陈晓龙
- 作品数：12 被引量：30H指数：4
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高迁移率族蛋白2在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞生物学活性的影响被引量：8
- 2019年
- 目的:探究高迁移率族蛋白2(HMGB2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及对HCC细胞生物学活性的影响。方法:利用TCGA和GEO公共数据库数据,分析HMGB2 mRNA在HCC组织中表达的特点。采用Western blot法检测正常肝细胞LO2和HCC细胞SMMC7721、Hep3B中HMGB2蛋白的表达。分别用HMGB2 siRNA和阴性对照siRNA转染SMMC7721和Hep3B细胞,采用CCK-8检测细胞增殖,Transwell体外迁移实验检测侵袭能力,流式法检测细胞周期和凋亡,以未转染细胞为空白对照。结果:HCC组织中HMGB2 mRNA的表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05),TNM分期晚、分化程度低和甲胎蛋白高表达的HCC组织HMGB2 mRNA表达水平更高(P<0.05);Kaplan-Meier法生存分析结果显示,HMGB2 mRNA高表达者的总体生存期、无进展生存时间小于低表达者(P<0.05)。与空白对照和阴性对照siRNA转染细胞相比,HMGB2 siRNA转染的SMMC7721和Hep3B细胞中HMGB2蛋白表达降低,细胞增殖、侵袭能力降低(P<0.05),细胞被阻滞于G0/G1期(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05)。结论:HMGB2高表达能够促进HCC细胞的增殖、侵袭能力,有望成为HCC诊断及治疗的新靶点。
- 陈建安陈思玉刘丽文朱威威陈晓龙余炎何玉婷孙冉冉任志刚李娟崔光莹余祖江
- 关键词：肝细胞癌
- 不同浓度氯化铵诱导张氏细胞的缺氧诱导因子-1α基因表达通路的研究
- 2016年
- 目的探索不同浓度氯化铵（NH4C1）处理对Changliver细胞缺氧诱导因子（HIF）-1α及血管内皮生长因子（VEGF）基因mRNA和蛋白表达的影响。方法培养人正常Changliver肝细胞，用不同浓度NH4Cl（1．25mmol／L、2．5mmol／L和5mmol／L）持续处理，以正常培养的Changliver细胞作为对照组，分别在传至5代、10代及15代时提取RNA及蛋白质，应用荧光定量PCR、免疫组织化学方法和蛋白免疫印迹技术检测HIF-1α和VEGF基因的表达。结果qPCR结果：与对照组相比，NH4Cl处理组细胞HIF-1α mRNA表达量明显增加（5代、10代和15代组内比较F值分别为：90976．659，1300．218，1896．800，P值均〈0．05），VEGFmRNA表达量明显增加（5代、10代和15代组内比较，值分别为：3554．143，2381．321，2591．954，P值均〈0．05）；免疫组织化学检测结果：与对照组相比，NH4Cl处理组细胞HIF-1α蛋白表达量明显增加（5代、10代和15代组内比较F值分别为：376．709，1615．358，1350．120，P〈值均0．05），VEGF蛋白表达量明显增加（5代、10代和15代组内比较，值分别为：904．789，5105．186，8644．498，P值均〈0．05）；蛋白免疫印迹检测结果：与对照组相比，NH4Cl处理组细胞HIF-1α蛋白表达量明显增加（5代、10代和15代组内比较F值分别为：228．499，6051．974，183．219，P值均〈0．05），VEGF蛋白表达量明显增加（5代、10代和15代组内比较F值分别为：5549．429，40187．665，120982．183，P值均〈0．05）。结论氨可使Changliver细胞HIF-1α及其下游基因VEGF在细胞中的表达增加，引起假性低氧现象。
- 谷红丽杨荟玉李晶晶李越赵雪萌周永健陈晓龙阚全程余祖江
- 关键词：高氨血症缺氧诱导因子1肿瘤微环境
- 靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建与鉴定被引量：3
- 2016年
- 目的:构建靶向低氧诱导因子(HIF)-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒,并体外鉴定其敲除效果。方法:设计靶向HIF-1α基因的gRNA序列,将其插入到CRISPR/Cas9质粒骨架载体p CAG-T7中,转化后挑取克隆,进行测序验证。将构建好的重组质粒体外转染人肝癌细胞Hep G2和SK-Hep-1,利用嘌呤霉素进行筛选并扩大培养获得HIF-1α基因敲除混合克隆细胞,应用Western blot技术检测未转染细胞和混合克隆细胞中HIF-1α蛋白的表达情况。结果:经测序验证,成功构建了靶向HIF-1α的重组质粒p CAG-T7-HIF-1α-gRNA,经Western blot验证,转染该重组质粒后人肝癌细胞株Hep G2和SK-Hep-1经Co Cl2诱导HIF-1α蛋白表达明显减弱。结论:成功构建了靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒载体。
