宋建成
- 作品数：8 被引量：33H指数：4
- 供职机构：烟台大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小麦TILLING突变体检测中基因组DNA提取方法的优化被引量：8
- 2017年
- 为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。
- 徐艳徐继法陈磊赵吉强FU ZeyuJAMESON Paula E宋建成
- 关键词：小麦TILLING基因组DNA
- 芹菜不同器官、品种CELⅠ核酸酶提取的比较
- 2015年
- 随着TILLING技术的发展,发挥关键作用的芹菜CELⅠ核酸酶也得到了越来越广泛的应用。鉴于其活性直接影响突变体检测的效果,而芹菜粗提物中CELⅠ核酸酶的含量和活性因提取组织及提取程序不同而有较大变化,所以本研究分析了芹菜不同器官、品种等因素对CELⅠ核酸酶粗提物提取量的影响,并用只含有1个碱基差异的2个目的DNA片段形成的杂交链为底物对其活性进行了鉴定。结果表明:芹菜不同器官和品种间的CELⅠ核酸酶提取量存在较大差异。不同器官的榨汁率和提取量,以茎的出汁率最高,而叶片中的提取量显著高于根和茎中的提取量;在本研究所用的3个品种中,以山东地方品种马家沟芹的提取量最高,山芹次之,西芹的提取量最低;CELⅠ核酸酶的活性鉴定表明,CELⅠ核酸酶粗提物能有效切割DNA双链中的错配碱基。
- 史艳慧赵吉强陈磊李丽霞徐艳张园园郭善利宋建成
- 关键词：芹菜器官TILLING
- 玉米成熟子粒RNA提取方法的改良与优化
- 2015年
- 玉米成熟子粒含有较多的多糖、蛋白质和脂类,传统的RNA提取方法难以提取到高质量的RNA。以授粉后28 d灌浆后期的玉米子粒为试材,以授粉后7 d的玉米子粒为对照,对目前国内外常用的Trizol法、Biozol法、RNAiso Plus法、三种硅胶柱商业试剂盒总RNA提取方法以及本研究建立的改良提取方法进行比较。结果表明,以授粉后7 d的玉米子粒为材料时,各种方法都能获得较好提取效果;以灌浆后期接近成熟玉米子粒为试材时,采用本研究改良或新建立的提取法,可以大幅降低提取成本,快速提取高质量和高得率的RNA。
- 张园园赵吉强姜丽君史艳慧陈磊郭善利宋建成Paula E Jameson
- 关键词：玉米子粒RNA提取
- 玉米CKX基因家族生物信息学及表达模式分析被引量：4
- 2022年
- 细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(cytokinin oxidase/dehydrogenase,CKX)通过降解细胞分裂素,调控植物体内细胞分裂素平衡,进而调控植物的生长发育。本研究对玉米基因组中CKX基因(ZmCKX)家族成员进行了鉴定分析,并基于转录组数据分析了ZmCKX基因在正常条件和胁迫条件下多个组织中的表达情况。结果表明:在玉米基因组中鉴定出13个可分为5个亚组的CKX基因家族成员,分布在7条染色体上,CDS长度在1.5~1.7 kb,氨基酸长度在519~582 aa,理论等电点在5.5~8.5,存在4处串联重复;ZmCKX4b基因进化时间最早,ZmCKX9基因进化时间最晚;转录组数据分析表明:13个ZmCKX基因的表达模式存在明显的差异,其中ZmCKX10基因在所有时间点的各个组织中都有比较高的表达量,ZmCKX7~ZmCKX93个基因的表达具有组织特异性。ZmCKX基因在籽粒发育过程和胁迫条件下,呈现多种表达模式。本研究可为深入研究玉米CKX基因家族生物学功能提供一定的理论基础。
- 李正男陈磊张立培宋建成
- 关键词：玉米胁迫籽粒发育
- 干旱、盐胁迫对济麦22生长及CKX4基因表达的影响
- 2021年
- 为探究逆境胁迫对小麦生长发育以及CKX4基因表达情况的影响,以济麦22为试验材料,测定不同浓度PEG干旱胁迫和NaCl盐胁迫下济麦22的生长量、叶绿素含量、根细胞活力、叶绿素荧光参数以及TaCKX4基因表达量。结果表明:胁迫处理后的各生理指标与对照相比差异具有统计学意义,其中40%PEG胁迫下济麦22幼苗长势最差;济麦22 PSⅡ的实际量子产量(Y(Ⅱ))和光化学淬灭系数(qp)均表现为随着处理溶液浓度增加而降低的趋势;重度干旱和盐胁迫下TaCKX4基因表达量各自组间的差异均具有统计学意义,分别在0.5和1 h转录达到最高水平,基因均上调5倍左右,表明小麦受胁迫24h内CKX4基因表达上调,促进细胞分裂素降解以保证植株正常生长发育。本研究通过测定干旱和盐胁迫下济麦22的生长发育以及CKX4基因的表达情况,发现其外在表型、内在生理和CKX4基因表达均受到显著影响,验证了CKX4基因通过上调表达量抑制细胞分裂素累积,促进根的生长发育和对养分的吸收而适应逆境,可对后续研究耐逆性强的优质小麦提供数据和理论支持。
