戴建君
- 作品数：98 被引量：282H指数：9
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 裂解性大肠杆菌噬菌体制剂及其制备和应用
- 本发明公开了一种裂解性大肠杆菌噬菌体制剂及其制备和应用，所述制剂包括噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002；其中，噬菌体PNJ1902的保藏编号为GDMCC NO：61890‑B1，噬菌体PSD2001的保...
- 汤芳戴建君王瑜欣薛峰李一昊曾颃
- 文献传递
- 苏北地区规模化猪场产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及灭活疫苗效果评估被引量：5
- 2020年
- [目的]产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起仔猪腹泻的重要病原菌,本研究通过调查苏北地区规模化猪场ETEC的流行情况,分析其生物学特性,研制具有免疫保护效果的优势血清型菌株的灭活疫苗,以期对苏北地区ETEC的防控提供参考。[方法]从苏北地区规模化猪场采集3-30日龄的仔猪新鲜粪样、肛拭子及小肠组织样,分离出ETEC,对分离菌株进行血清型鉴定、耐药性测定、小鼠致病力测定;最后通过动物免疫试验研究优势血清型菌株灭活疫苗对小鼠的免疫保护效果。[结果]从21个规模化猪场采集病料562份,通过PCR鉴定及测序得到141株ETEC;血清凝集试验鉴定出85株菌的O抗原血清型,其中08、0101和0128为优势血清型,占定型菌株的61.2%(52/85),其他血清型包括09、03、020、0148、0149等;分析141株ETEC对14种常见抗生素的耐药情况,得出分离株对新霉素、红霉素、四环素、庆大霉素、强力霉素、阿莫西林、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑高度耐药,耐药率均高达80%以上;对恩诺沙星敏感性较高,敏感率达50.4%(71/141);对多粘菌素B和头孢噻肟中介耐药,占比分别为66%(93/141)和51.8%(73/141);多重耐药现象严重,其中10重耐药的菌株占比最大,为19%(27/141);小鼠攻毒试验测得08血清型强毒株YC-6的半数致死量(median lethal dose,LD50)为1.4×10^7 CFU/只,最低致死量(minimum lethal dose,MLD)为3×10^7 CFU/只;08血清型强毒株YC-6和0101血清型强毒株LYG-3制备的单价灭活疫苗对小鼠的保护率均达到100%,因此利用08血清型强毒株YC-6和0101血清型强毒株LYG-3研制二价灭活疫苗,结果显示该二价疫苗对感染不同血清型ETEC小鼠的保护率在83%以上。[结论]本研究通过对苏北地区ETEC的流行病学调查,得出其优势血清型,并研制出针对对优势血清型免疫保护效果较好的二价灭活疫苗,给临床ETEC的监测和防控提供参考。
- 杨德鸿张鹏于沛欣任建鸾李德志王娟芳孙建和汤芳戴建君
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌血清型耐药性灭活疫苗
- 饲料中肠出血性大肠杆菌O157∶H7双重PCR检测方法的建立被引量：2
- 2016年
- 根据肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157∶H7的O抗原编码基因rfb E和H抗原编码基因fli C分别设计引物,建立双重PCR方法。饲料样品人工污染EHEC O157∶H7后进行增菌培养,利用双重PCR进行检测EHEC O157∶H7。结果表明:建立的PCR方法能够特异性扩增出目的条带,敏感性可达到100 cfu细菌。双重PCR方法可以有效地检测出饲料中人工污染的EHEC O157∶H7,人工污染饲料样品经4 h预增菌处理后,该方法的检测下限为20 cfu细菌。本研究建立的双重PCR方法可快速、特异地检测出饲料中污染的EHEC O157∶H7,可用于饲料中EHEC O157∶H7的检测及流行病学调查。
- 陈玲王少辉任建鸾诸葛祥凯汤芳戴建君
- 关键词：肠出血性大肠杆菌饲料
- 非洲猪瘟病毒pp62蛋白单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2022年
