徐华林
- 作品数：17 被引量：29H指数：4
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- microRNA-7对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞组成的影响被引量：5
- 2015年
- 目的:研究miR-7(MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法:利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋巴结细胞总数,以及HE染色的病理学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中αβT淋巴细胞亚群(CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞)以及CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化相关分子CD69、CD62L和功能相关因子IFN-γ表达的情况。结果:与野生型(Wild type,WT)小鼠相比,miR-7KD小鼠肠系膜淋巴结大小、重量指数和淋巴结细胞总数均显著增高(P<0.05),且HE染色显示MLNs有病理性改变;肠系膜淋巴结中αβCD3+T细胞比例增加显著,其中以CD4+T细胞比例变化最为明显(P<0.05),而CD19+B淋巴细胞比例明显下调(P<0.05),但各亚群细胞总数均明显增加(P<0.05);最后,CD4+T细胞和CD8+T细胞中的CD62L+细胞的比例均显著下调(P<0.05),而CD69+细胞和IFN-γ+细胞比例均显著上调(P<0.05)。结论:miR-7敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中αβT淋巴细胞的组成比例,提示其对肠系膜淋巴结中淋巴细胞的组成和功能具有重要的调控作用。
- 赵娟娟朱顺飞徐华林胡燕郭萌萌陶弋婧周涯秦娜琳郑静徐林
- 关键词：肠系膜淋巴结ΑΒT细胞
- MicroRNA-7对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞组成的影响
- 目的：研究miR-7 (MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法：利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋...
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- 关键词：肠系膜淋巴结ΑΒT细胞
- TTF-1启动子调控miR-7表达对人肺癌95D细胞体外凋亡的影响被引量：3
- 2017年
- 目的观察甲状腺转录因子-1(TTF-1)启动子调控miR-7表达对人肺癌细胞体外凋亡的影响,并探讨其意义。方法将前期构建的TTF-1启动子调控miR-7真核表达载体(命名为p-T-miR-7)与对照载体p-cont分别体外瞬时转染人肺癌95D细胞,采用FCM法检测95D细胞凋亡比例;TUNEL法检测95D细胞凋亡情况;Western blot检测各组中磷酸化Caspase3和磷酸化Caspase9的蛋白的表达;共聚焦显微技术检测miR-7靶分子CGGBP1和EGFR蛋白的表达;最后,采用Western blot检测各组中磷酸化Akt和Erk蛋白的表达。结果体外转染48h后,与p-cont转染组相比,转染p-T-miR-7组细胞凋亡比例明显增加(P<0.05);磷酸化Caspase3和磷酸化Caspase9蛋白水平均显著增加(P<0.05),同时EGFR和CGGBP1蛋白表达均明显降低,且细胞中磷酸化Akt和Erk蛋白水平亦显著降低(P<0.05)。结论 TTF-1启动子调控miR-7表达可导致人肺癌细胞的凋亡。这为后续基于miR-7的人肺癌基因靶向治疗策略的开发提供了前期实验依据。
- 卢佳陈超廖珍媛崔盼盼雷良玉徐华林田丹郑静徐林
- 关键词：启动子肺癌
- 微小RNA-125与乳腺癌关系的研究进展
- 2015年
- 微RNA-125（microRNA-125，miR125）是近年来新发现的miRNAs家族成员，其基因定位于染色体11q24上，与线虫lin-4具有较高的同源性。现有的研究显示miR125家族包括三个成员，分别是miR-125a，miR-125b-1和miR-125b-2，这三个成员间序列存在高度保守性，在功能上与包括内皮细胞在内的多种细胞的发育密切相关。