- 郭丁预尚娟花张立培陈磊赵婧宋建成赵吉强
- 关键词：PEG胁迫叶绿素荧光参数
- 干旱胁迫对不同小麦品种苗期抗旱生理指标的影响被引量：17
- 2020年
- 以洛旱6号、洛旱2号、烟农1212、烟农19、连9916、石麦18小麦品种为材料,采用35%的PEG-6000模拟干旱胁迫,探究干旱胁迫对不同小麦品种幼苗叶片相对含水量、水势、叶绿素含量、膜透性、可溶性蛋白含量和叶绿素荧光参数的影响,以期为小麦抗旱育种的筛选工作提供理论依据.结果表明:PEG胁迫下,6个品种中洛旱6号叶片相对含水量最高,叶绿素含量较对照组下降幅度最小;洛旱2号相对电导率较对照组升高幅度最小,相对其他品种水势较对照组降幅最小,可溶性蛋白含量最高,较对照呈极显著提高.6个品种幼苗叶片Fv/Fm值、光化学荧光淬灭系数(qp)和PSⅡ的实际光化学效率与对照相比均呈下降的趋势,其中洛旱6号和洛旱2号相对其他4个品种降幅最小.对6个小麦品种的各项抗旱生理指标进行了主成分分析,按照方差累计贡献率提取了2个主成分.通过计算各品种的主成分综合得分,并采用质心聚类的方法进行系统聚类,将6个小麦品种按抗旱能力分为3类.结果表明,6个供试小麦品种抗旱能力有所差别.在PEG胁迫下,洛旱6号的生长受抑制程度最小,光能利用率最高,膜透性受到的影响相对其他品种也较小,表现出对干旱胁迫较强的耐受能力.
- 尹启琳郭丁预姜倩倩张立培陈磊赵婧宋建成赵吉强
- 关键词：小麦干旱胁迫抗旱生理指标主成分分析
- CRISPR/Cas9系统及其在单子叶植物中的应用
- 2017年
- CRISPR/Cas9系统作为第3代人工核酸内切酶,已经成为继锌指核酸内切酶(zinc finger endonuclease,简称ZFNs)和类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,简称TALENs)之后的新型高效定点的基因组编辑新技术。作为新型的基因编辑技术,CRISPR/Cas9系统拥有突变效率高、构建简单、花费成本低等特点,自其出现之后,受到广泛关注且得到迅速发展,给植物基因组研究和遗传育种带来革命性的变革。目前,该技术已经在多种单子叶植物中实现了基因组定点精确编辑,包括水稻(Oryza sativa)、小麦(Triticum aestivum)、玉米(Zea mays)等单子叶植物。
- 徐继法徐艳赵吉强陈磊郭善利宋建成
- 关键词：单子叶植物植物基因组遗传育种
- 多年生黑麦草原生质体制备及瞬时表达体系的建立被引量：4
- 2021年
- 本研究以10~12 d苗龄的多年生黑麦草品种NUI叶片为材料,通过正交实验确定原生质体分离的最佳条件。结果表明,在甘露醇浓度为0.5 mol/L、纤维素酶R10浓度为1%、离析酶R10浓度为0.3%的酶解液中,28℃黑暗条件下酶解4 h后分离的原生质体最为理想,原生质体浓度达到4.69×10^(6)个/mL,活性达到88.59%。将能表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组质粒pAN580利用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导法转化原生质体后,观察到强烈的绿色荧光信号,表明分离的黑麦草原生质体可以用作基因瞬时表达体系。遗传转化正交实验结果表明,在原生质体浓度为2×10^(5)个/mL、质粒浓度为1000 ng/mL、转化时间为25 min,PEG-4000浓度为40%的条件下,转化效率可达67.51%,可以满足对CRISPR/Cas9基因编辑载体进行编辑效率快速检测的要求。综上所述,本研究建立了一套快速、高效的原生质体瞬时表达体系可为多年生黑麦草基因编辑载体的快速鉴定验证及功能基因组研究提供有效的工具,不仅为深入开展多年生黑麦草的功能基因组学研究提供了基础,也为其在种质创新领域和分子育种层面的研究能利用基因工程的方法提供了依据。
- 姜倩倩陈磊李正男尹启琳张立培赵吉强宋建成
- 关键词：原生质体
