陈超
- 作品数：40 被引量：100H指数：6
- 供职机构：遵义医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”贵州省国际科技合作计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- miRNA-126基因敲减小鼠脾脏中免疫细胞的组成变化被引量：4
- 2016年
- 目的:观察miRNA-126基因敲减(Knock down,KD)小鼠脾脏中免疫细胞组成比例变化并探讨其意义。方法:Realtime PCR探针法检测miR-126KD小鼠脾脏中miR-126表达水平,计算脾脏总细胞数;HE染色观察脾脏组织的病理学变化;流式细胞术(FACS)分别检测脾脏中DCs细胞、巨噬细胞、γδT细胞、NKT细胞,CD3^+T细胞和其亚群以及CD19^+B细胞的比例并计算细胞绝对数;免疫印迹法(Western blot,WB)检测脾脏组织中磷酸化NF-κB和磷酸化Akt的表达水平。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD脾组织中miR-126表达水平明显降低(P<0.05),细胞总数明显增加(P<0.05),且发生明显病理学改变;固有免疫细胞中NK细胞的比例和细胞绝对数显著增加(P<0.05),但巨噬细胞的比例显著降低(P<0.05);适应性免疫细胞中CD3^+T细胞和CD4^+T细胞的比例和绝对细胞数都显著增加(P<0.05),而CD19^+B细胞仅绝对数显著增加(P<0.05);最后miRNA-126KD小鼠脾脏组织的磷酸化NF-κB和磷酸化Akt水平明显增加(P<0.05)。结论:miRNA-126敲减小鼠脾脏中各免疫细胞亚群的组成发生明显改变,可能与NF-κB和Akt信号通路传递变化有关,为后续探讨miR-126在机体免疫应答中的作用提供了前期实验基础。
- 雷良玉胡燕郭萌萌卢佳郑文徐华林陈超徐林
- 关键词：免疫细胞
- miR-7基因敲减对LPS诱导巨噬细胞炎症反应的影响被引量：5
- 2019年
- 观察miR-7基因敲减(knockdown, KD)对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的影响,并初步探讨其机制。分别用0、50、100、200 ng/mL LPS刺激野生型(wild type, WT)小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,经实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, Real-time PCR)检测发现,随着LPS刺激浓度的增加,巨噬细胞中miR-7的表达水平逐渐升高,且在100 ng/mL LPS浓度刺激下miR-7表达最显著(P<0.01)。用100 ng/mL LPS处理miR-7 KD小鼠和WT小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,镜检观察到巨噬细胞形态均由圆形变为长梭形,并伸出长长的伪足。应用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD80和CD86分子的表达情况,结果显示,LPS作用后,miR-7 KD小鼠骨髓来源巨噬细胞表面CD80和CD86的比例较WT小鼠显著上调(P<0.05)。Real-time PCR和ELISA结果显示,miR-7 KD小鼠巨噬细胞在LPS刺激后,炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-ɑ的表达显著增加(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,LPS刺激后,与对照组相比,miR-7 KD小鼠巨噬细胞中NF-κB p65和p-NF-κB p65的蛋白水平显著升高(P<0.01)。以上数据显示,miR-7基因KD可显著增强LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,可能与NF-κB信号通路的传递增强有关,提示miR-7在巨噬细胞炎症过程中发挥重要的调控作用。
- 陈慧子郭萌萌郭萌萌岳东旭赵娟娟陈超岳东旭
- 关键词：巨噬细胞炎症
- 真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-sponge的构建及其表达活性研究被引量：6
- 2014年