- 何玉婷李娟孙冉冉陈晓龙申珅阚全程余祖江
- 关键词：HIF-1Α肝细胞癌基因敲除
- 丙酮酸激酶同工酶M2在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响被引量：1
- 2019年
- 目的:探讨丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响。方法:利用免疫组化法检测胆囊癌和癌旁正常组织中PKM2蛋白的表达。采用siRNA转染试剂将PKM2 siRNA和阴性对照SiRNA转染入胆囊癌GBC-SD细胞和NOZ细胞中,使用细胞免疫荧光和Western blot法检测两种胆囊癌细胞中PKM2蛋白的表达,应用MTT和Transwell实验检测细胞增殖、侵袭能力,使用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测细胞糖代谢能力。结果:PKM2蛋白在胆囊癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P <0. 001)。PKM2蛋白主要分布于GBC-SD和NOZ细胞的细胞质区域。转染PKM2 siRNA后,胆囊癌GBC-SD和NOZ细胞中PKM2的表达水平降低,细胞增殖、侵袭能力均降低(P <0. 05),同时葡萄糖消耗量、细胞外乳酸生成量和ATP消耗量均明显减少(P <0. 05)。结论:PKM2在胆囊癌组织和细胞中高表达,其与胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力关系密切,有望成为一个新的治疗胆囊癌的靶点。
- 陈建安陈思玉刘丽文陈晓龙朱威威余炎何玉婷孙冉冉任志刚李娟崔光莹余祖江
- 关键词：糖酵解胆囊癌
- 基于组织芯片技术研究Pim-1在人胆囊癌组织中的表达及预后意义
- 目的：研究Pim-1蛋白在人胆囊癌组织中的蛋白表达水平以及对患者预后的影响.方法：利用Westernblot技术检测Pim-1蛋白在胆囊癌组织中高表达;并基于组织芯片技术,应用免疫组织化学染色检测Pim-1在54例胆囊癌...
- 何玉婷孙冉陈晓龙李娟郭智贤李晶晶余祖江
- 关键词：胆囊癌组织芯片预后
- 靶向PD-L1基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建被引量：2
- 2016年
- 目的:构建靶向PD-L1基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒。方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计并合成靶向PD-L1基因的5对sgRNA序列。为了进一步降低克隆背景和提高构建阳性率,在受体载体中引入毒性蛋白系统(Ccd)。构建p X459-Ccd B重组载体,将p X459-Ccd B载体进行BbsⅠ酶切,将sgRNA插入到p X459-Ccd B骨架载体中,转化到不含Ccd A基因的宿主菌Stbl3中。酶切不完全引起的背景载体将因毒性蛋白的作用杀死宿主菌。转化后挑取阳性克隆,进行PCR和测序验证。结果与结论:经PCR和测序验证,重组质粒p X459-PD-L1-sgRNA构建成功,为下一步体内外敲除PD-L1基因和深入研究其在肿瘤免疫逃逸中的功能奠定了基础。
- 孙冉冉陈晓龙李娟申申李晶晶阚全程余祖江
- 关键词：PD-L1肿瘤免疫基因敲除
- AFP、GP73及GPC3检测在原发性肝癌诊断及预后评估中的价值被引量：5
- 2024年
- 目的分析血清甲胎蛋白(AFP)、高尔基体糖蛋白73(GP73)及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)检测在原发性肝癌诊断及预后评估中的价值。方法选取2021年5月至2022年5月郑州大学第一附属医院收治的原发性肝癌患者52例为研究对象,另外选取同期本院收治的肝硬化患者46例与健康体检者48名,分别设为肝硬化组与健康组。对比三组以及PHC组不同病理分期者AFP、GP73及GPC3水平;比较PHC不同预后者的一般资料及AFP、GP73及GPC3水平,采用多元Logistic回归分析影响PHC预后的危险因素,绘制ROC曲线分析血清AFP、GP73及GPC3单独检测及联合检测诊断PHC的效果。