王超
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 胞外DNA是耻垢分枝杆菌生物被膜的主要成分
- 2016年
- 目的本实验以无致病性的耻垢分枝杆菌Mc^2 155为结核分枝杆菌模型菌进行生物被膜成分研究。方法利用24孔细胞培养板建立体外耻垢分枝杆菌生物被膜培养模型；借助DNaseⅠ作为eDNA抑制剂分析其在生物被膜的存在情况，通过结晶紫染色对生物被膜进行定量；早期加入外源基因组DNA对生物被膜的影响进行评估；利用荧光显微镜考察SYTOX orange标记生物被膜的主要成分胞外DNA（eDNA）。结果体外培养的耻垢分枝杆菌Mc^2 155能形成典型生物被膜；早期加入DNaseⅠ明显抑制了生物被膜的产量；早期加入基因组DNA有利于提高生物被膜产量。特异染料SYTOX orange能对耻垢分枝杆菌生物被膜染色，说明eDNA是耻垢生物被膜的主要成分。结论本研究首次证明eDNA是耻垢生物被膜的主要成分，这为治疗分枝杆菌感染和耐药控制提供了新的思路。
- 张巧丽李树林安雅男王超李燕于录
- 关键词：分枝杆菌生物被膜
- 黄曲霉毒素B1诱导MEK/ERK/ROS介导的巨噬细胞自噬反应被引量：2
- 2017年
- 为研究黄曲霉毒素B1(AFB1)能否诱导细胞自噬,并初步探讨其可能的作用机制。利用免疫荧光、酶标仪检测、免疫印迹等技术检测经AFB1处理过的细胞的自噬水平、相关蛋白的表达量以及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的产生情况。结果表明:AFB1能够引起RAW264.7细胞和Hela细胞的自噬反应,并且该自噬为完全自噬。AFB1诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7自噬是依赖细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)途径发生的,并受ROS的调节。此外,发现AFB1诱导ROS产生呈浓度依赖性,而ROS抑制剂同时抑制了ROS和自噬发生,但自噬抑制剂并没有有效地抑制ROS的产生,表明ROS处于AFB1诱导自噬的上游,对自噬起到调节作用。这表明AFB1诱导的自噬现象在细胞中普遍存在,而自噬作为机体的免疫机制,在抵抗AFB1毒力侵染的过程中发挥重要作用。
- 安雅男施晓晨王超李树林李燕于录
- 关键词：黄曲霉毒素B1巨噬细胞自噬MEK/ERK活性氧
- 血凝-血凝抑制试验在快速诊断犬细小病毒性肠炎中的应用被引量：3
- 2015年
- 对38份疑似细小病毒性肠炎病犬粪便样品以HA-HI方法进行了检测,同时与免疫金标检测试纸和PCR检测方法进行比较。结果显示,HA-HI、免疫金标检测试纸和PCR 3种方法检测的阳性率分别为84.2%(32/38)、92.1%(35/38)和89.4%(34/38)。与PCR方法相比,HA-HI检测方法的敏感性和特异性分别为94.1%和100%,免疫金标检测试纸的敏感性和特异性分别为94.1%和25%。结果表明,HA-HI检测方法的特异性比免疫金标检测试纸好,敏感性略低于PCR,适用于基层单位对犬细小病毒性肠炎的快速诊断。
- 马爱民李倩王超赵国星程楠金宏丽曹增国赵永坤郑学星高玉伟王化磊杨松涛
- 关键词：犬细小病毒性肠炎
- 结核分枝杆菌Rv3519表达与其生物被膜形成能力的研究被引量：3
- 2015年
- 采用结晶紫染色检测结核分枝杆菌生物被膜的形成能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测生物被膜态的不同结核分枝杆菌Rv3519表达水平,分析Rv3519基因表达与结核分枝杆菌生物被膜形成能力的关系。结果表明:临床分离株产膜能力较H37Rv明显偏低,差异显著(P<0.01);临床分离株之间生物被膜产量差异不显著(P>0.05);生物被膜态的分离株较标准株Rv3519基因表达量偏低,差异显著(P<0.01)。说明结核分枝杆菌生物被膜形成能力与Rv3519基因表达水平相关,Rv3519基因可以作为结核分枝杆菌生物被膜形成能力的潜在分子诊断标志。