- 目的构建靶向miR-126的真核表达载体pEGFP-C2-miR-126-海绵体(sponge),并探讨其下调miR-126的表达对肝癌HepG2细胞体外生长的影响,为后续深入研究miR-126在肝癌发生中的作用提供前期实验基础。方法合成miR-126-sponge,构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体,体外瞬时转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察EGFP的表达情况;Real-time PCR检测细胞中miR-126的表达水平;MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖变化;划痕实验观察细胞的体外迁移能力改变。结果成功构建pEGFP-C2-miR-126-sponge真核表达载体(命名为p-miR-126-sp);Real-time PCR结果显示,与对照组(p-Cont)相比,p-miR-126-sp组中miR-126表达水平显著降低(P<0.05);MTT检测发现,p-miR-126-sp组中细胞增殖数目明显减少(P<0.05);此外,p-miR-126-sp组的克隆形成数和细胞迁移数均明显减少(P<0.05)。结论 miR-126-sponge可显著下调miR-126的表达水平进而抑制肝癌细胞HepG2的体外增殖及迁移能力。
- 胡燕廖珍媛李永菊陈超朱顺飞熊思东徐林
- 关键词：肝癌HEPG2细胞细胞增殖
- NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞体外生长的影响被引量：1
- 2019年
- 目的探讨过表达NDUFA4对人结直肠癌细胞体外生长的影响及其机制。方法将p-NDUFA4重组质粒(p-NDUFA4组)和p-Cont对照质粒(p-Cont组)体外分别转染人结直肠癌HCT116细胞;采用Real-timePCR和Westernblot检测细胞中NDUFA的表达;CCK-8法和克隆形成实验分别检测HCT116细胞增殖活性和克隆形成能力;实时荧光定量PCR法检测HCT116细胞中CDK2、CDK3、CDK4、CDK6的mRNA水平;Westernblot法检测细胞中蛋白总AKT、ERK1/2以及磷酸化AKT(p-AKT)、ERK1/2(p-ERK1/2)的表达水平。结果与p-Cont对照组相比,p-NDUFA4组中NDUFA4的表达水平显著升高(均P<0.01);细胞增殖和克隆形成能力明显增强(均P<0.05);CDK2、CDK3等的mRNA水平显著上调(均P<0.05);p-NDUFA4组中p-AKT和p-ERK1/2蛋白的表达水平明显上调(均P<0.05)。结论过表达NDUFA4能明显促进人结直肠癌细胞的体外生长,其机制可能与AKT和ERK信号通路的变化相关。
- 刘士明丁涛丁涛胡琳冒灵陈超郭萌萌陈超
- 关键词：真核表达结直肠癌HCT116增殖
- miRNA-126真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用被引量：4
- 2013年
- 目的:构建miRNA-126的重组真核表达载体,研究其对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和迁移的影响。方法:设计合成miRNA-126的正义和反义寡核苷酸,构建真核表达载体pcDNA6.2-miR-126,体外瞬时转染至4T1细胞,荧光显微镜下观测转染效率。Real-time PCR检测4T1细胞中miRNA-126的表达,MTT法和克隆形成实验检测4T1细胞的增殖和克隆形成能力,划痕法观察4T1细胞的体外迁移。结果:成功构建pcDNA6.2-miR-126真核表达载体,其可在4T1细胞中有效表达miR-126。与转染空质粒组(pcDNA6.2-Ctrl)相比,瞬时转染72 h后,pcDNA6.2-miR-126转染组4T1细胞的体外增殖能力受到明显抑制[(0.30±0.03)vs(0.51±0.04),P<0.05];瞬时转染48 h后,pcDNA6.2-miR-126组4T1细胞迁移能力也受到明显抑制[(8.17±2.30)vs(28.33±2.16)个,P<0.05]。结论:miRNA-126过表达可抑制乳腺癌4T1细胞的增殖及迁移。
- 廖珍媛秦娜琳李永菊陈超田丹罗军敏徐林
- 关键词：MIR-126真核表达乳腺癌增殖迁移
- MicroRNA-7在CD4^+T细胞体外活化中的表达及意义被引量：1
- 2016年
- 目的:观察microRNA-7(miR-7)在体外活化CD4^+T细胞中表达的变化,初步探讨其意义。方法:采用免疫磁珠分选法(MACS)获得FVB小鼠脾脏中CD4^+CD62L^+T细胞,经抗CD3/CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测miR-7表达水平,FACS检测活化膜分子CD69的表达变化;进一步观察刺激不同时间点CD4+T细胞中miR-7表达的变化;观察ERK抑制剂PD98059处理后,CD4^+T细胞活化下miR-7表达的变化,同时CCK8法检测细胞增殖变化,FACS检测CD69和CD62L分子的表达变化;最后,Real-time PCR检测各组细胞中IL-6、IL-10和IFN-γ等细胞因子表达水平变化。结果:与对照组相比,抗CD3/CD28抗体刺激后,CD4^+CD62L^+T细胞中miR-7表达水平显著上调,CD69分子的表达明显增加(P<0.05);与刺激0 h组和24 h组相比,48 h组和72 h组miR-7的表达水平显著上调(P<0.05);PD98059处理组中,CD4^+T细胞的miR-7表达水平显著下降(P<0.05),同时,活化膜分子CD69的表达比例明显降低(P<0.05);最后,细胞表达IL-6、IL-10和IFN-γ的水平均显著减弱(P<0.05)。结论:miR-7在活化的CD4+T细胞中明显上调,并与ERK信号相关,为后续探讨miR-7在CD4^+T细胞功能中的作用提供了前期实验基础。