- pp62蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)CP530R基因编码的多聚蛋白前体,可被蛋白水解酶切割形成成熟蛋白p35、p15和p8,与pp220多聚蛋白前体的加工产物组装成病毒核壳。本研究参考ASFV China/2018/AnhuiXCGQ毒株基因序列,分析后选取CP530R基因N端(1—612 bp)及C端(784—1593 bp),分别构建原核表达质粒pET-28a-pp62-N和pET-28a-pp62-C;转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达pp62蛋白;再用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和阳性克隆筛选后,获得4株可稳定分泌pp62单克隆抗体的杂交瘤细胞。Western-blot检测ASFV感染PAM细胞中pp62剪切体的结果显示,1株仅识别pp62蛋白,1株仅识别p35蛋白,1株仅识别p15蛋白,1株可识别pp62和p8蛋白。IFA鉴定结果显示,4株均能与ASFV感染PAM细胞产生特异性绿色荧光。本研究为建立ASFV诊断方法和研究pp62的生物学功能奠定了生物材料基础。
- 储珺赵普张婕妮王振忠苗雨润鲍晨沂郑龙三吴晓东钱莺娟戴建君
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体
- 依福地平对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究
- 2024年
- 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是猪流行性腹泻(PED)的病原。本研究通过CCK-8、细胞ELISA、Western blot、时间过程分析、药物抑制病毒吸附和入胞试验,探究了依福地平对PEDV的抑制作用。结果表明,依福地平在20μmol/L浓度范围内,对Vero-E6和Marc-145细胞毒性较低;Western blot结果表明,依福地平能够显著降低宿主细胞中PEDV-N蛋白水平,主要抑制PEDV感染的入胞阶段。研究还发现,依福地平能抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒和猪伪狂犬病毒感染宿主细胞,是一类潜在的广谱抗病毒药物。
- 张财盛陈欢司安琪赵普齐传翔钱莺娟郑龙三戴建君
- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 奶牛乳房炎四种致病菌PCR核酸免疫层析试纸条快速检测方法的建立及应用被引量：11
- 2020年
- 为了开发检测导致奶牛乳房炎的无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和停乳链球菌这四种重要致病菌的PCR核酸免疫层析试纸条方法,本研究采用柠檬酸还原法制备10 nm的胶体金溶液,选用优化的10μL 1 mol/L碳酸钾溶液调节pH和5μL异硫氰酸荧光素抗体偶联金颗粒,并使用优化的封闭液(10%BSA、0.25%PEG2000、0.05%吐温-20、0.05%Triton-X100)进行封闭,将地高辛抗体和山羊抗鼠二抗分别喷涂在检测线和质控线上,烘干并组装成试纸条,进行细菌的纯培养物和鲜牛奶加样检测。结果显示,所制备的PCR核酸免疫层析试纸条和凝胶电泳均具有较好的特异性,最低检测限要比凝胶电泳高10倍,在模拟污染牛奶样品测试中,试纸条仍然具有很好的特异性且灵敏度比凝胶电泳的高。上述结果表明,本研究建立的PCR核酸免疫层析试纸条检测方法具有良好的临床应用潜力。
- 陈诗胜张正荣任建鸾曾德新薛峰蒋原郭德华戴建君
- 关键词：奶牛乳房炎PCR胶体金
- 用于大肠杆菌O157:H7血清型致病菌检测的试剂、试剂盒及应用
- 本发明公开了一种用于大肠杆菌O157:H7血清型致病菌检测的试剂、试剂盒及应用。所述检测试剂包括：主要由第一引物和第二引物组成的引物对，所述第一引物和第二引物的序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示...
- 薛峰陈诗胜戴建君陈伟蒋原曾德新任建鸾汤芳余晓峰
- 文献传递
- 牛结节性皮肤病病毒的单克隆抗体及其应用
- 本发明提供牛结节性皮肤病病毒的单克隆抗体及其应用，涉及医药技术和生物监测技术领域。该牛结节性皮肤病病毒的单克隆抗体，是由杂交瘤细胞株MP2E4分泌，所述杂交瘤细胞株MP2E4的保藏编号为CCTCC NO:C202393。...
