何玉婷 作品数:21 被引量:46 H指数:4 供职机构: 郑州大学第一附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技重大专项 河南省医学科技攻关计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建与鉴定 被引量:3 2016年 目的:构建靶向低氧诱导因子(HIF)-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒,并体外鉴定其敲除效果。方法:设计靶向HIF-1α基因的gRNA序列,将其插入到CRISPR/Cas9质粒骨架载体p CAG-T7中,转化后挑取克隆,进行测序验证。将构建好的重组质粒体外转染人肝癌细胞Hep G2和SK-Hep-1,利用嘌呤霉素进行筛选并扩大培养获得HIF-1α基因敲除混合克隆细胞,应用Western blot技术检测未转染细胞和混合克隆细胞中HIF-1α蛋白的表达情况。结果:经测序验证,成功构建了靶向HIF-1α的重组质粒p CAG-T7-HIF-1α-gRNA,经Western blot验证,转染该重组质粒后人肝癌细胞株Hep G2和SK-Hep-1经Co Cl2诱导HIF-1α蛋白表达明显减弱。结论:成功构建了靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒载体。 何玉婷 李娟 孙冉冉 陈晓龙 申珅 阚全程 余祖江关键词:HIF-1Α 肝细胞癌 基因敲除 沉默精氨酸琥珀酸合成酶对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响 2018年 目的:探讨shRNA靶向沉默精氨酸琥珀酸合成酶(ASS1)基因后对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响。方法:应用RT-PCR及Western blot检测5种肝癌细胞系中ASS1的表达情况;将shRNA-ASS1转染入SMMC-7721细胞(shRNA-ASS1组),同时设空白对照组和阴性对照组,观察转染后细胞的生长变化,运用Western blot鉴定其对ASS1基因的沉默效果;采用CCK-8法检测各组转染3 d后的细胞增殖情况;流式细胞术检测各组转染24 h后细胞凋亡的情况。结果:ASS1 mRNA和蛋白在Changliver、SMMC-7721、QGY-7703、HepG2和Hep G3B细胞中的表达差异有统计学意义(F_(mRNA)=1 129.140,F_(蛋白)=1 114.240,P均<0.001),ASS1在SMMC-7721和Hep G3B肝癌细胞系中呈高表达。CCK-8实验显示,与阴性对照组及空白对照组相比,shRNA-ASS1组细胞增殖率降低(F=7.176,P=0.007)。细胞凋亡实验显示,shRNA-ASS1组细胞凋亡率高于阴性对照组和空白对照组(F=88.120,P<0.001)。结论:沉默ASS1基因可抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡。 李越 何玉婷 李晶晶 陈洁 余炎 胡秋月 阚全程 余祖江关键词:RNA干扰 肝移植术后早期门静脉并发症的危险因素分析及诊治经验 被引量:5 2019年 目的探讨肝移植术后早期门静脉并发症的危险因素及诊治经验。方法回顾性分析2016年1月至2018年12月616例肝移植成人受者的临床资料,其中9例(1.5%)术后早期发生门静脉并发症。通过比较受者一般情况、供者情况及手术情况,分析发生早期门静脉并发症的危险因素。结果受者年龄、性别、供受者ABO血型是否相符、供肝冷缺血时间、移植手术耗时、术中无肝期时间、术中出血量、术中输注红细胞的量等差异均无统计学意义(P>0.05);但术前受者存在门静脉血栓、脾切除、再次肝移植和门静脉吻合方式等差异存在统计学意义,且均为发生早期门静脉并发症的危险因素(P<0.05)。二元Logistic回归分析结果显示,受者术前存在门静脉血栓(OR=16.922,95%CI为1.859~154.059,P=0.012)和再次肝移植(OR=64.871,95%CI为8.293~507.435,P<0.001)是肝移植术后早期发生门静脉并发症的独立危险因素。9例早期门静脉并发症均由超声和(或)CT血管造影证实,其中3例门静脉I型血栓受者接受口服药物治疗,3例门静脉II型血栓受者接受经腹门静脉切开取栓术和经大网膜门静脉泵植入术治疗,随访(22±14.8)个月,门静脉血流通畅;1例门静脉狭窄受者接受门静脉球囊扩张和支架植入治疗,随访17个月,门静脉血流通畅;2例门静脉血流异常受者均为再次肝移植者,术后均死亡。