王亚东
- 作品数：72 被引量：203H指数：8
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 体外拼装凋亡素基因被引量：7
- 2005年
- 目的以凋亡素基因为例,探讨用寡核苷酸片段体外拼装基因的方法。方法按已知的凋亡素基因序列(GeneBank登录号:AY171617),设计40bp的凋亡素基因寡核苷酸片段,并将其中的172位(BglII,agatct→agatcc)和306位碱基(HindIII,aagctt→aatcct)进行同义突变,Taq消除这两个酶切位点。在pfu酶的PCR系统中,对寡核苷酸片段进行拼装和扩增。产物稀释后进一步纯化扩增,在Tag酶存在的条件下对产物两末端加T,然后TA克隆于pGEM-Teasy载体中。阳性克隆经测序鉴定。结果凋亡素基因寡核苷酸片段第1次PCR拼装后,产物呈拖尾状。但产物经进一步稀释,并用两未端引物进行2次扩增后,即可见明确的产物带及其他梯形带状产物。目的产物TA克隆后,筛选得到阳性克隆,其经测序鉴定,与设计的凋亡素基因序列完全一致。结论体外基因拼装法是一种非常有效的基因克隆方法,可用于基因或载体的合成,及一次性对基因进行广泛的突变。
- 陈学清王亚东孙勇段佑才马高峰
- 关键词：凋亡素聚合酶链式反应
- 巨噬细胞移动抑制因子蛋白在胰腺癌组织表达的临床意义被引量：10
- 2004年
- 目的观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学技术对36例胰腺癌组织中的MIF蛋白表达进行研究。结果胰腺癌组织中的MIF表达率为69.4%(25/36),高于正常胰腺组织表达率0(0/10)。统计学分析显示,MIF蛋白表达与胰腺癌病理分级呈显著相关(P<0.01),与胰腺癌临床分期及有无局部淋巴结转移间无显著相关(P>0.05)。结论MIF蛋白表达有可能与胰腺癌的发生有关。
- 金志清智发朝陈学清王亚东
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子胰腺癌肿瘤组织蛋白表达
- mtDNA突变与大肠癌发病关系的基础研究
- 2007年
- 目的观察大肠癌突变型mtDNA转导NIH3T3细胞后转染细胞的生物学特性。方法通过脂质体法(lipofection2000TM)将大肠癌细胞突变的mtDNA真核表达载体转染NIH3T3细胞,利用G418抗性筛选克隆细胞;用荧光标记的染色体原位杂交(FISH)观察mtDNA在核内的整合情况;观察转染前后细胞异型性及进行染色体核型分析;PCR法检测转染细胞线粒体突变情况;流式细胞仪(FCM)检测转染细胞的凋亡情况;用四唑盐比色法(MTT)测定不同组间细胞增殖的吸光度值。结果突变的大肠癌mtDNA可通过影响NIH3T3细胞的mtDNA的突变、多态性和通过外源性mtDNA在核内的整合从而影响NIH3T3细胞的染色体核型及细胞增殖、凋亡等生物学行为。结论突变型mtDNA可能参与大肠癌的发生与发展。
- 肖冰宋卫兵姬宏莉阎丽赖卓胜王亚东
- 关键词：线粒体DNA突变荧光原位杂交细胞增殖
- 胰腺癌组织中巨噬细胞移动抑制因子蛋白表达的临床意义被引量：8
- 2004年
- 金志清智发朝任玥欣陈学清王亚东
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子胰腺癌组织蛋白表达预后不良早期症状
- Fas通路通过激活ERK1/2通路在结肠癌细胞中诱导上皮-间质转化＊被引量：3
- 2013年
- 目的:探索Fas通路在结肠癌细胞中诱导上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子机制。方法:分别对结肠癌细胞SW480及DLD1予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理。作用3d后分别提取实验组和对照组细胞的总蛋白、总RNA,并进行Western blot、RT-PCR检测,分析FasL作用下结肠癌细胞的上皮标记物、间质标记物以及EMT相关的转录因子的表达状况。在低剂量FasL作用3d后行免疫荧光检测,观察EMT相关转录因子在细胞内的分布情况。建立稳定敲除Snail及Twist的结肠癌细胞系,再予以低剂量FasL刺激,采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程。对结肠癌细胞SW480予以低剂量FasL(12.5 ng/mL)处理后,通过Western blot检测实验组和对照组细胞ERK1/2通路及p38通路的激活状况。对SW480细胞进行信号通路抑制剂的预处理,再予以低剂量FasL刺激,采用Western blot、RT-PCR检测是否发生EMT过程,从而探索Fas通路诱导EMT的可能机制。结果:低剂量FasL可使结肠癌SW480和DLD1细胞的上皮标记物表达下调,间质标记物表达上调,EMT相关转录因子在细胞核周聚集,细胞发生梭形改变,提示发生EMT。而将结肠癌细胞的Snail或Twist基因敲除后,FasL的上述诱导作用明显减弱。低剂量FasL可激活结肠癌细胞的ERK1/2通路激活,而ERK抑制剂可减弱FasL诱导的EMT过程。结论:Fas通路可能通过激活ERK1/2通路诱导结肠癌细胞发生EMT。
- 李文静石萌王亚东郑浩轩
- 关键词：结肠癌上皮间质转化
- Fas信号通路通过诱导EMT促进胃癌细胞的侵袭转移
- 引言：Fas又称Apo-1或CD95分子,属于肿瘤坏死因子/神经生长因子受体家族成员.FasL是其天然配体,在体内主要以膜结合形式存在,Fas/FasL结合是激活体内Fas凋亡信号的有效途径.最近研究显示,Fas信号通路...
