黄小琼
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：贵州省科学技术基金贵州省教育厅自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人TIMP-2基因的克隆及其原核表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建人TIMP-2重组表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。方法提取人肝癌细胞(Hep G2)总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,插入克隆载体pMD18-T;酶切鉴定和测序后将TIMP-2导入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-TIMP-2。将重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导融合蛋白表达后用SDS-PAGE电泳检测并用western blot验证(蛋白质印迹法)。结果成功构建原核重组表达载体pGEX-TIMP-2,并在原核宿主BL21中大量表达融合蛋白GST-TIMP-2。结论克隆人TIMP-2基因并在原核生物中大量表达。
- 徐国强王伟孙达权黄小琼陈腾祥
- 关键词：PGEX-4T-1原核表达肝癌
- 肝星形细胞分泌的趋化因子CXCL1在肝癌EMT中的作用
- 目的：探讨人肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)对肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721)上皮间质转化的作用及其机制。 方法:采用条件培养法培养肝癌细胞,利用细胞划痕和Transwell...
- 黄小琼
- 关键词：肝癌上皮间质转化肝星形细胞趋化因子
- 文献传递
- 人TIMP-2蛋白在肝癌细胞迁移与侵袭中的作用被引量：2
- 2016年
- 目的通过原核表达获取人TIMP-2蛋白,探讨TIMP-2在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。方法以SM M C-7721肝癌细胞总RNA为模板,用RT-PCR技术扩增出人TIM P-2基因c DNA,通过基因重组技术构建原核表达载体p GEX-TIMP-2并在大肠杆菌Origami(DE3)中诱导表达人TIMP-2重组蛋白。采用亲和层析法纯化表达产物,并用Western blotting鉴定;用RNAi技术和添加外源蛋白方法分析TIMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的作用;荧光定量PCR、Western blotting检测siRNA-TIMP-2转染细胞后肝癌细胞内源性TIMP-2的mRNA及蛋白表达水平。结果外源添加的TIMP-2蛋白抑制肝癌细胞迁移及侵袭的能力,而RNAi技术能抑制内源的TIMP-2蛋白增强肝癌细胞迁移及侵袭的能力;肝星状细胞的条件培养液能够促进肝癌细胞迁移和侵袭,而这种作用能够被TIMP-2蛋白抑制。结论肝癌微环境中的TIMP-2蛋白水平与肝癌细胞的迁移和浸润密切相关。
- 王伟曹煜姗孙达权黄小琼徐国强
- 关键词：肝细胞癌
- 肝星形细胞条件培养液对肝癌细胞上皮-间质转化的影响
- 2016年
- 目的:探讨人肝星形细胞条件培养液(HSC-CM)对肝癌细胞(HCC)上皮-间质转化的影响。方法:采用HSC-CM培养肝癌细胞(SMMC-7721),细胞划痕实验和transwell小室侵袭实验检测HSC-CM对SMMC-7721迁移和侵袭的影响,激光共聚焦显微术(LSCM)和Western blot分析CM培养下SMMC-7721中上皮标志物E-cadherin、间质标志物N-cadherin和Vimentin的表达变化,Western blot检测核转录因子Snail的表达水平。结果:HSC-CM培养的SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力增强,和常规培养的SMMC-7721细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05);SMMC-7721上皮标志物E-cadherin蛋白表达下调、间质标志物N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白表达上调,核转录因子Snail表达上调,与常规培养组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HSC-CM促进了SMMC-7721的上皮-间质转化。
- 徐国强黄小琼孙达权王伟陈腾祥
- 关键词：星形细胞上皮-间质转化
