王化磊
- 作品数：142 被引量：271H指数：8
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 猪红细胞醛化及其在犬细小病毒血凝试验中的应用被引量：8
- 2014年
- 为了克服犬细小病毒血凝检测因随时需要新鲜猪红细胞而不能在临床广泛应用的缺点，试验用戊二醛醛化猪红细胞进行犬细小病毒血凝试验（HA）。结果表明：醛化后的红细胞不变形，结构完整，细胞膜的硬度增加，细胞不易破碎。1％醛化猪红细胞比1％新鲜猪红细胞检测结果低1～2个效价，结果容易判读，且具有检测的特异性，准确性。说明醛化的猪红细胞可以代替新鲜猪红细胞进行血凝检测。
- 马爱民胡桂秋朱晓文黄靖梁萌李斌高玉伟王化磊杨松涛夏咸柱
- 关键词：猪红细胞醛化犬细小病毒血凝试验
- 犬科和/或猫科动物疫病重组活载体疫苗的制备方法
- 本发明提供了一种基于RNA病毒拯救技术的，制备犬科和/或猫科动物疫病重组活载体疫苗的方法，其基于反向遗传操作系统构建了可表达犬科和/或猫科动物疫病主要保护性抗原的重组病毒表达载体。利用该表达载体和辅助质粒共同转染狂犬病病...
- 杨松涛王化磊金宏丽冯娜赵永坤郑学星高玉伟王承宇王铁成黄耕夏咸柱
- 文献传递
- H5N1亚型禽流感病毒免疫血清精制工艺的建立被引量：1
- 2009年
- 目的建立马抗H5N1亚型禽流感病毒免疫血清的精制工艺。方法以硫酸铵盐析法提取免疫马血浆中的IgG抗体,以8～256μg/mgIgG胃蛋白酶(活性单位1:3000)进行消化,以阳离子交换层析柱纯化F(ab’)2抗体,并参照《中国药典》三部(2005版)要求,对试制的样品进行检定。结果经一步50%硫酸铵和多步33%硫酸铵盐析,获得了较为纯净的IgG抗体。8μg胃蛋白酶用量可完全消化1mgIgG抗体分子,阳离子交换方法分离F(ab’)2抗体纯度可达90%以上,高于常规工艺制备的抗体纯度。以此工艺试制的样品,各项质量指标均符合《中国药典》三部(2005版)质量标准。结论已初步建立了马抗H5N1亚型禽流感病毒免疫血清的精制工艺。
- 王承宇王化磊李群冯娜李吉平范泉水黄耕夏咸柱
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型免疫血清
- 犬瘟热病毒囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及鉴定被引量：1
- 2015年
- 为表达具有天然构象的犬瘟热病毒(CDV)囊膜糖蛋白融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H),本研究扩增小熊猫源CDV驯化致弱株LP的F、H基因,克隆至pFastBacTM1载体中,测序验证后转化至DH10BacTM感受态细胞,同源重组获得穿梭质粒rBacmid-F、rBacmid-H,将其分别转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rpFB-F、rpFB-H,并将表达的重组融合蛋白(rF)和血凝素蛋白(rH)进行IFA和Western blot鉴定。以犬抗CDV高免血清对重组杆状病毒感染细胞进行IFA鉴定,在感染细胞的细胞膜上可见特异性荧光反应;以鼠抗F、H蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体对重组杆状病毒感染细胞进行Western blot检测,可见相对分子质量为63和68ku左右的条带,分别为重组融合蛋白(rF)和血凝素蛋白(rH),大小与预期相符。两种囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中均成功表达,且具有良好的反应原性。本研究为CDV病毒样颗粒疫苗的开发等工作奠定了基础。
- 虞一聪冯娜闫飞虎盖微微王铁成王化磊郑学星赵永坤黄耕杨松涛高玉伟夏咸柱
- 关键词：犬瘟热病毒融合蛋白血凝素蛋白
- 小鼠体内SEG蛋白靶向运送shRNA抑制狂犬病毒复制被引量：1
- 2016年
- 【目的】本试验前期已经证实,用单链抗体(sc Fv)-绿脓杆菌跨膜区(ETA)-酵母DNA结合结构域(GAL4)表达的蛋白(简写为SEG蛋白),SEG能与含sh RNA(short hairpin RNA)的质粒(p RNATU6.3-sh RNA)结合形成复合物SEG-sh RNA,并靶向运送该质粒进入感染狂犬病毒(Rabies virus,RV)的细胞,抑制RV复制。本研究用感染狂犬病病毒的小鼠模型,进行SEG-sh RNA复合物小鼠体内靶向性运送si RNA(short interfering RNA)和抑制RV复制的研究。【方法】用已建立RV CVS-24株小鼠肌肉注射模型进行试验。取50 LD_(50) CVS-24攻毒,在攻毒后12 h尾静脉注射SEG-sh RNA,流式细胞仪检测SEG-sh RNA的体内靶向性;同样方法攻毒后,尾静脉注射SEG-sh RNA,连续4 d,攻毒后第5天小鼠脑组织用q RT-PCR、RT-PCR、Western blot、免疫荧光染色法检测其中RV的含量;统计小鼠存活率;并检测小鼠体内IFN-α含量,从而分析SEG-sh RNA在体内的抗病毒作用。【结果】结果表明仅在RV攻毒小鼠的注射部位检测到绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达,未注射RV的腿部及脑、肝、脾、肾均无GFP表达,说明SEG-sh RNA可靶向RV感染细胞运送sh RNA。攻毒后第5天脑组织q RT-PCR结果表明靶向药物组比病毒对照减少4.88倍(3.9/0.8);RT-PCR、Western blot、免疫荧光染色试验结果表明使用SEG-sh RNA组病毒量明显少于病毒对照组;且攻毒后13 d,动物存活率达50%,而病毒对照100%死亡。检测小鼠体内IFN-α未见升高。【结论】以上试验表明SEG蛋白在小鼠体内靶向运送含sh RNA的质粒到感染组织细胞;对小鼠体内RV有明显抑制作用,因此可以用于狂犬病毒感染的特异辅助性救治研究。