- 石萌李文静王亚东郑浩轩
- 关键词：EMTERK1/2信号通路
- MPP3表达减少与大肠癌发病的关系
- 2013年
- 目的研究MPP3表达减少与大肠癌发病的关系。方法 RT-PCR法检测正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌的MPP3 mRNA表达;Western Blotting法检测正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌的MPP3蛋白表达。结果大肠腺瘤中MPP3表达无明显减少(P>0.05),部分大肠癌组织中MPP3表达减少,且有淋巴结转移患者比无淋巴结转移患者更常见(P<0.05),Dukes C期和D期患者比Dukes A期和B期患者更常见(P<0.05)。结论 MPP3表达减少在大肠癌中为常见现象,而且在晚期肿瘤更明显,因此,MPP3在大肠癌发病中可能发挥重要作用。
- 陈科全翟国栋覃振明陈学清王亚东
- 关键词：大肠腺瘤大肠癌
- 沙棘原花青素对应激性胃溃疡大鼠上皮细胞凋亡与增殖的影响被引量：12
- 2006年
- 目的探讨沙棘原花青素对应激性胃溃疡大鼠上皮细胞凋亡与增殖的影响及其可能的机制。方法60只♂W ist-ar大鼠随机分为6组:正常组,对照组,低、中、高剂量组及雷尼替丁阳性对照组。采用束缚-浸水应激的方式造应激性胃溃疡模型,造模前灌胃不同剂量的SBPC或阳性药物。测定溃疡指数、大鼠血浆EGF及NO的水平;大鼠血浆NOS及iNOS的活性;免疫组化的方法测定胃粘膜组织中iNOS、EG-FR及PCNA的表达;采用原位末端标记法检测胃粘膜上皮细胞的凋亡。结果与对照组相比,高剂量组SBPC(150 mg.kg-1)的溃疡指数明显降低(P<0.01);血浆EGF的水平升高(P<0.05),血浆NO的浓度(P<0.01)降低;NOS及iNOS的活力降低(P<0.05);粘膜中的iNOS的表达降低(P<0.01),EGFR的表达增强((P<0.01),PCNA的表达增强(P<0.05),凋亡指数降低(P<0.05)。结论SBPC可能通过调节EGF和NO促进大鼠的细胞增殖抑制细胞凋亡,从而对应激性胃溃疡的发生起保护作用。
- 徐晓云潘思轶谢笔钧王亚东陈楚第
- 关键词：应激胃溃疡
- 人源性高分化肝癌细胞株HL1017及其构建方法
- 本发明公开了人源性高分化肝癌细胞株HL1017，其保藏号为CCTCC？NO：C201357，具有肝脏最重要的合成、代谢、解毒功能。同时，本发明还公开人源性高分化肝癌细胞株HL1017的构建方法。
- 刘思德燕群李爱民邓丽娟王亚东
- 文献传递
- 炎症小体抑制剂CY-09用于制备治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物的用途
- 本发明涉及炎症小体抑制剂CY‑09的新用途，具体是涉及炎症小体抑制剂CY‑09用于制备治疗非酒精性脂肪性肝炎的药物的用途。本发明的实验结果表明，炎症小体抑制剂CY‑09可以显著降低小鼠的空腹血糖、糖耐量和胰岛素抵抗，并缓...
- 孙康悦李跃刘思德王静蓝智贤王亚东李爱民
- 文献传递
