对其进行性能评价。对反应体系进行优化,最终确定包被浓度为0.1 mg/mL,复溶浓度为6倍稀释,检测时间为15 min。通过对试纸条的性能评价可以得出,猪瘟病毒抗体荧光检测试纸条的敏感性为猪瘟阳性血清国家参考品倍比稀释至1∶128倍仍可以检测到;对常见的猪繁殖与呼吸综合征、猪I型疱疹病毒、猪口蹄疫、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻、牛病毒性腹泻病毒、羊边界病毒等抗体阳性血清无交叉反应;批内和批内变异系数均小于10%;经临床评价,与商品化的猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒相比阳性符合率为90%,阴性符合率为100%,总符合率为97.7%;与荧光抗体中和试验(FVNT)的阴性符合率为100%,阳性符合率为93%,总符合率为98.5%。综合评定认为本研究建立的猪瘟病毒抗体纳米荧光检测方法,符合各项性能参数,可以快速、经济、方便地对猪个体及群体进行猪瘟病毒抗体检测评估,可广泛应用于猪场管理中。
- 吴昊星刘百红刘雪微周景云马永缨杨欣艳李宝春陈西钊
- 关键词：猪瘟病毒
- 猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒研究
- 猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的猪高度接触性致死性传染病，给世界养猪业造成巨大威胁和经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的法定传染病之一。
本文将猪瘟病毒E2基因的起始的23个密码子中...
- 乔明明申屠芬琴马永缨杨欣艳杨璐孙明
- 关键词：猪瘟病毒病毒感染免疫学检验基因表达ELISA检测试剂盒
- 文献传递
- 一种快速检测犬细小病毒抗体血凝抑制效价的胶体金试纸条、试剂盒及检测方法
- 本发明公开了一种快速检测犬细小病毒抗体血凝抑制效价的胶体金试纸条、试剂盒及检测方法。本发明涉及CPV治疗性单克隆抗体制备而成的试纸条，定量检测时将犬血清从1:10开始倍比稀释，与16个抗原单位的CPV标准抗原中和后，再滴...
- 孙明陈西钊申屠芬琴马永缨杨欣艳
- 文献传递