- 杨瑞梅王化磊郑学星单虎杨松涛夏咸柱
- 关键词：狂犬病毒SHRNA小鼠
- TaqMan探针荧光定量PCR支原体快速检测方法的建立及应用被引量：6
- 2010年
- 目的:在支原体16SrRNA的种属特异性区域设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立荧光定量PCR方法,检测细胞培养物中支原体。方法:选择16srRNA支原体种属特异性区域作为扩增区,设计支原体通用引物,PCR扩增片段的预期大小为288bp。回收PCR扩增产物,连接pMD-18T载体,转化JM109大肠杆菌,涂布Amp+琼脂平板,挑取阳性克隆进行PCR鉴定后提取质粒。构建荧光定量PCR绝对定量的标准品,设计荧光定量引物、探针,采用矩阵法对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用十倍稀释法检验灵敏度并与普通PCR法及培养法进行比较;对支原体及其他5种革兰氏阳性杆菌进行特异性检验;对培养法、普通PCR法及荧光定量PCR法检测样本的灵敏度进行比较。结果:支原体PCR产物大小约为288bp,质粒质量浓度为13.9mg·mL-1,A260/A280(Ratio)为1.780,质粒溶液浓度为4.25×109拷贝.μL-1。10μmol.L-1的引物浓度和10μmol.L-1探针浓度为最佳反应浓度,双温循环及60℃退火温度为最佳的循环条件。检测灵敏度为4.250×101拷贝。拷贝数与Ct值之间的线性关系表达式:Ct=-2.916×log拷贝数+40.02。特异性检验中5种革兰氏阳性杆菌样本检测均为阴性,支原体样本为阳性,表明特异性好。准确性检测中变异系数小,表明稳定性好。组内及组间相同浓度样本检测具有相同的Ct值,表明重现性好。样本检验中,荧光定量PCR检测出的阳性样本高于普通PCR及培养法。结论:支原体荧光定量PCR法检测细胞样本及临床样本中支原体快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好。
- 倪红霞刘志辉郑学星王化磊扬松涛夏咸柱
- 关键词：TAQMAN探针支原体荧光定量PCR
- 扶正除疫颗粒对A型H1N1流感病毒感染小鼠T细胞亚群的影响被引量：6
- 2014年
- 目的:观察扶正除疫颗粒对A型H1N1流感病毒感染小鼠T细胞亚群的影响,探讨其抗A型H1N1流感病毒感染的作用特点和机制。方法:40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲对照组、扶正除疫组。正常对照组和病毒模型组以0.9%氯化钠溶液灌胃,另两组以达菲、扶正除疫颗粒水溶液灌胃,连续7d。除正常对照组外,其余各组于给药第3天,以FM1-6-E2滴鼻造模。每组于造模后3、6、9d分别取脾脏制备细胞悬液,采用流式细胞仪测定T细胞亚群的变化。结果:各组与同期病毒模型组相比,除第3天的CD3+T、第6天的CD4+T及第9天CD3+T和扶正除疫组CD4+T和百分率数值没有显著差异外,其余各组各时段的CD3+T、CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T百分率数值均有显著差异(P<0.01,P<0.05)。结论:扶正除疫颗粒对A型H1N1流感病毒感染引起的细胞免疫功能失常有一定的调节作用。提示该药物抗流感病毒的作用机制,可能是通过调整T细胞亚群的百分率及其CD4+T/CD8+T比值得以实现。
- 岳冬辉王化磊宫晓燕高玉伟王承宇于志君岳秀芳毕岩李霞李欣冯昊金宏丽齐瑛琳
- 关键词：流感H1N1病毒T细胞亚群免疫损伤
- 扶正除疫颗粒对H1N1流感病毒感染小鼠T细胞亚群的影响
- 目的：观察扶正除疫颗粒对A型H1N1流感病毒感染小鼠T细胞亚群的影响,探讨扶正除疫颗粒抗A型流感病毒感染的作用特点和机制.方法：将40只BALB/c/小鼠用随机数字表法分为4组：正常对照组,病毒模型组,达菲对照组,扶正除...
- 岳冬辉李欣冯昊金宏丽毕岩宫晓燕高玉伟王承宇王化磊于志君岳秀芳李霞
- 关键词：流感流感病毒T细胞亚群免疫损伤
- 实验动物与人兽共患传染病
- 人兽共患传染病的社会危害严重、经济损失巨大，威胁着公共卫生乃至国家安全。作为重要支撑条件的实验动物在人兽共患传染病防控研究中发挥着不可替代的作用。本文从人兽共患传染病的危害、实验动物的作用、实验动物在重要人兽共患传染病研...
- 夏咸柱高玉伟王化磊
- 关键词：人兽共患传染病实验动物资源利用
- 表达狂犬病病毒糖蛋白的稳转细胞株及其构建方法与应用
- 一种表达狂犬病病毒糖蛋白的稳转细胞株及其构建方法与应用，属于生物技术领域。本发明针对复制缺陷型RABV由于缺乏合成跨膜糖蛋白的能力，在未经改造的宿主细胞中只能进行单轮感染而不能组装子代病毒的问题，提供了一种表达狂犬病病毒...
- 王化磊李海伦李媛媛金宏丽张海丽黄培龚志远焦翠翠黄静波白玉洁张梦瑶