- 薛峰温渊周文亚王天敏戴建君汤芳董雨豪
- 大肠杆菌O157:H7噬菌体鸡尾酒喷雾干燥微囊粉剂的制备及其应用
- 2023年
- 【目的】提高噬菌体在常温环境下的保存稳定性,解决噬菌体鸡尾酒在体内失活的问题,为噬菌体对肠道疾病的治疗提供参考依据。【方法】本研究采用喷雾干燥技术制备噬菌体鸡尾酒微球粉末,通过单因素试验和正交试验确定最佳制备条件,并对其特性进行研究,比较其与游离噬菌体在常温环境和体内环境的稳定性差异,并通过口服给药的方式对大肠杆菌(Escherichia coli)O157:H7导致的肠道疾病进行治疗。【结果】本研究以海藻糖和亮氨酸组合为保护剂制备了一种具有热稳定性的噬菌体鸡尾酒微球粉末,试验结果显示,海藻糖和亮氨酸质量比为9:1时,设置进料速度为7.5 mL/min、海藻糖浓度为2%、入口温度为130℃、噬菌体鸡尾酒悬液与保护剂溶液体积比为1:50,噬菌体滴度损失最小,仅下降(0.623±0.235)log10 PFU/g。其在常温条件下保存6个月,噬菌体鸡尾酒滴度损失(0.862±0.082)log10 PFU/g,较游离噬菌体具有更长的保存稳定性,且其于体内环境的稳定性和治疗效果均优于游离噬菌体鸡尾酒。【结论】采用喷雾干燥法配合合适的保护剂配方可制得具有生物活性和热稳定性的噬菌体鸡尾酒微球粉末,延长其保质期,便于常温条件下的保存运输,使噬菌体制剂从实验室方向转化为工业方向的规模化生产提供参考依据。且噬菌体微球粉末清除肠道内大肠杆菌的能力更强、速度更快,是一种具有体内治疗发展潜力的口服给药剂型。
- 李瑾王瑜欣王许航李静付开来戴建君汤芳汤芳
- 关键词：大肠杆菌O157:H7
- vcrV基因对副溶血弧菌生物学特性及Ⅲ型分泌系统1效应蛋白易位的影响
- 2022年
- 【背景】副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)具有两套Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)。T3SS1通过向宿主细胞分泌效应蛋白发挥致病作用,vcrV基因位于T3SS1编码基因簇。【目的】以vcrV基因为研究对象,探索其对副溶血弧菌生物学特性及T3SS1致病机制的影响。【方法】以副溶血弧菌POR-1株为参考菌株,利用同源重组技术构建vcrV基因缺失株ΔvcrV和回补株CΔvcrV,比较各菌株在生长性能、生物被膜形成能力、细胞黏附及细胞毒性等生物学特性的差异,应用Western Blot检测T3SS1诱导条件下POR-1、ΔvcrV和CΔvcrV等菌株效应蛋白分泌量,进一步利用具有过表达载体pMMB207-vp1683-CyaA的各菌株侵染HeLa细胞,通过Western Blot检测细胞内效应蛋白VopR(Vp1683)的易位量。【结果】与基础菌株POR-1相比,缺失vcrV基因不影响副溶血弧菌的生长性能、生物被膜形成能力及细胞黏附等生物学特性,显著降低了对HeLa细胞的毒性作用,具有过表达载体的POR-1、ΔvcrV和CΔvcrV等菌株效应蛋白VopR的分泌差异不显著,ΔvcrV菌株侵染HeLa细胞的过程中,VopR的易位量显著下降。【结论】vcrV基因参与T3SS1介导的细胞毒性过程,对于副溶血弧菌T3SS1效应蛋白易位是必需的,具有过表达载体的ΔvcrV仍能分泌效应蛋白VopR。
- 李婉君薛婷月廉乐乐任建鸾汤芳薛峰戴建君
- 关键词：副溶血弧菌生物学特性