- 雷良玉赵娟娟卢佳郑文徐华林郭萌萌陶弋婧徐林
- 关键词：乳腺癌
- miRNA-126基因敲减小鼠脾脏中免疫细胞的组成变化被引量：4
- 2016年
- 目的:观察miRNA-126基因敲减(Knock down,KD)小鼠脾脏中免疫细胞组成比例变化并探讨其意义。方法:Realtime PCR探针法检测miR-126KD小鼠脾脏中miR-126表达水平,计算脾脏总细胞数;HE染色观察脾脏组织的病理学变化;流式细胞术(FACS)分别检测脾脏中DCs细胞、巨噬细胞、γδT细胞、NKT细胞,CD3^+T细胞和其亚群以及CD19^+B细胞的比例并计算细胞绝对数;免疫印迹法(Western blot,WB)检测脾脏组织中磷酸化NF-κB和磷酸化Akt的表达水平。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD脾组织中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),细胞总数明显增加(P<0.05),且发生明显病理学改变;固有免疫细胞中NK细胞的比例和细胞绝对数显著增加(P<0.05),但巨噬细胞的比例显著降低(P<0.05);适应性免疫细胞中CD3^+T细胞和CD4^+T细胞的比例和绝对细胞数都显著增加(P<0.05),而CD19^+B细胞仅绝对数显著增加(P<0.05);最后miRNA-126KD小鼠脾脏组织的磷酸化NF-κB和磷酸化Akt水平明显增加(P<0.05)。结论:miRNA-126敲减小鼠脾脏中各免疫细胞亚群的组成发生明显改变,可能与NF-κB和Akt信号通路传递变化有关,为后续探讨miR-126在机体免疫应答中的作用提供了前期实验基础。
- 雷良玉胡燕郭萌萌卢佳郑文徐华林陈超徐林
- 关键词：免疫细胞
- miR-7对小鼠CD4~+T细胞基因表达谱的影响
- 目的 :通过cDNA基因芯片,筛查micro RNA-7(mi R-7)与脾脏CD4+CD62L+nave T细胞功能有关的差异表达的基因和信号通路,并初步探讨mi R-7调节CD4+T细胞的作用的靶分子。方法 :利用...
- 赵娟娟陶弋婧徐华林郭萌萌周涯徐林
- 关键词：基因表达谱信号转导通路
- 文献传递
- 微小RNA-7敲减对小鼠脾脏中T淋巴细胞体外功能的影响被引量：4
- 2016年
- 观察微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(Knock down,KD)对小鼠脾脏T淋巴细胞体外功能的影响并探讨其意义。常规分离野生型(wild type,WT)小鼠脾脏T淋巴细胞,经CD3和CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测不同时间点(0h;24h;48h)细胞中miR-7的表达变化;进一步用Con A、CD3和CD28抗体刺激miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞,CCK8检测细胞增殖率;Real-time PCR检测miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10表达的变化;FACS检测CD4+T和CD8+T细胞的数量变化及CD4+T细胞膜分子CD44、CD62L和IL-4、IFN-γ的表达变化。结果显示,WT小鼠脾脏T淋巴细胞活化后,miR-7的表达水平显著上调(P<0.05);与WT小鼠相比,在Con A、CD3和CD28抗体作用下miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞增殖明显增加(P<0.05);miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α和IFN-γ水平均明显上调(P<0.05),而IL-10表达显著下调(P<0.05);FACS检测结果显示CD4+T细胞比例明显上调(P<0.05),而CD8+T细胞的比例变化不显著(P>0.05);CD4+T细胞膜分子CD62L水平显著下降,CD69及IL-4、IFN-γ的表达水平均显著上调(P<0.05)。结果表明,miR-7敲减以后可显著影响小鼠脾脏T淋巴细胞的功能,本实验为后续深入探讨其在T淋巴细胞功能调控中的作用提供实验依据。
- 郑文赵娟娟朱顺飞徐华林雷良玉卢佳贾力褚风云王海嵘徐林
- 关键词：CD4+T细胞
- 基于SYBR Green Ⅰ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7方法的建立被引量：5