结论肝移植术前存在门静脉血栓和脾切除、再次肝移植和非供、受者门静脉端端吻合是肝移植术后发生早期门静脉并发症的危险因素。根据血栓类型和肝功能对门静脉血栓形成受者行个体化治疗,预后良好。应重视再次肝移植术后早期门静脉血流异常者,其死亡率较高。 贺英杰 温培豪 张嘉凯 王智慧 史晓奕 何玉婷 李捷 郭文治 张水军关键词:肝移植 门静脉并发症 预后 肝细胞肝癌患者血浆纤维蛋白原、D-二聚体改变的临床意义 被引量:8 2018年 目的探讨肝细胞肝癌患者血浆纤维蛋白原(FIB)和D-二聚体(D-D)水平改变的临床意义。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院收治的108例肝细胞肝癌患者(肝细胞肝癌组),另收集同期至门诊就诊的125例乙肝肝硬化患者(乙肝肝硬化组)和125例健康体检者(健康对照组),对各组病例的血浆FIB及D-D水平进行统计分析。结果肝细胞肝癌组血浆FIB和D-D水平升高,高于乙肝肝硬化组和健康对照组,差异有统计学意义(P <0. 05);肝细胞肝癌组血浆FIB和D-D水平随着临床TNM分期的增加而逐渐升高,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论肝细胞肝癌患者FIB和D-D水平升高,动态监测相关指标能够有效辅助肝癌诊断治疗及判断预后。 史青苗 薛晨 何玉婷 任志刚 余祖江关键词:肝细胞肝癌 纤维蛋白原 D-二聚体 肝移植术后早期移植物功能不良的转录组学及临床因素分析 2020年 目的分析影响脑死亡供者供肝移植术后受者早期移植物功能不良(early allograft dysfunction,EAD)的分子标志物及临床因素,建立将分子标志物和临床因素相结合的预测移植术后EAD的预警体系。方法回顾性分析2017年7月至2018年8月在郑州大学第一附属医院肝脏移植中心接受同种异体原位肝移植的87例成年受者的临床资料以及对应的供者临床信息。通过单因素分析,找出EAD的潜在危险因素,并进行Logistic回归分析以找出独立危险因素;并从中选取肝移植术后8例发生EAD和8例未发生EAD的组织标本,进行转录组测序,寻找与EAD相关信号通路。结果通过临床数据分析发现供者总胆红素、淋巴细胞以及受者术前总胆红素是脑死亡供者供肝移植术后受者EAD的独立危险因素。通过转录组测序发现EAD不良组与非EAD组之间有3857个显著差异的mRNA,其中1751个在发生EAD的供肝组织中表达上调,2106个下调。通过基因本体论和京都基因与基因组百科全书分析发现炎症与代谢相关的信号通路与移植术后EAD有关。结论早期移植物功能不良相关的炎症与代谢信号通路结合供者总胆红素、淋巴细胞以及受者术前总胆红素对预测肝移植受者早期移植物功能不良的发生具有潜在的诊断意义。 庞春 李捷 曹胜利 温培豪 王智慧 胡博文 史晓奕 张嘉凯 何玉婷 郭文治 张水军关键词:肝移植 脑死亡 阿伐曲泊帕治疗等待肝移植患者重度血小板减少症的疗效分析 被引量:1 2023年 目的研究阿伐曲泊帕对等待肝移植患者伴重度血小板减少症(thrombocytopenia,TCP)的治疗作用。方法通过回顾郑州大学第一附属医院2021年2月至2022年10月间67例等待肝移植并伴重度TCP患者的临床资料,收集患者一般情况资料及阿伐曲泊帕使用前后患者血小板计数情况。治疗后血小板计数升至≥50×10^(9)/L为治疗有效。根据是否联合应用重组人血小板生成素(recombinant human thrombopoietin,rhTPO)将患者分为两组(单药治疗组和联合治疗组)进行分析。结果在伴有重度TCP的67例等待肝移植患者中,应用阿伐曲泊帕治疗后患者血小板计数与治疗前相比显著升高(P=0.001),其中89.55%(60/67)的患者治疗后血小板计数升至≥50×10^(9)/L,有效率在不同程度的血小板减少组间无统计学差异(P=0.373)。亚组分析表明,联合治疗组治疗后血小板计数显著高于单药治疗组(P=0.002),而用药前血小板计数无统计学差异(P=0.064)。在单药治疗组中85.00%(34/40)患者血小板计数升至≥50×10^(9)/L,联合治疗组(27例)中96.30%(26/27)患者治疗后血小板计数升至≥50×10^(9)/L,两组间比较不具有统计学差异(P=0.228)。结论阿伐曲泊帕可提高伴有重度TCP等待肝移植患者的血小板水平,与rhTPO联用可能存在叠加作用。 