李德志
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 自发诱导菌株的筛选及前噬菌体phiv142--3对禽致病性大肠杆菌定殖能力的影响
- 在世界范围内，禽致病性大肠杆菌（AvianpathogenicEscherichiacoli，APEC）对养禽业造成了巨大的经济损失，APEC通过气溶胶传播，呼吸道感染，引起脑膜炎、肝周炎、心包炎、气囊炎等，甚至引发败血...
- 李德志
- 关键词：禽致病性大肠杆菌噬菌体前噬菌体
- 一株分离自流浪猫的猪链球菌9型的分子生物学鉴定被引量：5
- 2016年
- 【目的】猪链球菌是一种能感染人和猪的人畜共患病病原,并且还可零星感染多种哺乳动物。本试验旨在调查流浪猫携带猪链球菌的情况。【方法】在流浪猫身上分离猪链球菌,经血清凝集实验和PCR检测,鉴定其血清型;经多序列位点分型分析,鉴定其ST型;将所分离的细菌与Gen Bank上已公布的猪链球菌构建16S rRNA的系统发育树,分析该菌株与其他猪链球菌的亲缘关系;药敏纸片法分析其耐药性;小鼠攻毒试验分析其毒力。【结果】本试验在流浪猫身上分离到一株猪链球菌,命名为m70,其血清型为9型。多序列位点分型显示,m70株属于一个新的ST型。与Gen Bank上已公布的猪链球菌16S rRNA进行系统发育树分析,结果显示m70属于一个单独的分支。m70与临床菌株的耐药情况相似,对四环素耐药,对红霉素中介耐药,对氨苄西林敏感。小鼠攻毒试验显示,感染10~8 CFU剂量m70的小鼠,死亡率达到60%–80%（3/5–4/5）,3次攻毒试验的平均LD（50）为5.1×107 CFU;而本实验室保存的猪链球菌强毒株HA9801感染小鼠的平均LD（50）为3.9×107 CFU,两者之间没有显著差异（P〈0.05）。【结论】从流浪猫身上分离得到的猪链球菌m70属于优势血清型,且毒力较强,提示一些流行血清型的猪链球菌强毒株具有从流浪猫传染人的潜在风险。
- 汤芳潘子豪李德志马琳熊毅陆承平
- 关键词：猪链球菌野猫抗生素抗性
- auf基因对禽致病性大肠杆菌鸭源株的细胞黏附及动物致病性的影响被引量：1
- 2015年
- [目的]本文旨在研究禽致病性大肠杆菌auf基因的功能。[方法]利用Red同源重组技术敲除auf基因,构建DE205BΔauf缺失菌株,并分析缺失菌株和野生菌株的生物学特性及致病力差异。[结果]生物学特性试验表明:与野生菌株相比,缺失菌株的生长特性未发生明显改变,但对酸性(乙酸,pH 4.0和5.0,20 min)、碱性(Tris-HCl,pH 10.0,30 min)和高渗环境(2.5 mol·L-1NaCl,1 h)的耐受能力极显著降低(P<0.001),其相对存活率分别降低86.7%、77.3%、59.0%和98.3%;抗血清杀菌能力也显著下降,在100%、50%及25%稀释度的血清中极显著降低(P<0.01);DE205BΔauf缺失菌株对DF-1细胞的相对黏附能力显著降低,下降了80.7%。动物试验表明:DE205BΔauf对小鼠及雏鸭的致病力及在其体内的定殖能力均降低。[结论]auf基因在禽致病性大肠杆菌的感染及致病过程中发挥重要作用。
- 王颢锦汤芳诸葛祥凯胡林陈玲李亚芯李德志戴建君
- 关键词：禽致病性大肠杆菌菌毛
- 苏北地区规模化猪场产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及灭活疫苗效果评估被引量：5
- 2020年
- [目的]产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起仔猪腹泻的重要病原菌,本研究通过调查苏北地区规模化猪场ETEC的流行情况,分析其生物学特性,研制具有免疫保护效果的优势血清型菌株的灭活疫苗,以期对苏北地区ETEC的防控提供参考。[方法]从苏北地区规模化猪场采集3-30日龄的仔猪新鲜粪样、肛拭子及小肠组织样,分离出ETEC,对分离菌株进行血清型鉴定、耐药性测定、小鼠致病力测定;最后通过动物免疫试验研究优势血清型菌株灭活疫苗对小鼠的免疫保护效果。