喻飞
- 作品数：23 被引量：14H指数：2
- 供职机构：上海海洋大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 一种草金鱼腹鳍细胞系的构建方法
- 本发明涉及一种草金鱼腹鳍细胞系及其构建方法，针对草金鱼腹鳍组织细胞的特征，采用胰蛋白酶、EDTA、透明质酸酶对组织块进行消化，将消化后的组织块移植到培养瓶中，加入专用增殖培养液进行原代培养，继而构成功构建草金鱼腹鳍细胞系...
- 王浩吕利群许丹喻文娟喻飞孔善云黄美秀
- 文献传递
- 表达草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP56的重组杆状病毒及应用
- 本发明涉及生物技术领域，特别涉及表达草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP56的重组杆状病毒及应用。重组杆状病毒为构建pFast‑HTA‑VP56重组质粒并转化至杆状病毒中所产生。本发明通过构建pFast‑HTA‑VP56质粒，利用...
- 吕利群王浩喻飞李婉娟孙皓盛佳璐
- 文献传递
- 草鱼呼肠孤病毒NS31蛋白在昆虫细胞中表达及互作多肽筛选被引量：1
- 2021年
- 草鱼呼肠孤病毒(Grasscarpreovirus,GCRV)是引发病毒性草鱼出血病的主要病原。前期研究证实GCRV-S7基因片段编码NS31蛋白是GCRV的非结构蛋白,在病毒感染的中后期表达。为深入开展NS31的具体生物学功能,本研究从GCRV-JX01株病毒基因组中扩增NS31,克隆至pFastBacHTA载体;利用杆状病毒Bac-to-Bac系统成功表达携带his标签的重组蛋白his-NS31;Western-Blot和IFA实验表明重组杆状病毒能够感染昆虫细胞(Sf9)表达NS31,进一步通过his-Ni2+柱纯化NS31,SDS-PAGE鉴定蛋白约为30KD。运用噬菌体展示技术筛选噬菌体12肽库,研究NS31特异性结合多肽。挑取30个克隆进行DNA序列测定,结果表明NS31主要和2种多肽分子相互作用。进一步结合生物信息学分析表明上述多肽与草鱼基因组中6个基因具有同源性,提示其可能是NS31互作蛋白。本研究为深入探索NS31在病毒感染过程中的生物学功能奠定了重要基础。
- 万偲佳喻飞吕利群
- 关键词：噬菌体展示技术蛋白质相互作用
- 鲫细菌性疾病控制中甲砜霉素药代-药效动力学联合参数的研究被引量：3
- 2015年
- 采用高效液相色谱法,研究了甲砜霉素对致病性嗜水气单胞菌AH10（Aeromonas hydrophila）体外药效学参数及口灌不同剂量的甲砜霉素在鲫体内药代动力学特征,并制定甲砜霉素控制鲫细菌性败血症防耐药突变用药方案。研究结果表明,甲砜霉素对AH10的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentrations,MIC）为1.0μg/mL;最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentrations,MBC）为2.0μg/mL;防细菌耐药突变浓度（mutant prevention concentration,MPC）为8.0μg/mL;防耐药突变选择窗（mutant selection window,MSW）为1.0~8.0μg/mL。在试验水温（22±1）℃条件下,对鲫口灌20、30、40 mg/kg体重剂量的甲砜霉素,24 h内血药浓度大于MPC的维持时间分别为3、8、22 h;AUC24（area under the drug concentration-time curve）/MIC分别为89.539、174.560、251.682;Cmax（maximum concentration in the interval）/MIC分别为14.92、17.69、24.22;。综合血药浓度维持MPC以上的时间超过24 h、AUC24/MIC〉125或Cmax/MIC〉10等指标,建议甲砜霉素控制鲫细菌性败血症的防耐药用药方案为：剂量40 mg/kg,一日一次。根据肌肉内甲砜霉素的药动学方程,药残达到国家限量标准所需时间约为15 d,所以在本试验水温（22±1）℃下,建议休药期不低于15 d。
- 李梦影喻飞张国亮孙朋辉胡鲲杨先乐吕利群
- 关键词：甲砜霉素药效动力学防耐药突变浓度嗜水气单胞菌
- 表达草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP55的重组杆状病毒及应用
- 本发明涉及生物技术领域，特别涉及表达草鱼呼肠孤病毒刺突蛋白VP55的重组杆状病毒及应用。重组杆状病毒为构建pFast‑HTA‑VP55重组质粒并转化至杆状病毒中所产生。本发明通过构建pFast‑HTA‑VP55质粒，利用...