史晓奕 张嘉凯 杨东菁 王云 黄昌俊 温培豪 曹胜利 张华鹏 何玉婷 王智慧 郭文治关键词:肝移植 血小板减少症 利用TCGA数据库分析PRAF2在肝细胞肝癌中的表达及临床意义 2019年 目的通过分析PRAF2在肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)中的表达水平及其与肝细胞肝癌患者临床病理特征的相关性,探究PRAF2对HCC的检测及预后判断的作用和临床意义。方法从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库筛选出肝癌的数据及临床资料,并分析PRAF2基因表达水平与HCC患者的性别、年龄等一般资料和临床病理特征以及预后情况的相关性。结果 HCC患者癌组织中的PRAF2表达水平较癌旁组织明显上调(P<0.05),且表达水平的高低与患者的性别、年龄、肿瘤的病理学分级无关(P>0.05),与血清甲胎蛋白浓度、肿瘤的TNM分期有关(P<0.05)。PRAF2的高表达与患者总生存期及无进展生存期的缩短显著相关(P<0.05)。结论 PRAF2可作为促癌基因在HCC中高表达,有望成为HCC的早期诊断指标和预后判断指标。 白黎 党钦 王锃涵 薛晨 何玉婷关键词:肝细胞肝癌 成人原位肝移植受者术后急性肾损伤的危险因素分析 被引量:1 2022年 目的分析成人原位肝移植受者术后发生急性肾损伤(AKI)的危险因素。方法回顾性分析2019年1月至2021年4月于郑州大学第一附属医院进行原位肝移植手术的232例受者的临床资料,其中男性195例,女性37例,年龄(49.1±9.4)岁。依据术后7 d内是否发生AKI分为两组:AKI组(n=112)和非AKI组(n=120)。对比两组患者基本信息、术前血液学指标、手术时间、术后住院时长等临床资料。对原位肝移植术后AKI的相关因素进行单因素分析,将差异有统计学意义的因素纳入多因素logistic回归分析。结果在232例接受原位肝移植的患者中,有112例在术后发生AKI,发生率为48.3%(112/232),其中AKI 1期64例(57.1%,64/112),AKI 2期30例(26.8%,30/112),AKI 3期18例(16.1%,18/112)。logistic回归分析结果显示,高血压(OR=5.874,95%CI:1.931~17.863,P=0.002)和高终末期肝病模型(MELD)评分(OR=1.041,95%CI:1.010~1.074,P=0.010)是原位肝移植术后AKI的独立危险因素。结论高血压和高MELD评分是原位肝移植受者术后AKI的独立危险因素。 虞豪骋 温培豪 张嘉凯 何玉婷 张水军 郭文治关键词:肝移植 急性肾损伤 丙酮酸激酶同工酶M2在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响 被引量:1 2019年 目的:探讨丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响。方法:利用免疫组化法检测胆囊癌和癌旁正常组织中PKM2蛋白的表达。采用siRNA转染试剂将PKM2 siRNA和阴性对照SiRNA转染入胆囊癌GBC-SD细胞和NOZ细胞中,使用细胞免疫荧光和Western blot法检测两种胆囊癌细胞中PKM2蛋白的表达,应用MTT和Transwell实验检测细胞增殖、侵袭能力,使用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测细胞糖代谢能力。结果:PKM2蛋白在胆囊癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P <0. 001)。PKM2蛋白主要分布于GBC-SD和NOZ细胞的细胞质区域。转染PKM2 siRNA后,胆囊癌GBC-SD和NOZ细胞中PKM2的表达水平降低,细胞增殖、侵袭能力均降低(P <0. 05),同时葡萄糖消耗量、细胞外乳酸生成量和ATP消耗量均明显减少(P <0. 05)。结论:PKM2在胆囊癌组织和细胞中高表达,其与胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力关系密切,有望成为一个新的治疗胆囊癌的靶点。 陈建安 陈思玉 刘丽文 陈晓龙 朱威威 余炎 何玉婷 孙冉冉 任志刚 李娟 崔光莹 余祖江关键词:糖酵解 胆囊癌 基于组织芯片技术研究Pim-1在人胆囊癌组织中的表达及预后意义 目的:研究Pim-1蛋白在人胆囊癌组织中的蛋白表达水平以及对患者预后的影响.方法:利用Westernblot技术检测Pim-1蛋白在胆囊癌组织中高表达;并基于组织芯片技术,应用免疫组织化学染色检测Pim-1在54例胆囊癌... 何玉婷 孙冉 陈晓龙 李娟 郭智贤 李晶晶 余祖江关键词:胆囊癌 组织芯片 预后