- 杨志强张巧丽安雅男王超孙青松唐旭东孟日增施晓晨程威金琨琪于录郭娜
- 关键词：结核分枝杆菌生物被膜实时荧光定量PCR
- PMA诱导Hela细胞ROS升高机制研究被引量：2
- 2018年
- 目的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)升高是癌症转移的主要原因之一,ROS已成为一种新的抗癌靶点,但其形成机制尚未完全阐明。本研究以佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导Hela细胞ROS升高为模型,探讨Hela细胞ROS升高的相关机制。方法 500ng/mL的PMA诱导Hela细胞0.5h,荧光酶标仪检测Hela细胞经过PMA诱导后的ROS产量,蛋白质印迹法检测Hela细胞经过PMA诱导后的HIF-1α、Rac2和NOX2蛋白的表达量。结果 500ng/mL PMA诱导Hela细胞0.5、1、2和4h,与空白对照组比较,P值分别为<0.001、0.055、0.125和0.135,表明0.5h为PMA诱导Hela细胞ROS升高的最佳诱导条件。500ng/mL PMA诱导Hela细胞0.5h后,诱导组中HIF-1α、Rac2和NOX2蛋白条带灰度平均值分别为15 833.33±63.13、20 448.33±78.65和21 840.33±123.91,均高于空白组的9 853.33±124.13、9 782.00±93.62和10 638.33±106.57,均P<0.001,表明PMA诱导了HIF-1α、Rac2和NOX2蛋白的高表达。荧光酶标仪检测Hela细胞ROS结果显示,echinomycin组、NSC23766组和DPI组与PMA组比较,P值分别为<0.001、0.003和<0.001,表明HIF-1α、Rac2和NOX2抑制剂均抑制了Hela细胞中PMA诱导的ROS升高。蛋白质印迹法检测结果显示,空白组HIF-1α、Rac2和NOX2灰度平均值分别为13 571.00±287.68、10 495.67±253.72和17 403.33±162.87,PMA组分别为22 946.33±67.10、30 578.67±251.11和30 582.00±88.39,NSC23766组分别为22 629.67±445.26、3 919.00±41.68和22 618.67±161.51,echinomycin组分别为16 691.33±9.504、15 424.00±315.05和14 899.00±71.55,DPI组分别为22 970.00±714.88、30 120.33±555.05和5 787.00±12.29。echinomycin组与PMA组比较,均P<0.001,表明echinomycin抑制了PMA诱导的HIF-1α、Rac2和NOX2蛋白的高表达;NSC23766组与PMA组比较,P值分别为0.354、<0.001和<0.001,表明NSC23766抑制了PMA诱导的Rac2和NOX2蛋白的高表达,但没有抑制HIF-1α蛋白的高表达;DPI组与PMA组比较,P值分别为0.944、0.117和<0.001,表明DPI抑制了PMA诱导的NOX2
- 李树林王超安雅男李燕王雪艳唐旭东于录
- 关键词：佛波酯HELA细胞活性氧簇HIF-1Α
- 巨噬细胞通过产生胞外陷阱捕获并杀伤单增性李斯特菌被引量：3
- 2015年