[结果]从21个规模化猪场采集病料562份,通过PCR鉴定及测序得到141株ETEC;血清凝集试验鉴定出85株菌的O抗原血清型,其中08、0101和0128为优势血清型,占定型菌株的61.2%(52/85),其他血清型包括09、03、020、0148、0149等;分析141株ETEC对14种常见抗生素的耐药情况,得出分离株对新霉素、红霉素、四环素、庆大霉素、强力霉素、阿莫西林、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑高度耐药,耐药率均高达80%以上;对恩诺沙星敏感性较高,敏感率达50.4%(71/141);对多粘菌素B和头孢噻肟中介耐药,占比分别为66%(93/141)和51.8%(73/141);多重耐药现象严重,其中10重耐药的菌株占比最大,为19%(27/141);小鼠攻毒试验测得08血清型强毒株YC-6的半数致死量(median lethal dose,LD50)为1.4×10^7 CFU/只,最低致死量(minimum lethal dose,MLD)为3×10^7 CFU/只;08血清型强毒株YC-6和0101血清型强毒株LYG-3制备的单价灭活疫苗对小鼠的保护率均达到100%,因此利用08血清型强毒株YC-6和0101血清型强毒株LYG-3研制二价灭活疫苗,结果显示该二价疫苗对感染不同血清型ETEC小鼠的保护率在83%以上。[结论]本研究通过对苏北地区ETEC的流行病学调查,得出其优势血清型,并研制出针对对优势血清型免疫保护效果较好的二价灭活疫苗,给临床ETEC的监测和防控提供参考。
- 杨德鸿张鹏于沛欣任建鸾李德志王娟芳孙建和汤芳戴建君
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌血清型耐药性灭活疫苗
- nrdF基因介导禽致病性大肠杆菌DE205B的抗氧化应激
- 2020年
- [目的]本文旨在研究前噬菌体phiv205-3片段对禽致病性大肠杆菌DE205B氧化应激耐受力的影响。[方法]利用Red同源重组技术敲除前噬菌体phiv205-3片段,构建前噬菌体片段缺失株DE205BΔphiv205-3,检测野生株和前噬菌体片段缺失株对氧化应激的耐受力;进一步敲除前噬菌体片段中氧化应激耐受相关基因nrdE、nrdF、nrdH、nrdI,构建前噬菌体基因缺失株DE205BΔnrdE、DE205BΔnrdF、DE205BΔnrdH和DE205BΔnrdI,并通过基因序列分析和荧光定量PCR(qPCR)检测这些缺失菌株和野生菌株的氧化应激耐受力。[结果]与野生株相比,前噬菌体片段缺失株DE205BΔphiv205-3氧化应激耐受力下降33%(P<0.05);qPCR检测结果显示,前噬菌体基因nrdF在氧化应激情况下转录水平显著提高(P<0.05);对构建前噬菌体单基因缺失株检测结果显示:与野生株相比,缺失株DE205BΔnrdF在氧化应激环境下的存活率下降21%(P<0.05),而缺失株DE205BΔnrdE、DE205BΔnrdH和DE205BΔnrdI的存活率无显著变化。[结论]前噬菌体片段编码的nrdF基因有助于增强宿主细菌DE205B氧化应激耐受力。
- 姜珊汤芳刘云李德志任建鸾张中华巩倩雯戴建君
- 关键词：前噬菌体禽致病性大肠杆菌氧化应激
- 1株可裂解肠道内和肠道外大肠杆菌的宽宿主谱噬菌体的分离与特性分析被引量：2
- 2015年
- 本试验从猪粪中分离得1株大肠杆菌的烈性噬菌体ΦNJ14.用实验室保存的大肠杆菌对其裂解谱进行检测,发现ΦNJ14能裂解27株大肠杆菌,是一株对肠道内和肠道外大肠杆菌均有效的宽宿主谱的噬菌体.电镜观察结果表明,ΦNJ14头部呈狭长的六面体,有一个可伸缩的尾部,属于肌尾噬菌体科成员.ΦNJ14的生物学特性鉴定结果显示,其效价为1.28×10^10PFU/mL,最佳感染复数（MOI）为100;对60℃以下的温度具有较好的耐受力,在70℃培养20min后活力显著下降;ΦNJ14对碱的耐受力较强,在pH4-11之间都能保持较高的活力;一步生长曲线检测结果显示,ΦNJ14潜伏期为20 min,复制周期为140 min.提示噬菌体ΦNJ14对致病性大肠杆菌具有一定的防控潜力.