- 徐华林赵娟娟崔盼盼郭萌萌陶弋婧陈超徐林
- 关键词：CD4+T细胞细胞因子
- TTF-1启动子调控microRNA-7真核表达载体的构建被引量：2
- 2014年
- 目的构建甲状腺转录因子(TTF-1)启动子调控miR-7表达的真核表达载体,并观察其表达miR-7对人肺癌细胞体外生长的影响。方法抽提人肺癌95D细胞基因组DNA,PCR分别扩增TTF-1启动子序列(promoter)和miR-7前体序列,纯化产物分别经Kpn I/Mul I双酶切和Mul I/HindⅢ双酶切,克隆入PGL3-basic-载体,构建pGL3-basic-TTF-1-promoter-miR-7真核表达载体(命名为p-T-miR-7);将p-T-miR-7真核载体体外瞬时转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测细胞中miR-7的表达水平;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖情况;划痕实验检测转染后细胞的体外迁移情况。结果经酶切和测序鉴定成功构建TTF-1启动子调控的miR-7真核表达载体p-T-miR-7;转染后72 h,与对照相比,p-T-miR-7转染组中miR-7的表达水平增加约2.5倍(P<0.05);CCK-8实验和克隆形成实验显示,p-T-miR-7转染组中95D细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);划痕实验进一步显示,细胞的体外迁移能力也显著削弱(P<0.05)。结论成功构建TTF-1启动子调控的miR-7真核表达载体,这为后续肺癌基因治疗策略开发提供重要前期实验基础。
- 陈超赵娟娟胡艳郭萌萌陶弋婧周涯秦娜琳郑静徐林
- 关键词：肺癌甲状腺转录因子真核表达
- 微小RNA-126基因在CD4＋T细胞介导小鼠自身免疫性肠炎中的作用被引量：1
- 2017年
- 目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;FACS检测CD4^+T细胞的比例变化及其表面活化分子CD62L、CD44的表达;MACS分选出WT和miR-126KD小鼠脾脏中CD4^+CD62L+T细胞,CFSE染色标记后,分别经尾静脉转输给WT小鼠,再诱导自身免疫性结肠炎模型;HE染色观察结肠组织病理变化;FACS检测CFSE阳性CD4^+T细胞表面活化分子CD62L、CD44的表达变化。结果与对照组相比,miR-126KD小鼠肠组织绒毛缺失不完整,黏膜上皮出现较大溃疡,炎性细胞浸润增加;FACS结果显示,miR-126KD组小鼠CD4^+T细胞比例和总数显著上调(P<0.01);且高表达CD44,低表达CD62L;过继转输实验结果显示,miR-126KD小鼠CD4^+T细胞转输组结肠组织损伤加重;同时,CFSE+细胞高表达CD44,低表达CD62L。结论 miR-126基因敲减加重葡聚糖硫酸钠所致肠炎的病变程度。
- 褚风云胡燕郭萌萌陈超赵娟娟刘云秦娜琳郑静徐林
- 关键词：CD4+T细胞IBD肠炎模型
- microRNA-7基因敲减对小鼠CD4^+SP细胞胸腺发育的影响被引量：6
- 2015年
- 目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FACS检测胸腺CD4+单阳性(Single positive,SP)细胞的比例并计算细胞总数,同时检测CD4+SP细胞CD44及CD62L表达变化;核抗原Ki-67染色法检测CD4+SP细胞的增殖情况;FACS检测CD4+SP细胞的凋亡变化;Western blot技术检测胸腺中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2表达水平变化。结果:与WT小鼠相比,miR-7KD小鼠胸腺体积、重量以及细胞总数均显著减少,且形态学结构发生改变(P<0.05);FACS结果显示,miR-7KD小鼠胸腺CD4+SP细胞比例明显降低,且细胞总数减少(P<0.05)。此外,CD4+SP细胞的CD44表达水平显著增加,而CD62L表达水平明显减少(P<0.05);同时,CD4+SP细胞增殖及凋亡比例均显著增加(P<0.01);最后,miR-7KD小鼠胸腺中ERK1/2以及磷酸化ERK1/2的表达均明显下调(P<0.05)。结论:miR-7基因敲减后可显著影响CD4+SP细胞的胸腺发育,这可能与细胞活化水平及ERK1/2信号通路改变有关。
- 陶弋婧朱顺飞陈超赵娟娟郭萌萌张忆雄秦娜林徐林
- 关键词：胸腺
- microRNA-126基因敲减小鼠模型及其血糖水平变化的检测
- 目的:检测microRNA-126-3p (miR-126)基因敲减小鼠各组织器官中miR-126的表达,并观察其血糖水平变化,初步探讨其意义.方法:分别提取野生型(Wild type,WT)和miR-126敲减(Kno...
- 胡燕李永菊陈超朱顺飞郭萌萌徐林
- 关键词：海绵体血糖