结果AFP、GP73、GPC3水平:PHC组>肝硬化组>健康组,差异具有统计学意义(P<0.05);PHC组不同病理分期者AFP、GP73、GPC3水平:Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期,差异具有统计学意义(P<0.05);预后良好组45例,预后不良组7例。两组性别、年龄、BMI指数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组凝血酶原、红细胞计数、载脂蛋白A1、GGT、AFP、GP73、GPC3水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05);经多元Logistic回归分析显示,凝血酶原、红细胞计数、载脂蛋白A1、GGT、AFP、GP73、GPC3水平上升是影响PHC患者预后不良的危险因素(P<0.05);AFP、GP73、GPC3联合检测诊断PHC的敏感度、特异度分别为0.956、0.857;AUC=0.950(95%CI:0.909~0.991),明显高于AFP、GP73、GPC3单独检测。结论血清AFP、GP73、GPC3三者联合在PHC诊断中具有较高的临床价值,可用于PHC的早期诊断,临床可通过检测上述指标血清水平来评估PHC患者的预后情况。
- 何平徐婧怡张雪雪陈晓龙
- 关键词：AFPGP73GPC3原发性肝癌
- 丙酚替诺福韦联合扶正化淤片对乙肝肝硬化代偿期肝纤维化的影响
- 2024年
- 目的探讨丙酚替诺福韦联合扶正化淤片对乙肝肝硬化代偿期肝纤维化的影响。方法抽取2022年10月至2023年9月郑州大学第一附属医院收治的乙肝肝硬化代偿期患者72例,按照随机数字表法分为对照组与研究组,每组36例。对照组给予丙酚替诺福韦治疗,观察组在对照组治疗基础上联合扶正化淤片治疗,比较两组肝纤维化指标[层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、IV型胶原(IV-C)]、肝功能指标[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)]、炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)]及免疫功能指标(CD4^(+)、CD8^(+))水平。结果治疗24周后,观察组血清LN、HA、PCⅢ、IV-C、AST、ALT、TBIL、MMP-2、IL-6水平及CD8^(+)均较治疗前及对照组显著降低,而CD4^(+)则较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丙酚替诺福韦联合扶正化淤片治疗乙肝肝硬化代偿期患者,可有效抑制其肝纤维化,改善肝功能,抗炎及增强免疫功能作用明显,有利于患者病情转归。
- 何平徐婧怡张雪雪陈晓龙
- 关键词：乙型肝炎肝硬化肝纤维化
- α-烯醇化酶在肝癌组织中的表达及临床意义被引量：4
- 2018年
- 目的:探究α-烯醇化酶(ENO1)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及临床意义。方法:利用TCGA和GEO公共数据库肝癌表达谱数据,分析HCC组织中ENO1 mRNA的表达;依据ENO1 mRNA的表达水平将TCGA数据库中的肝癌样本分为ENO1 mRNA低表达组和高表达组,然后下载目标分析基因集进行富集分析;K-M法绘制生存曲线,比较两组总体生存期(OS)和无进展生存时间(PFS)。采用免疫组化染色方法检测93例HCC及87例癌旁正常组织中ENO1蛋白的表达;将肝癌样本分为ENO1蛋白低表达组和高表达组,对两组进行生存分析。结果:HCC组织中ENO1 mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁正常组织(P<0.05);TNMⅢ、Ⅳ期HCC组织中ENO1 mRNA和蛋白表达水平高于TNMⅠ、Ⅱ期组织(P<0.05),病理分级3、4级的HCC组织中ENO1 mRNA表达水平高于1、2级组织(P<0.05)。ENO1 mRNA低表达组中位OS和PFS均大于高表达组(P<0.05);ENO1蛋白低表达组中位OS大于高表达组(P<0.05)。与HCC预后不良相关的基因富集在ENO1 mRNA高表达组,与预后良好相关的基因富集在ENO1 mRNA低表达组。结论:ENO1与HCC的发生发展有关,有望成为HCC诊断及治疗的新靶点。
- 朱威威陈晓龙陈建安何玉婷余炎胡秋月孙冉冉任志刚李娟崔光莹张敏敏余祖江
- 关键词：肝细胞癌
- 细胞自噬在肝脏疾病中作用机制的研究进展被引量：3
- 2015年
- 自噬又名自我消化，是细胞生长、发育以及维持机体内环境稳定的关键途径［1］。在细胞生长发育过程中，细胞内需消化的蛋白质、细胞器等会被多层膜结构包被的形成自噬体，溶酶体参与并降解其所包被的内容物，从而细胞完成自身的新陈代谢和生长发育。近年来，研究发现细胞自噬与多种肝脏疾病发生、发展密切相关，为此本文对细胞自噬及其在肝脏疾病中的作用机制进行综述。
- 陈晓龙张明亮余祖江阚全程
- 关键词：细胞自噬肝脏疾病