- 王浩吕利群喻飞刘玮莎王龙龙
- 文献传递
- 利用原核及真核表达系统体外表达草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒外突VP56蛋白的研究被引量：2
- 2018年
- 草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒是当前引起我国草鱼出血病的主要流行毒株,VP56是其外层衣壳上的唯一突起蛋白并有可能在病毒入侵阶段发挥核心作用,但该蛋白的具体功能尚不清楚。为了探讨VP56的生物学功能,分别利用大肠杆菌原核表达系统和杆状病毒真核表达系统研究了VP56的体外表达特性。首先从GCRVJX02W株的细胞感染混合物中抽提总RNA,并通过RT-PCR方法获得目的基因VP56,分别克隆至pGEX-4T-3及pFastBacHTA载体上,将质粒pGEX-4T-3-VP56转化至BL21(DE3),经IPTG诱导后,成功表达融合蛋白GST-VP56,大小为83ku,以包涵体形式存在;蛋白经纯化后免疫老鼠,制备了VP56的多克隆抗体,可以和rVP56产生特异性免疫结合。将pFastBacHTA-VP56转化至DH10Bac,成功转座后,提取重组杆粒DNA并鉴定且测序正确后转染SF9昆虫细胞。结果表明,自转染96h起,转染杆粒的细胞生长停滞,不断裂解。Westernblot结果显示,细胞表达重组蛋白His-VP56,大小约为62ku,为可溶蛋白。本研究利用原核表达系统和真核表达系统体外表达了VP56蛋白,制备了抗VP56多克隆抗体,为深入研究VP56蛋白在病毒入侵时的生物学功能奠定了基础。
- 盛佳璐宗乾坤喻飞王浩吕利群
- 关键词：真核表达
- 草鱼呼肠孤病毒S7基因突变株及其应用
- 本发明涉及一种草鱼呼肠孤病毒S7基因突变株及其应用，该突变株的保藏号为CCTCC NO：V201515。研究发现该突变株感染CIK细胞后不产生明显的细胞病变效应，并能在CIK细胞中复制扩增，序列分析表明该突变株相比于GC...
- 王浩吕利群宗乾坤许丹喻飞鲁建飞夏思瑶
- 文献传递
- 草鱼Fibulin-4蛋白与草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白相互作用的研究被引量：2
- 2018年
- 草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）是当前引起我国草鱼出血病的主要病原,其外衣壳蛋白通常在病毒的组织嗜性和细胞嗜性上发挥重要作用。本研究利用共定位、Dot-Blot技术和His-Pull Down技术,验证了草鱼Fibulin-4蛋白与草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白的相互作用。将pDsRed1N1-VP7,pDsRed1N1-VP56分别与pEGFP-Fibulin-4共转染草鱼性腺细胞GCO。结果显示,病毒蛋白VP7,VP56和草鱼蛋白Fibulin-4均分布于细胞质中,两种蛋白都与Fibulin-4有部分重叠。应用Dot-Blot Overlay技术,将纯化获得的GST与GST-Fibulin-4蛋白倍比稀释杂交到PVDF膜上,经过His-VP7,His-VP56蛋白的孵育,结果表明随着杂交的蛋白量从低到高,蛋白信号由弱到强,His-VP7与His-VP56都能够吸附于GST-Fibulin-4蛋白上并发生相互作用,而不能吸附GST蛋白。利用Pull Down技术,裂解细胞表达的GFP蛋白与GFP-Fibulin-4蛋白,结合His-VP7,His-VP56的HisPur Cobalt Resin,在Elution中均能检测到GFP-Fibulin-4蛋白质,而检测不到对照蛋白质GFP,进一步证实了VP7,VP56与Fibulin-4蛋白之间的相互作用。
- 张敏利盛佳璐喻飞王浩吕利群
- 关键词：亚细胞定位PULLDOWN
- 草鱼呼肠孤病毒三顺反子基因组片段的鉴定及其编码蛋白NS31的功能研究
- 水生呼肠孤病毒（Aquareovirusgenus，Reoviridae）是危害鱼类健康的重要病原之一，其中草鱼呼肠孤病毒（AquqreovirusC/Grasscarpreovirus，GCRV）是草鱼（Ctenoph...
- 喻飞
- 关键词：草鱼呼肠孤病毒转录活化热休克蛋白
- 银鲫鱼背鳍细胞系
- 本发明涉及银鲫鱼背鳍细胞系，所述的银鲫鱼背鳍细胞系银鲫鱼的背鳍经过原代培养、传代培养得到的，所用的细胞培养液为M199培养基制得。本发明还提供该银鲫鱼背鳍细胞系的构建方法和应用。其优点表现在：本发明建立的银鲫鱼背鳍细胞系...
- 王浩吕利群黄美秀许丹喻文娟孔善云喻飞夏思瑶