- 姜珊袁婷李德志王依帆陆承平汤芳戴建君
- 关键词：大肠杆菌噬菌体生物学特性
- 前噬菌体对禽致病性大肠杆菌DE205B环境耐受力的影响被引量：2
- 2020年
- 禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)DE205B基因组中存在前噬菌体phiv205-1。本文利用RED同源重组技术构建前噬菌体phiv205-1缺失株,采用倍比稀释的方法检测野生株DE205B和前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1在酸、盐和氧化应激等不利条件下的存活率,分析前噬菌体对APEC环境适应力的影响。结果显示,与野生株相比,前噬菌体缺失株DE205BΔphiv205-1酸性耐受力下降了56.62%(P<0.001),在氧化应激条件下的存活率下降了91.78%(P<0.001)。为研究前噬菌体phiv205-1中影响宿主细菌对酸和氧化应激耐受的基因,采用real-time PCR检测了部分phiv205-1基因在氧化应激环境中的表达量,结果显示基因2971、2989、3327及Erf的表达量显著升高。进一步构建了Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf的单基因缺失株,环境耐受实验结果显示,与野生株相比,单基因缺失株Δ2971、Δ2989、Δ3327及ΔErf在H2O2环境下的存活率依次降低了89.32%、67.79%、27.84%和71.29%。研究表明,前噬菌体phiv205-1增加了细菌对环境压力的抵抗力,为宿主菌在恶劣条件下的生存提供了多种益处。
- 刘云张中华姜珊钱新杰巩倩雯李德志汤芳戴建君
- 关键词：前噬菌体禽致病性大肠杆菌氧化应激
- 禽致病性大肠杆菌O1、O2、O78血清型三重PCR检测方法的建立被引量：6
- 2020年
- [目的]本试验旨在建立一种能同时检测禽致病性大肠杆菌O1、O2和O 783种血清型的三重PCR检测方法。[方法]根据O1、O2和O 783种血清型的特异性基因片段设计并合成引物,分别提取O1、O2和O 78血清型禽致病性大肠杆菌的DNA作为模板,优化三重PCR反应条件,进行特异性和敏感性检测,并对临床模拟样品进行检测。[结果]在三重PCR的25μL反应体系中,dNTP 1.5μL,MgCl 22.5μL,Taq DNA酶0.6μL,O1、O2、O78最佳引物加入量分别为0.6、0.2、0.6μL;最佳退火温度为55.9℃。三重PCR的特异性好,3种血清型之间无交叉反应;对146株不同血清型的大肠杆菌进行检测,准确率为99.32%(145/146),用金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和枯草芽胞杆菌进行特异性检测时,没有出现非特异性扩增。三重PCR敏感性高,以单一血清型DNA为模板时,O1和O2血清型的DNA最低检测限均为0.1 ng·μL^-1,O 78血清型的DNA最低检测限为0.02ng·μL^-1;以O 1、O2和O78混合DNA为模板时,最低检测限为0.05ng·μL^-1。对18份临床模拟样品进行检测,准确率为94.4%(17/18)。[结论]建立了一种能同时检测O1、O2和O783种血清型禽致病性大肠杆菌的三重PCR方法,方法特异性好,敏感性高,适用于临床上禽大肠杆菌病的快速检测。
- 王娟芳戴建君姜敏任建鸾李德志张鹏孙建和汤芳
- 关键词：三重PCR禽致病性大肠杆菌血清型特异性敏感性