- 为了研究产单核细胞增生性李斯特菌(Lm)能否引起巨噬细胞产生胞外陷阱,并初步探讨巨噬细胞胞外陷阱(METs)对其杀伤作用。本文通过荧光显微镜、菌落计数和免疫印记等技术分析单增李斯特菌侵袭的2种巨噬细胞胞外陷阱形态、产量及抑菌效果。结果显示,小鼠巨噬细胞系RAW 264.7以及人巨噬细胞系Thp-1均可在单增李斯特菌的诱导下产生胞外陷阱;Lm在侵袭巨噬细胞15min后已有METs产生,1~3h产量明显增大,然后随时间的推移逐渐减弱;METs可以有效抑制Lm的生长。另外,本试验还发现Lm诱导胞外陷阱的产生与细胞外信号调节激酶相关。
- 程威施晓晨王超安雅男张巧丽金琨琪杨志强于录
- 关键词：单增李斯特菌巨噬细胞细胞外信号调节激酶
- 犬细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 利用本实验室建立的昆虫细胞/杆状病毒表达系统表达犬细小病毒病毒样颗粒(CPV-VLPs),采用硫酸铵沉淀、蔗糖密度梯度离心对表达的CPV-VLPs进行纯化,用电子显微镜、SDS-PAGE及Western-blotting方法检测纯化效果。以纯化的CPV-VLPs作为包被抗原建立CPV间接ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、敏感性、重复性。结果显示,CPV-VLPs经过纯化后纯度可达到95%以上;优化的ELISA最佳工作条件为:纯化抗原包被浓度为5.0mg/L,4℃包被过夜;1%BSA,37℃封闭2h;待检血清1∶40稀释,37℃孵育1.5h;HRP标记的酶标二抗1∶20 000稀释,37℃孵育1h;TMB室温避光显色30min;确定的血清阴性阳性临界值D450nm值为0.264。该方法可特异性检测犬细小病毒阳性血清,与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬冠状病毒病、狂犬病阳性血清均不发生反应。该方法的敏感性为1∶640,批内重复试验变异系数小于6%,批间重复试验变异系数小于8%。42份临床血清样本的检测结果表明,与血凝抑制试验的符合率为90.48%。
- 赵国星王化磊金宏丽李倩郑学星冯娜李岭李露王超赵永坤王铁成高玉伟杨松涛夏咸柱
- 关键词：犬细小病毒病毒样颗粒间接ELISA抗体检测
- 耻垢分枝杆菌MSMEG_6935基因的敲除对其生物被膜产量的影响被引量：1
- 2015年
- 探索出一套分枝杆菌基因敲除的可靠方案,并研究耻垢分枝杆菌MSMEG_6935基因对其生物被膜产量的影响,结核分枝杆菌相关基因的敲除对其致病机理的深入研究有重要意义。利用融合PCR方法将MSMEG_6935基因的上、下游基因以及替代目的基因的kan基因融合,并将产物克隆到温敏型穿梭质粒pPR27,再电转入耻垢分枝杆菌mc2155中,筛选获得MSMEG_6935基因缺失株mc2155-6935。进一步研究MSMEG_6935基因的敲除对细菌生长曲线和生物被膜产量的研究。成功构建了MSMEG_6935基因的缺失株,并研究证明耻垢分枝杆菌MSMEG_6935基因的缺失对耻垢分枝杆菌的生长曲线没有影响,但会对其生物被膜的产量产生较大影响。
- 金琨琪施晓晨张巧丽安雅男王超程威杨志强于录
- 关键词：基因敲除穿梭载体生物被膜
- 西方马脑炎疫苗研究进展
- 2015年
- 西方马脑炎是由西方马脑炎病毒感染引起的,经蚊虫传播的急性人兽共患传染病,可引起严重的脑损伤。此外,西方马脑炎病毒也被视为潜在的生物战剂(生物恐怖剂)。目前西方马脑炎尚无获批疫苗和有效药物,研发有效疫苗用于相关人群的免疫接种很有必要。传统灭活病毒疫苗具有良好的免疫保护效能,但为了避免其制备过程中病毒培养对昂贵生物安全3级实验室的依赖以及操作者潜在感染的风险,研究者采用新的生物学技术研发西方马脑炎亚单位疫苗、DNA疫苗、嵌合体疫苗和重组活载体疫苗等新型疫苗。本文对疫苗的研究进展进行综述。
- 王超金宏丽王化磊杨松涛夏咸柱
- 关键词：嵌合体
