付成华
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：天津师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化
- 2015年
- 目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度，分别用梯度为10％～30％和10％-45％的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体；然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心；再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1．5ml离心管中，测量每一个样品的吸光度值A。并提取其中的蛋白质，利用WesternBlot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位。结果核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上。结论利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体。该法分离效果好，操作简单，为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法。
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体
- 核糖体蛋白RPL15多克隆抗体的制备与细胞内定位
- 2016年
- 为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗体,且该抗体可以特异性识别RPL15蛋白.免疫荧光实验表明RPL15定位于细胞质和细胞核中,主要定位于核仁并呈点状分布,且与UBF、FBL和C23存在部分共定位.
- 梁爽爽冀美超胡晓晴付成华朱长军董智雄
- 关键词：核糖体多克隆抗体免疫荧光细胞内定位
- 染色体驱动蛋白KIF4A参与调控肺癌细胞顺铂耐药
- 2015年
- 目的研究染色体驱动蛋白KIF4A参与肺癌细胞顺铂耐药过程。方法采用逆转录PCR（RT．PCR）及Western Blot实验检测并比较肺癌细胞株A549及其顺铂耐药衍生细胞株A549／DDP中染色体驱动蛋白KIF4A的表达。先用细胞转染技术在A549细胞中过表达外源性KIF4A，或用RNA干扰（RNAi）技术敲降A549／DDP细胞中内源性KIF4A的表达，再用顺铂处理上述细胞，最后通过噻唑蓝（MTY）比色法检测细胞的增殖能力。结果染色体驱动蛋白KIF4A在A549／DDP细胞中mRNA和蛋白质的表达均高于A549细胞。在A549细胞中过表达外源性KIF4A，导致细胞耐受顺铂药物，且细胞增殖能力不受顺铂药物处理的影响。相反，在A549／DDP细胞中敲降KIF4A的表达，导致A549／DDP细胞对顺铂药物敏感，细胞增殖能力下降。结论驱动蛋白分子KIF4A参与调控肺癌细胞A549的顺铂耐药过程，故KIF4A可作为潜在的有效治疗肺癌顺铂耐药的新型生物靶标。
- 付成华胡晓晴梁爽爽冀美超董智雄朱长军
- 关键词：肺癌顺铂耐药
- A549-KIF4A过表达细胞株的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 非小细胞肺癌A549细胞中驱动蛋白KIF4A的表达量极低.为研究KIF4A在肺癌发生和发展过程中的作用,利用脂质体转染的方法,将p EGFP-KIF4A质粒和p EGFP-C1质粒分别转入A549细胞中,用G418筛选得到单克隆,并扩增得到稳定表达GFP-KIF4A和GFP的细胞株.利用Western Blot以及免疫荧光染色法对得到的细胞株进行鉴定.结果表明:A549-GFP-KIF4A细胞中GFP-KIF4A蛋白的表达水平较高,A549-GFP-C1中仅表达GFP蛋白.免疫荧光检测表明:A549-GFP-KIF4A过表达细胞中GFP-KIF4A荧光融合蛋白的定位与内源KIF4A的定位相同.
- 宋翔付成华朱长军董智雄
- 关键词：驱动蛋白脂质体转染免疫荧光检测细胞株
- 驱动蛋白Kif22多克隆抗体的制备、纯化及免疫特异性检测
- 2017年
- 为深入研究驱动蛋白分子Kif22在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒p HIS8-Kif22C156和p GEXKG-Kif22C156,并在细菌BL-21中诱导表达HIS8-Kif22C156和GST-Kif22C156.用Ni-NTA琼脂糖结合HIS8-Kif22C156蛋白进行蛋白纯化,然后免疫新西兰大白兔制备特异性多克隆抗Kif22抗体;用谷胱甘肽琼脂糖结合GSTKif22C156蛋白进行交联,纯化多克隆兔抗Kif22抗体.蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光染色实验证明纯化的抗体可以特异性识别细胞中的Kif22蛋白,表明Kif22多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度.
- 姜虹羽鲍鹏冀美超付成华董智雄朱长军
- 关键词：驱动蛋白多克隆抗体有丝分裂
- KIF18A杆状病毒表达系统的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的KIF18A蛋白是调节有丝分裂和影响肿瘤发生发展的重要蛋白，本研究旨在建立KIF18A蛋白昆虫杆状病毒表达系统，从而可在体外高效合成KIF18A蛋白。方法先用分子克隆方法构建转移载体，然后通过基因转座作用得到重组杆状病毒，最后将重组杆状病毒转入昆虫细胞Sf-9以高效合成KIF18A蛋白。结果经过DNA测序、倒置显微镜下细胞观测和WesternBlot检测验证分析，证实已成功建立了KIF18A蛋白昆虫杆状病毒表达系统。结论明确了KIF18A杆状病毒表达系统中转移载体构建和重组病毒转染等条件，建立了高效表达KIF18A的杆状病毒表达系统。
- 赵泽栋付成华粱爽爽朱长军潘丽娜
- 关键词：杆状病毒BAC-TO-BAC