- 2015年
- 目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引物;观察不同退火温度和不同引物浓度对扩增miR-7的Ct值影响,选择最优的退火温度和引物浓度;测定不同稀释度RNA下Real-time PCR扩增miR-7的效果;并利用该方法检测小鼠4个器官中miR-7的灵敏性和特异性。结果在基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR检测法中,miR-7扩增的最优退火温度为60℃,最优引物浓度为10μmol/L;在不同稀释度RNA下miR-7的Ct值线性关系较好,且在模板RNA低于100 pg的条件下,该方法仍可有效检测miR-7分子;最后有效检测出小鼠4个不同器官中miR-7的差异性表达。结论成功建立基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7的方法,可为后续研究miR-7的生物学功能提供了重要工作基础。
- 赵娟娟徐华林陶弋婧郭萌萌周涯陈超秦娜琳郑静田丹徐林
- 关键词：SYBR
- MicroRNA-7在CD4^+T细胞体外活化中的表达及意义被引量：1
- 2016年
- 目的:观察microRNA-7(miR-7)在体外活化CD4^+T细胞中表达的变化,初步探讨其意义。方法:采用免疫磁珠分选法(MACS)获得FVB小鼠脾脏中CD4^+CD62L^+T细胞,经抗CD3/CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测miR-7表达水平,FACS检测活化膜分子CD69的表达变化;进一步观察刺激不同时间点CD4+T细胞中miR-7表达的变化;观察ERK抑制剂PD98059处理后,CD4^+T细胞活化下miR-7表达的变化,同时CCK8法检测细胞增殖变化,FACS检测CD69和CD62L分子的表达变化;最后,Real-time PCR检测各组细胞中IL-6、IL-10和IFN-γ等细胞因子表达水平变化。结果:与对照组相比,抗CD3/CD28抗体刺激后,CD4^+CD62L^+T细胞中miR-7表达水平显著上调,CD69分子的表达明显增加(P<0.05);与刺激0 h组和24 h组相比,48 h组和72 h组miR-7的表达水平显著上调(P<0.05);PD98059处理组中,CD4^+T细胞的miR-7表达水平显著下降(P<0.05),同时,活化膜分子CD69的表达比例明显降低(P<0.05);最后,细胞表达IL-6、IL-10和IFN-γ的水平均显著减弱(P<0.05)。结论:miR-7在活化的CD4+T细胞中明显上调,并与ERK信号相关,为后续探讨miR-7在CD4^+T细胞功能中的作用提供了前期实验基础。
- 徐华林赵娟娟崔盼盼郭萌萌陶弋婧陈超徐林
- 关键词：CD4+T细胞细胞因子
- 内毒素耐受状态下脾脏CD4^+Foxp3^+调节性T细胞的比例变化及意义被引量：3
- 2016年
- 以5mg/kg浓度LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,观察注射72h及8d后脾脏大小、重量及总细胞数;HE染色观察脾脏病理学变化;FACS检测CD4+Foxp3+Treg细胞比例并计算其细胞总数;同时检测CD4+Foxp3+Treg细胞功能相关膜分子CTLA-4的相对表达;Ki-67染色法检测CD4+Foxp3+Treg细胞的增殖情况;PI染色法检测CD4+Foxp3+Treg细胞的凋亡情况;Real-time PCR技术检测脾脏中TGF-β的相对表达。结果发现与对照组相比,LPS注射72h后脾脏大小、重量及细胞总数显著增加(P<0.05),且发生病理学改变;脾脏中CD4+Foxp3+Treg细胞比例和数量显著减少(P<0.05),CTLA-4表达水平显著降低(P<0.05);同时,增殖比例明显减少,凋亡比例增加(P<0.05);最后,脾脏中TGF-β的相对表达水平显著减少。LPS注射8d后脾脏大小、重量及细胞总数均与对照组相比无差异(P>0.05),且脾脏组织结构未见改变;脾脏中CD4+Foxp3+Treg细胞比例及数量仍减少(P<0.05),而其表达CTLA-4水平增加(P<0.05),且凋亡和增殖比例无明显差异(P>0.05);最后,脾脏组织中TGF-β的相比表达显著增加。结果表明,内毒素耐受状态下,CD4+Foxp3+Treg细胞比例发生明显改变,可能与细胞凋亡和增殖变化有关。
- 卢佳陶弋婧贾力赵娟娟郭萌萌徐华林张继东徐林
- 关键词：LPS内毒素耐受脾脏
